一种含有还原性单糖的溶液中水溶性花生蛋白质浓度的测定方法技术

本发明专利技术公开了一种含有还原性单糖的溶液中水溶性花生蛋白质浓度的测定方法，包括以下步骤：(1)采用乙腈对样品进行前处理；(2)离子色谱测定前处理所得样品中各种还原性单糖的浓度；(3)显色后，紫外‑可见光谱测定各种还原性单糖在562nm的摩尔吸光系数及待测样品在该波长的总吸光度值；(4)基于上述步骤测定的参数值，同时以牛血清蛋白作为花生蛋白的参考标准品，扣除还原性单糖对562nm波长处总吸光度值的贡献，计算得到前处理所得样品中水溶性花生蛋白质的浓度。本发明专利技术排除了样品中不同还原性单糖对水溶性花生蛋白质浓度测定的干扰，实验结果可知，由还原性单糖造成水溶性花生蛋白质浓度的偏高率达到22％～50％。

A method for the determination of water soluble peanut protein concentration in the solution containing reducing monosaccharide

【技术实现步骤摘要】
一种含有还原性单糖的溶液中水溶性花生蛋白质浓度的测定方法
本专利技术属于化学检测
，具体涉及一种含有还原性单糖的溶液中水溶性花生蛋白质浓度的测定方法。
技术介绍
花生是我国产食用油的六大重要原料之一。目前，我国花生的年产量居世界首位，占全球花生总产量的40％以上。除用于食用、出口及作物种子外，每年大约有50～60％的花生用于制备食用油。花生经压榨产油后的剩余物称之为花生粕，其年产量已达到300万吨以上。除碳水化合物和少量脂肪类物质外，花生粕中蛋白质的含量高达50％以上。经有效提取、纯化和精制后，花生蛋白可直接作为淀粉类和肉类制品的天然添加剂，提升食品的营养价值；经蛋白酶水解、分离纯化和精制后，除产生人体所需的8种必需氨基酸外，还可产生多种活性多肽物质，具备增强人体免疫力的显著功效。水溶性蛋白是花生蛋白质中最易提取和利用的蛋白质。为增加水溶性花生蛋白质的提取率，通常采用生物酶(如半纤维素酶、纤维素酶和脂肪酶等)水解花生粕中的聚糖和寡糖，增加花生粕的可及性。然而，酶法辅助提取技术所产生的提取液成分较为复杂，除水溶性蛋白纯化和精本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种含有还原性单糖的溶液中水溶性花生蛋白质浓度的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)取一份含有还原性单糖的溶液样品，用乙腈或丙酮进行稀释，加入乙腈或丙酮的体积是溶液样品体积的2～4倍，待溶液样品中的蛋白质沉淀后，将此溶液样品离心，离心后取上清液用于后续离子色谱的测定；/n(2)离子色谱测定各种糖的标准曲线：/n将阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖的标准物分别溶于超纯水中，稀释成一系列浓度梯度，糖的浓度范围为0.1～2mg/L；/n采用离子色谱确定各种糖的出峰时间、并测定其峰面积，根据已配置糖浓度建立阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖的标准曲线；/n离子色谱所用检测器、色谱...

【技术特征摘要】
1.一种含有还原性单糖的溶液中水溶性花生蛋白质浓度的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取一份含有还原性单糖的溶液样品，用乙腈或丙酮进行稀释，加入乙腈或丙酮的体积是溶液样品体积的2～4倍，待溶液样品中的蛋白质沉淀后，将此溶液样品离心，离心后取上清液用于后续离子色谱的测定；
(2)离子色谱测定各种糖的标准曲线：
将阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖的标准物分别溶于超纯水中，稀释成一系列浓度梯度，糖的浓度范围为0.1～2mg/L；
采用离子色谱确定各种糖的出峰时间、并测定其峰面积，根据已配置糖浓度建立阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖的标准曲线；
离子色谱所用检测器、色谱柱和电极分别为脉冲安培电化学检测器、碳水化合物分析柱和金电极，淋洗液由超纯水和200～250mmol/LNaOH溶液组成，采用梯度洗脱的方式对过滤液中的各种糖进行分离和定量测定；
(3)离子色谱测定上清液中多种单糖的浓度：
用去离子水稀释上清液，然后对上清液进行过滤，按照步骤(2)中离子色谱方法测定过滤液中多种单糖的峰面积；
(4)基于步骤(2)建立的标准曲线，根据步骤(3)色谱图中各种糖的峰面积、去离子水稀释倍数和乙腈稀释倍数，计算出溶液样品中各种还原性单糖的浓度；
(5)紫外-可见光谱测定标准糖溶液的吸光度值：
将商品化的BCA试剂盒中A试剂和B试剂按体积比45:1～50:1进行混合，得到的BCA试剂用作蛋白质和还原性单糖的显色剂；
取浓度为40～50mmol/L且pH5.0～6.0的醋酸-醋酸钠缓冲液0.1～0.15mL、BCA试剂3～4.5mL混合后，置于30～37℃条件下中反应30～45min，反应后倒入宽度为1cm的石英比色皿中，静置后进行紫外-可见光谱的背景扫描，记录562nm波长处的吸光度值；
(6)将阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖的标准物分别溶于浓度为40～50mmol/L且pH5.0～6.0的醋酸-醋酸钠缓冲液中，糖的浓度范围为0.1～8g/L；
按照步骤(5)中的方法进行紫外-可见光谱的样品扫描，记录各种还原性单糖溶液在562nm波长处的吸光度值；
根据朗伯比尔定律，建立标准物溶液的浓度及其在562nm波长处吸光度值之间的线性标准曲线：



其中，为某种糖在562nm处的吸光度值；为某种糖在562nm处的摩尔吸光系数，L/g；CSugar为配置的某种糖的浓度，g/L；
根据测定的吸光度值和配置的糖浓度，某种糖在562nm处的摩尔吸光系数根据等式1进行计算；
(7)紫外-可见光谱测定溶液样品中花生蛋白质的浓度：
另取一份含有还原性单糖的花生蛋白质溶液样品，经浓度为40～50mmol/L且pH5.0～6.0的醋酸-醋酸钠缓冲液稀释5～20倍后，根据步骤(5)和(6)的方法测定溶液样品中水溶性花生蛋白质和还原性单糖在562nm处的总吸光度值
在某一波长处，根据不同物质对吸光度所产生的贡献存在叠加原理可知：



其中，为溶液样品在562nm处的总吸光度值；和分别为阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖和水溶性花生蛋白质在562nm处的吸光度值；
根据步骤(4)所测定出溶液样品中各种还原性单糖的浓度及等式1，溶液样品中水溶性花生蛋白质在562nm处的净...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘婧，罗小林，龚正刚，杨光绪，陈礼辉，黄六莲，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：福建;35