【技术实现步骤摘要】
一种利用甲醇还原NAD类似物的方法
本专利技术属于生物
，涉及辅酶烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)类似物的酶催化还原方法及其应用，具体地说，是以甲醇为还原剂，在酶催化下将NAD类似物转化为其还原态，并可被其他酶用做辅酶应用于还原反应。
技术介绍
烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)及其还原态NADH是生命过程中的重要辅酶，参与生命体中的氧化还原代谢及其他一系列重要生物化学过程。这些辅酶可用于生产手性化学品及制备同位素标记物。由于很多氧化还原酶都利用NADH或NADPH作为辅酶，任何改变NAD浓度及其氧化还原状态的操作都会对细胞产生全局性影响，很难在辅酶水平对生物体系中特定的氧化还原酶进行控制。由于NADH可被代谢网络中多种途径消耗，影响了目标途径对还原力的利用效率。使用NAD类似物传递还原力时，由于类似物只能被突变型氧化还原酶识别，从而在辅酶水平对目标氧化还原过程进行调控，对生物催化和合成生物学研究具有重要意义(JiDB,etal.JAmChemSoc,2011,133,20857-20862；WangL,etal.ACSCa...
【技术保护点】
1.一种NAD类似物的还原方法，其特征在于：以甲醇为还原剂，可转化甲醇的酶为催化剂，在pH 5-8的缓冲体系中，10-40℃下，反应2-120min，催化还原NAD类似物，获得还原型NAD类似物，同时将甲醇氧化成甲醛；/n所述被还原的NAD类似物为NCD、NFCD、NClCD、NBrCD、NMeCD、NGD、NTD和NUD中的一种或两种以上，它们的化学结构如下：/n
【技术特征摘要】
1.一种NAD类似物的还原方法，其特征在于：以甲醇为还原剂，可转化甲醇的酶为催化剂，在pH5-8的缓冲体系中，10-40℃下，反应2-120min，催化还原NAD类似物，获得还原型NAD类似物，同时将甲醇氧化成甲醛；
所述被还原的NAD类似物为NCD、NFCD、NClCD、NBrCD、NMeCD、NGD、NTD和NUD中的一种或两种以上，它们的化学结构如下：
2.按照权利要求1所述的方法，其特征还在于：所述可利用甲醇的酶为具有以甲醇为还原剂，催化还原NAD类似物为相应还原态的活性蛋白质。
3.按照权利要求1所述的方法，其特征还在于：所述可利用甲醇的酶为经过基因工程改造的甲醇脱氢酶突变体；可利用甲醇的酶为甲醇脱氢酶突变体BsMDH-Y171G，BsMDH-Y171G/A238N，BsMDH-N240A/A243K，BsMDH-K242Y/A243M，BsMDH-I196Q，BsMDH-D195E/A238V，BmMDH-V210S，BmMDH-N123S，BmMDH-V210T/M219K，BmMDH-D212E/M219R，BmMDH-Q217E或BmMDH-D153T/V210S中的一种或两种以上。
4.按照权利要求3所述的方法，所用NAD类似物为NCD时，可利用甲醇的甲醇脱氢酶突变体为BsMDH-D195E/A238V，BmMDH-V210T/M219K或BmMDH-Q217E的一种或两种以上；所用NAD类似物为NFCD时，可利用甲醇的甲醇脱氢酶突变体为BmMDH-N123S，BmMDH-V210T/M219K，BmMDH-Q217E或BmMDH-D153T/V210S的一种或两种以上；所用NAD类似物为NClCD时，可利用甲醇的甲醇脱氢酶突变体为BsMDH-D195E/A238V，BmMDH-N123S或BmMDH-Q217E的一种或两种以上；所用NAD类似物为NBrCD时，可利用甲醇的甲醇脱氢酶突变体为BmMDH-V210S或BmMDH-D212E/M219R的一种或两种；所用NAD类似物为NMeCD时，可利用甲醇的甲醇脱氢酶突变体为BmMDH-N123S或BmMDH-V210T/M219K的一种或两种；所用NAD类似物为NUD时，可利用甲醇的甲醇脱氢酶突变体为BsMDH-I196Q，BmMDH-V210S或BmMDH-D153T/V210S中的一种或两种以上；所用NA...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵宗保，郭潇佳，刘武军，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁;21
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