【技术实现步骤摘要】
一种功能化磷酸钙基因递送系统的制备方法及其应用
本专利技术涉及药物制剂领域和生物医药
，具体涉及一种功能化磷酸钙基因递送系统的制备方法和应用。
技术介绍
基因治疗是将治疗基因递送到细胞中，通过影响或替代功能异常的基因，实现基因编辑并纠正遗传突变从而治疗疾病的一种生物医学治疗方法。基因治疗的关键是构建合适的载体系统以实现治疗基因的安全、稳定和高效递送。在此过程中，基因递送系统至关重要。目前，常用的基因载体系统主要有病毒载体和非病毒载体两大类。病毒载体最大的优势是具有较高的转染效率。最常用的两类病毒载体是腺病毒相关病毒载体和逆转录病毒载体[JouralofControlRelease,2012,161(2):377-388；Biochemistry(Mosc),2016,81(7):700-708]。在实际应用过程中，病毒载体的免疫原性和诱发肿瘤的风险可能导致严重的临床不良事件，使其应用受到极大限制[CurrentGeneTherapy,2011,11(4):321-330；BiotechnologyandBioe...
【技术保护点】
1.一种功能化磷酸钙基因递送系统的制备方法，其特征在于以具有氧化还原响应特性的二硫键连接阿仑膦酸和甘露醇片段得到含有二硫键的甘露醇化阿仑膦酸衍生物，所得含有二硫键的甘露醇化阿仑膦酸衍生物进一步修饰于磷酸钙纳米粒表面并负载基因从而形成稳定的功能化磷酸钙基因递送系统；制备方法具体包括以下步骤：/n(1)制备含有二硫键的甘露醇化阿仑膦酸衍生物Man-SS-Aln/n①室温下将阿仑膦酸钠(341.6mg，1.26mmol)溶于10mL蒸馏水中，使用1M NaOH水溶液调节pH为8；将相应配比的SPDP溶于10mL乙腈中，分4次加至反应液中，每次加入前用1MNaOH水溶液调节pH为8...
【技术特征摘要】
1.一种功能化磷酸钙基因递送系统的制备方法，其特征在于以具有氧化还原响应特性的二硫键连接阿仑膦酸和甘露醇片段得到含有二硫键的甘露醇化阿仑膦酸衍生物，所得含有二硫键的甘露醇化阿仑膦酸衍生物进一步修饰于磷酸钙纳米粒表面并负载基因从而形成稳定的功能化磷酸钙基因递送系统；制备方法具体包括以下步骤：
(1)制备含有二硫键的甘露醇化阿仑膦酸衍生物Man-SS-Aln
①室温下将阿仑膦酸钠(341.6mg，1.26mmol)溶于10mL蒸馏水中，使用1MNaOH水溶液调节pH为8；将相应配比的SPDP溶于10mL乙腈中，分4次加至反应液中，每次加入前用1MNaOH水溶液调节pH为8，用时2h；SPDP溶液滴加结束后，在特定温度下搅拌反应一定时间；减压蒸除反应液中的乙腈，加入4倍体积的甲醇，室温下静置过夜后抽滤，真空干燥后得到白色固体SPDP-Aln；
②室温下将SPDP-Aln(100.8mg，205.58μmol)溶于5mL蒸馏水中，分3次加入相应配比的Man-Cys，特定温度下搅拌反应一定时间；反应液用300mLⅢ级水快速透析1h后，冷冻干燥得到白色固体Man-SS-Aln；
(2)基因递送系统制备溶液的配制：溶液a由钙盐和水配制，钙盐浓度为2.5M；溶液b由磷酸盐、氯化钠、缓冲剂和水配制，磷酸盐浓度为1.5mM，氯化钠浓度为0.28mM，缓冲剂浓度为0.05mM、pH为7.05；溶液c由甘露醇化阿仑膦酸衍生物Man-SS-Aln和水配制，浓度为0.1～500μM；
(3)将特定基因与溶液a混合，用双蒸水将其稀释为溶液a体积的十倍后，与溶液b等体积混合均匀，再加入与溶液b等体积的...
【专利技术属性】
技术研发人员：张邦乐，许经良，何炜，马茜茜，王伟，周四元，宦梦蕾，李晨，
申请(专利权)人：中国人民解放军第四军医大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61
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