白头翁汤在制备降低肠微血管内皮细胞TLR-4蛋白表达的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了白头翁汤在降低肠微血管内皮细胞TLR‑4蛋白表达药物中的应用，所述白头翁汤的原料药及重量份为：黄连10‑15份，黄柏5‑15份，秦皮15‑30份，白头翁15‑30份。本发明专利技术所述的白头翁汤显著降低TLR‑4、TRAF6、P‑ERK1/2蛋白表达，效果显著。

Application of Baitouweng Decoction in the preparation of drugs to reduce the expression of TLR-4 protein in intestinal microvascular endothelial cells

【技术实现步骤摘要】
白头翁汤在制备降低肠微血管内皮细胞TLR-4蛋白表达的药物中的应用
本专利技术涉及白头翁汤的新用途，特别涉及白头翁汤在降低肠微血管内皮细胞TLR-4蛋白表达的药物中的应用。
技术介绍
细菌病导致食品动物死亡率居各类疾病之首，多年来在防治细菌病的方法上，还是过多的选择抗生素治疗，但抗生素带来的药物残留及耐药性等问题也随之而来。所以具有残留少、毒性低、不易产生耐药性等优点的中兽药成为替代抗生素的首选。微血管内皮细胞(Microvascularendothelialcells，MVECs)是致病因子最初作用的靶细胞，其能适应并调节器官和整个机体的活动。TLR-4是人类中由TLR4基因编码的蛋白质。TLR4是一种跨膜蛋白，是toll样受体家族的成员，属于模式识别受体(PRR)家族。其活化导致细胞内炎性细胞因子的产生。TRAF6蛋白是TNF受体相关因子(TRAF)蛋白家族的成员。TRAF蛋白与TNF受体家族成员的信号转导相关并介导其信号转导，该蛋白质介导来自Toll家族成员的信号传导，可以响应炎性因子的激活。MAPK1/ERK2和MAPK3/ERK1是在MAPK/ERK级联中起重要作用的2种MAPK。取决于细胞环境，MAPK/ERK级联通过调节转录，翻译，细胞骨架重排介导多种生物学功能，例如细胞生长，粘附，存活和分化。MAPK参与指导细胞对多种刺激的反应，例如有丝分裂原，渗透压，和促炎细胞因子。已经发现了大约160种用于ERK的底物。许多这些底物定位于细胞核中，并且似乎参与刺激时转录的调节。然而，在胞质溶胶以及其他细胞器中发现了其他底物，并且这些底物负责细胞凋亡的过程。
技术实现思路
本专利技术目的在于公开一种中药组合物及其新用途。本专利技术目的是通过如下技术方案实现的：白头翁汤在制备降低肠微血管内皮细胞TLR-4蛋白表达的药物中的应用，所述白头翁汤的原料药及重量份为：黄连10-15份，黄柏5-15份，秦皮15-30份，白头翁15-30份。进一步的，所述的药物是指动物的药物。进一步的，所述的肠微血管内皮细胞的蛋白还包括TRAF6。进一步的所述的肠微血管内皮细胞的蛋白还包括P-ERK1/2。白头翁汤的原料药及重量份为：黄连15份，黄柏10份，秦皮20份，白头翁20份；或黄连12份，黄柏15份，秦皮25份，白头翁20份，或黄连10份，黄柏10份，秦皮15份，白头翁20份。白头翁汤剂型为胶囊剂、颗粒剂、片剂、丸剂、散剂等口服制剂。白头翁汤的制备方法为：全部药味加水煎煮，滤过，浓缩，干燥，加辅料适量，混匀，分装。所述的白头翁汤的制备方法为：将原料药，加水浸泡20-60min，优选为30min，煎煮30min，过滤后收集药液后，加水继续煎煮30min，过滤，收集药液，加水继续煎煮30min，过滤，将3次所得的滤液合并，过滤浓缩至浓度为1g/mL，于80℃干燥箱内进行干燥，待药液烘干既得。还可以为：所述的白头翁汤的制备方法为：全部药味加水煎煮2次，第一次60min，第2次30min,滤过，浓缩，喷雾干燥，分装。还可以为：白头翁汤的制备方法为：全部药味加水煎煮，滤过，浓缩，加乙醇，醇沉，上清液挥去乙醇，浓缩，加辅料适量，干燥，混匀，制粒,分装。本专利技术所述的白头翁汤显著降低TLR-4、TRAF6、P-ERK1/2蛋白表达，效果显著。附图说明：图1BCA蛋白浓度标准曲线；图2TLR-4、TRAF6、P-ERK表达情况；图3TLR-4、TRAF6、P-ERK相对表达量灰度值分析A：TLR-4灰度值分析B：TRAF6灰度值分析C：P-ERK灰度值分析。具体实施方式下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本专利技术。实施例1：称取黄连15g、黄柏10g、秦皮20g、白头翁20g，将称取好的中药材置于熬药罐中，加入足量蒸馏水浸泡30min，用武火(快火)煮沸后改为文火(慢火)继续煎煮30min，使用四层纱布趁热过滤后收集药液。向罐中剩余的药渣中加入足量蒸馏水，用武火煮沸后改为文火继续煎煮30min，用新的纱布趁热过滤，收集药液，重复上述步骤一次，最后将三次所得的滤液合并，用抽滤装置将合并的滤液进行抽滤以去掉残留的药渣。利用旋转蒸发仪将白头翁汤水煎液浓缩至65mL，使其浓度为1g/mL；将浓缩好的白头翁汤水煎液倒入干净的玻璃平皿中，于80℃干燥箱内进行干燥处理，待药液烘干后对其进行刮取得到白头翁汤的中药粉末，于室温冷却后称重，密封置于-20℃冰箱中保存备用,简称PD。实施例21材料1.1主要试剂1.2主要仪器1.3主要试剂配制(1)DMEM基础培养基DMEM干粉一袋NaHCO33.7gddH2O1.0L待完全溶解后，用1.0mol·L-1的NaOH和1.0mol·L-1的HCL调整其PH值至7.2～7.4，并定容至1.0L。过滤除菌后分装，于4℃保存备用。(2)D-Hank’s液D-Hank’s干粉一袋NaHCO30.35gddH2O1.0L待完全溶解后，用1.0mol·L-1的NaOH和1.0mol·L-1的HCL调整其PH值至7.2～7.4，并定容至1.0L。过滤除菌后分装，于4℃保存备用。(3)20％FBS的DMEM完全培养基将溶液配制成含2％FBS的维持培养基100mL，现用现配,所配溶液需在一周内使用完。22.1RIMVECs的原代培养取5-10只1-3日龄的SD大鼠，处死后迅速将其泡入75％的酒精中消毒，在固定板上将其固定后从其腹部左侧使用高压后的剪刀镊子取出空肠，放置到含有1％双抗的预冷PBS中，清洗一遍后，将肠管纵向剖开后放置到另一孔清洁的含1％双抗的PBS中清洗3遍，之后用含5％双抗的PBS洗两遍，以上所有步骤在冰板上进行，并注意使用无菌器械。将清洗好的肠管移入高压过的EP管中，用剪刀剪碎，直到其可以通过1mL枪头为止。收集剪碎的肠管加入5mLPBS吹匀后，800rpm离心3min，离心2-3遍，直至黄色油状物质去除干净为止。将离心后的肠管收集，加入0.2％的II型胶原酶5mL置于37℃培养箱中消化20-30min，期间每三分钟用移液枪吹打一次，使其充分消化。与显微镜下观察，当看到肠绒毛被消化成单细胞后，使用完全培养基终止II型胶原酶的消化，1200rpm离心3min。离心后用PBS吹悬，依次通过50目、200目、400目的细胞筛，尽可能多的保留单细胞，过筛过程中不要吹打，以免损伤细胞。将过筛后的液体1200rpm离心3min，弃去上清后，用完全培养基吹悬，接种于细胞培养皿中。4h后换液可见多边形细胞展开，细胞培养成功。2.2RIMVECs的传代培养当原代细胞长至80-90％时，需要传代，使用预热的D-Hank’s清洗三遍，洗去细胞分泌物及死细胞。使用浓度本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.白头翁汤在制备降低肠微血管内皮细胞TLR-4蛋白表达的药物中的应用，所述白头翁汤的原料药及重量份为：黄连10-15份，黄柏5-15份，秦皮15-30份，白头翁15-30份。/n

【技术特征摘要】
1.白头翁汤在制备降低肠微血管内皮细胞TLR-4蛋白表达的药物中的应用，所述白头翁汤的原料药及重量份为：黄连10-15份，黄柏5-15份，秦皮15-30份，白头翁15-30份。


2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述的药物是指动物的药物。


3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述的肠微血管内皮细胞的蛋白还包括TRAF6。


4.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述的肠微血管内皮细胞的蛋白还包括P-ERK1/2。


5.如权利要求2所述的应用，其特征在于白头翁汤的原料药及重量份为：黄连15份，黄柏10份，秦皮20份，白头翁20份；或黄连12份，黄柏15份，秦皮25份，白头翁20份，或黄连10份，黄柏10份，秦皮15份，白头翁20份。


6.如权利要求1至5任一所述的应用，其特征在于，白头翁汤剂型为胶囊剂、颗粒剂、片剂、丸剂、散剂等口服制剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：董虹，蒋林树，刘晓晔，颜紫骐，穆祥，王芸，
申请(专利权)人：北京农学院，
类型：发明
国别省市：北京;11