一种提高木质纤维素水解率的融合蛋白、构建方法、表达及应用技术

本发明专利技术涉及一种提高木质纤维素水解率的融合蛋白，所述融合蛋白同时包含：(1)内切纤维素酶EGⅡ，和(2)辅助蛋白SwoⅠ及其结构域；所述融合蛋白是将内切纤维素酶EGⅡ与辅助蛋白SwoI及其结构域通过(GGGGS)

A fusion protein for improving the hydrolysis rate of lignocellulose, its construction method, expression and Application

【技术实现步骤摘要】
一种提高木质纤维素水解率的融合蛋白、构建方法、表达及应用
本专利技术属于生物
，尤其是一种提高木质纤维素水解率的融合蛋白、构建方法、表达及应用。
技术介绍
木质纤维素是地球上含量最丰富，最有潜力的可再生资源之一，但其复杂的网状结构阻碍了它的高效酶解与利用，目前研究主要集中在对纤维素降解酶系进行表达优化、理性改造等，以提高纤维素酶的表达量和酶活。此外挖掘新型纤维素酶、辅助蛋白以及构建高效纤维素降解酶系能有效解决木质纤维素高效酶解和利用的问题。一个构建成功的双功能融合蛋白会比原蛋白活性有较大程度的提高，实现蛋白功能的多样化。有研究者将来自于牛瘤胃中细菌的一种纤维素酶(Cel9E)和木聚糖酶(Xyn10A)融合获得融合酶Cel9E-Xyn10A，融合酶Cel9E-Xyn10A对纤维素和木聚糖的催化活性较原酶Cel9E和Xyn10A分别提高47％和121％。正是这种优势，人工构建的融合蛋白得到了广泛的应用。蛋白swollenin是一种首次在里氏木霉(Trichodermareesei)中发现的与植物β-expansin蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提高木质纤维素水解率的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白同时包含：/n(1)内切纤维素酶EGⅡ，和/n(2)辅助蛋白SwoⅠ及其结构域；/n所述融合蛋白是将内切纤维素酶EGⅡ与辅助蛋白SwoI及其结构域通过(GGGGS)

【技术特征摘要】
1.一种提高木质纤维素水解率的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白同时包含：
(1)内切纤维素酶EGⅡ，和
(2)辅助蛋白SwoⅠ及其结构域；
所述融合蛋白是将内切纤维素酶EGⅡ与辅助蛋白SwoI及其结构域通过(GGGGS)2柔性连接肽构建而成。


2.根据权利要求1所述的提高木质纤维素水解率的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白为E-B、E-BC、E-S。


3.根据权利要求1或2所述的提高木质纤维素水解率的融合蛋白，其特征在于：所述内切纤维素酶EGⅡ来源于里氏木霉QM9414；
或者，所述辅助蛋白SwoⅠ及其结构域来源于里氏木霉，其NCBI基因ID为AJ245918.1，其结构域基因序列分别是：Swob为Expansin-likeEG45编码基因，Swobc为SwoI去除CBM与Linker区域的编码基因，SwoI为SwoI去除信号肽的编码基因。


4.如权利要求1至3任一项所述的融合蛋白的编码基因，其特征在于：所述编码基因的获取方法的步骤如下：
S1.以里氏木霉QM9414的基因组DNA为模板，以上游引物和下游引物作为扩增引物，所述上游引物和下游引物为SEQNO.1、SEQNO.2、SEQNO.3、SEQNO.4、SEQNO.5、SEQNO.6，进行PCR扩增，得到Swob、Swobc、SwoI编码基因片段，根据毕赤酵母密码子偏好性进行密码子优化，得到优化后的基因；
S2.通过重叠PCR将进行密码子优化后的内切纤维素酶通过柔性连接肽(GGGGS)2与密码子优化后的基因，构成融合基因e-b、e-bc、e-s，即为编码基因。

【专利技术属性】
技术研发人员：马立娟，杜丽平，肖冬光，张安琪，崔馨予，李弘轩，于爱群，陈叶福，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：天津;12