一种ALV-K的ELISA试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术公开了一种ALV‑K的ELISA检测试剂盒及其检测方法。该蛋白的编码序列如SEQ ID NO.1所示。通过编码SEQ ID NO.1的基因克隆到表达载体上，得到重组表达载体；将重组表达载体转化到宿主细胞中进行表达纯化，得到重组HIS‑K‑gp85蛋白。以重组HIS‑K‑gp85蛋白为抗原免疫大耳兔获得兔多抗KE7，并以此建立了一种ALV‑K的ELISA检测试剂盒及其检测方法。本发明专利技术通过对gp85基因重组，成功构建重组表达载体pET‑28a‑ALV‑K‑gp85，获得了可溶性重组HIS‑K‑gp85蛋白；本发明专利技术建立的ALV‑K的ELISA检测方法，可信度高，特异性强，敏感度高，重复性好。

An ELISA kit for alv-k and its detection method

【技术实现步骤摘要】
一种ALV-K的ELISA试剂盒及其检测方法
本专利技术属于重组基因蛋白及病毒检测
，具体涉及一种ALV-K的ELISA试剂盒及其检测方法。
技术介绍
禽白血病是由禽白血病病毒(ALV)引起的侵害多器官的肿瘤性传染病。根据囊膜糖蛋白gp85的特异性，ALV根据宿主范围和病毒的交叉可以分为11个亚群(A-K)，其中A-J和K亚群主要对鸡致病。随着时间的推移，禽白血病在我国的发生情况愈发复杂，ALV-K亚群禽白血病病毒为近几年从我国地方品种鸡群中发现的新亚群禽白血病病毒。K亚型病毒在不同鸡群中被发现，表明K亚群病毒在鸡群中的感染呈增长的趋势，可能成为继J亚群禽白血病病毒之后成为我国养鸡业新的重大潜在威胁。近年来国家在禽白血病研究投入了大量的资金，但是一直没有相关的疫苗和治疗药物问世，仅能依靠淘汰阳性鸡达到净化鸡群。目前，鸡场禽白血病的净化主要依靠美国进口的ELISA检测试剂盒，小型鸡场及农户无法承担昂贵的价格，使得禽白血病的净化变得困难。国内研发的一些试剂盒在敏感性和符合度上明显弱于进口试剂盒。因此效果好、性价比高的的本国试剂盒在鸡群本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组HIS-K-gp85蛋白，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，编码所述重组HIS-K-gp85蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种重组HIS-K-gp85蛋白，其特征在于，氨基酸序列如SEQIDNO.4所示，编码所述重组HIS-K-gp85蛋白的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。


2.一种包含如SEQIDNO:1所示核苷酸序列的重组表达载体。


3.一种包含如权利要求2所述重组表达载体的宿主细胞。


4.一种重组HIS-K-gp85蛋白的制备方法，其特征在于，通过将如SEQIDNO:1所示的基因克隆到表达载体上，得到重组表达载体；将所述重组表达载体转化到宿主细胞中进行表达，纯化，得到所述重组HIS-K-gp85蛋白。


5.根据权利要求4所述重组HIS-K-gp85蛋白的制备方法，其特征在于，所述原始表达载体为pET28a，所述宿主细胞为E.coliBL21。


6.根据权利要求4所述重组HIS-K-gp85蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)HIS-K-gp85基因扩增：以如SEQIDNO:1所示的基因为模板，以gp85-F和gp85-R为引物，对HIS-K-gp85基因进行PCR扩增；扩增的片段用琼脂糖凝胶回收试剂盒进行回收，并进行TOPO克隆，构建克隆载体TOPO-ALV-K-gp85；
(2)重组表达载体构建：将克隆载体TOPO-ALV-K-gp85和pET-28a质粒分别进行双酶切，回收gp85片段，与经酶切的pET-28a片段连接，连接之后的产物转化至DH5α菌细胞内，培养后挑选阳性菌落，经鉴定，得到重组表达载体pET-28a-ALV-K-gp85；
(3)诱导表达：将所述重组表达载体pET-28a-ALV-K-gp85转化进E.coliBL21菌株中，复苏和培养后，挑选阳性并经鉴定正确的菌落进行诱导表达；
(4)重组HIS-K-gp...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈雪阳，梁雄燕，方春，杨玉莹，
申请(专利权)人：长江大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42