真姬菇菌丝核相染色方法技术

本发明专利技术提供了一种真姬菇菌丝核相染色方法，涉及生物组织学技术领域。上述染色方法包括以下步骤：提供附着有真姬菇菌丝的盖玻片，然后依次对盖玻片上的真姬菇菌丝进行DAPI染色和Calcoflour White染色，随后封片，完成染色。通过上述染色方法能够获得组织结构清晰的真姬菇菌丝细胞核和细胞壁结构图像，可以为真姬菇的生理、遗传和形态学研究提供严谨可靠方法，具有较好的科研应用前景，同时该染色方法还具有可操作性强、可重复性高以及荧光信号质量高的特点。

Nuclear staining of Agaricus blazei mycelium

【技术实现步骤摘要】
真姬菇菌丝核相染色方法
本专利技术涉及生物组织学
，尤其是涉及一种真姬菇菌丝核相染色方法。
技术介绍
菌丝是食用菌的基本结构单位，也是其营养生长的主要模式。菌丝形态是反应食用菌生长情况最直观的参考依据。在菌丝细胞核研究中，一般认为细胞壁与细胞核共同组成菌丝细胞为基本观察单元，特别是菌丝内细胞核的核相变化被认为是食用菌菌丝生长状态的重要观察依据。真姬菇又名玉蕈、蟹味菇、胶玉蘑、鸿喜菇等，是一种大型木质腐生真菌。在自然环境中，一般秋季群生于山毛榉等阔叶树枯木或活立木上。真姬菇味比平菇鲜，肉比滑菇厚，质比香菇韧，口感极佳，还具有独特的蟹香味。而且真姬菇子实体提取物还具有提高免疫力、延缓衰老以及清除体内自由基等功效，是一种优良的珍稀美味食用菌。因此，研究开发一种菌丝核相染色方法并将其应用于真姬菇菌丝核相观察中，对观察到细胞壁和细胞核进行观察，进而为真姬菇的生理、遗传和形态学研究提供严谨可靠方法，变得十分必要和迫切。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种真姬菇菌丝核相染色方法，所述染色方法能够获得组织结构清晰的真姬菇菌丝细胞核和细胞壁结构图像，可以为真姬菇的生理、遗传和形态学研究提供严谨可靠方法，具有较好的科研应用前景，同时该染色方法还具有可操作性强、可重复性高以及荧光信号质量高的特点。本专利技术的第二目的在于提供一种上述真姬菇菌丝核相染色方法在真姬菇菌丝核相观察中的应用。本专利技术提供的一种真姬菇菌丝核相染色方法，所述染色方法包括以下步骤：提供附着有真姬菇菌丝的盖玻片，然后依次对盖玻片上的真姬菇菌丝进行DAPI染色和CalcoflourWhite染色，随后封片，完成染色。进一步的，所述附着有真姬菇菌丝的盖玻片的制备方法包括以下步骤：将盖玻片插入培养有真姬菇菌落的培养基中进行爬片培养，得到附着有真姬菇菌丝的盖玻片。更进一步的，所述盖玻片插入的角度为45度。更进一步的，所述爬片培养在避光条件下进行；优选地，所述爬片培养的时间为8～10d，优选为10d；优选地，所述爬片培养的温度为20～25℃，优选为22℃。进一步的，所述DAPI染色步骤中，所用的DAPI染色液的浓度为3～8μg/mL，优选为5μg/mL；优选地，所述DAPI染色液的滴加量为180～220μL。更进一步的，所述DAPI染色在0～4℃条件下进行；优选地，所述DAPI染色的时间为20～30min。进一步的，所述CalcoflourWhite染色步骤中，所用的CalcoflourWhite染色液的浓度为0.001～0.01‰，优选为0.002‰；优选地，所述CalcoflourWhite染色液的滴加量为30～80μL。更进一步的，所述CalcoflourWhite染色的染色时间为5～10min。进一步的，所述染色方法还包括在CalcoflourWhite染色后封片前，对真姬菇菌丝进行洗涤的步骤；优选地，所述洗涤为PBS缓冲液冲洗；优选地，所述洗涤的时间为1～3min，优选为2min。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术提供的真姬菇菌丝核相染色方法，该染色方法包括以下步骤：提供附着有真姬菇菌丝的盖玻片，然后依次对盖玻片上的真姬菇菌丝进行DAPI染色和CalcoflourWhite染色，随后封片，完成染色。上述染色过程中，DAPI(4'，6-二脒基-2-苯基吲哚，4'，6-diamidino-2-phenylindole)染色细胞核；CalcoflourWhite(4,4'-双[(4-苯胺基-6-羟乙基氨基-1,3,5-三嗪-2-基)氨基]二苯乙烯-2,2'-二磺酸二钠盐)染色细胞壁；通过上述染色方法能够获得组织结构清晰的真姬菇菌丝细胞核和细胞壁结构图像，可以为真姬菇的生理、遗传和形态学研究提供严谨可靠方法，具有较好的科研应用前景，同时该染色方法还具有可操作性强、可重复性高以及荧光信号质量高的特点。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为本专利技术实施例1提供的真姬菇菌丝的快速检测方法染色操作图示；图2为本专利技术实施例5提供的真姬菇菌丝染色后的显微图像(A、B、C和D为经本专利技术提供的方法染色后用蔡司Axioobserver荧光显微镜拍摄的真姬菇菌丝细胞结构；其中：a为菌丝内细胞壁，b为细胞核，c为锁状联合内细胞壁)；图3为本专利技术对比例1提供的真姬菇菌丝染色后的显微图像(b为细胞核结构，c为锁状联合内细胞壁)；图4为本专利技术实施例6提供的真姬菇菌丝染色后的显微图像(A、B为染色后用蔡司Axioobserver荧光显微镜拍摄的真姬菇菌丝细胞结构；a为菌丝内细胞壁，b为细胞核，c为锁状联合内细胞壁)。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。根据本专利技术的一个方面，一种真姬菇菌丝核相染色方法，所述染色方法包括以下步骤：提供附着有真姬菇菌丝的盖玻片，然后依次对盖玻片上的真姬菇菌丝进行DAPI染色和CalcoflourWhite染色，随后封片，完成染色。本专利技术提供的真姬菇菌丝核相染色方法，该染色方法包括以下步骤：提供附着有真姬菇菌丝的盖玻片，然后依次对盖玻片上的真姬菇菌丝进行DAPI染色和CalcoflourWhite染色，随后封片，完成染色。上述染色过程中，DAPI(4'，6-二脒基-2-苯基吲哚，4'，6-diamidino-2-phenylindole)染色细胞核；CalcoflourWhite(4,4'-双[(4-苯胺基-6-羟乙基氨基-1,3,5-三嗪-2-基)氨基]二苯乙烯-2,2'-二磺酸二钠盐)染色细胞壁；通过上述染色方法能够获得组织结构清晰的真姬菇菌丝细胞核和细胞壁结构图像，可以为真姬菇的生理、遗传和形态学研究提供严谨可靠方法，具有较好的科研应用前景，同时该染色方法还具有可操作性强、可重复性高以及荧光信号质量高的特点。在本专利技术的一种优选实施方式中，所述附着有真姬菇菌丝的盖玻片的制备方法包括以下步骤：将盖玻片插入培养有真姬菇菌落的培养基中进行爬片培养，得到附着有真姬菇菌丝的盖玻片。在上述优选实施方式中，所述爬片培养的时间为7～12d，优选为10d；作为一种优选的实施方式，所述爬片培养的时间为7～12d，时间多短菌丝量太少，不方便染色观察，时间久了菌丝又太密了影响染色效果，经研究得到爬片培养的时间在10d效果较佳。上本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种真姬菇菌丝核相染色方法，其特征在于，所述染色方法包括以下步骤：/n提供附着有真姬菇菌丝的盖玻片，然后依次对盖玻片上的真姬菇菌丝进行DAPI染色和Calcoflour White染色，随后封片，完成染色。/n

【技术特征摘要】
1.一种真姬菇菌丝核相染色方法，其特征在于，所述染色方法包括以下步骤：
提供附着有真姬菇菌丝的盖玻片，然后依次对盖玻片上的真姬菇菌丝进行DAPI染色和CalcoflourWhite染色，随后封片，完成染色。


2.根据权利要求1所述的染色方法，其特征在于，所述附着有真姬菇菌丝的盖玻片的制备方法包括以下步骤：
将盖玻片插入培养有真姬菇菌落的培养基中进行爬片培养，得到附着有真姬菇菌丝的盖玻片。


3.根据权利要求2所述的染色方法，其特征在于，所述盖玻片插入的角度为45度。


4.根据权利要求2所述的染色方法，其特征在于，所述爬片培养在暗培养条件下进行；
优选地，所述爬片培养的时间为7～12，优选为10d；
优选地，所述爬片培养的温度为20～25℃，优选为22℃。


5.根据权利要求1所述的染色方法，其特征在于，DAPI染色步骤中，所用的DAPI染色液的浓度为3～8μg/mL，优选为5μg/mL；
优...

【专利技术属性】
技术研发人员：周陈力，万佳宁，鲍大鹏，吴莹莹，杨瑞恒，陈洪雨，李燕，茅文俊，王莹，汪滢，
申请(专利权)人：上海市农业科学院，
类型：发明
国别省市：上海;31