本公开涉及包含靶向的嵌合抗原受体的工程改造的细胞，诸如T细胞。在某些实施方案中，当T细胞抗原的内源性表达在所述T细胞中被敲低或降低时，T细胞靶向的嵌合抗原受体(CAR)以更高的水平表达。在某些实施方案中，所述工程改造的细胞是，与其中所述T细胞抗原的表达未改变或降低的类似定位的免疫调节细胞相比，在使得降低T细胞抗原表达导致嵌合抗原受体表达增加的条件下，经遗传修饰以阻止或减少T细胞抗原表达的免疫调节细胞，或含有降低或敲低T细胞mRNA表达的核酸的免疫调节细胞。在某些实施方案中，T细胞抗原包括但不限于CD5、CD7和CD3。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】T细胞抗原靶向的嵌合抗原受体(CAR)以及在细胞疗法中的用途相关申请的交叉引用本申请要求2017年6月12日提交的美国临时申请号62/518,588的权益。此申请的全部内容特此出于所有目的以引用的方式并入。关于联邦政府资助的研究或开发的声明本专利技术是在美国国立卫生研究院授予的授权1R43CA192710-01在政府支持下完成的。政府对本专利技术享有某些权利。经由办公室电子提交系统(EFS-WEB)以文本文件形式提交的材料的参考引用与本申请相关联的序列表以文本文件格式代替纸质副本提供，并且特此以引用的方式并入本说明书中。含有序列表的文本文件的名称是17172PCT_ST25.txt。文本文件是11KB，在2018年6月12日创建，并且经由EFS-Web电子提交。背景遗传修饰的T细胞的过继转移是产生抗肿瘤免疫应答的有前途的方法。据报道，在施用制备性化疗方案后，经过遗传工程改造以表达能够识别B细胞抗原CD19的嵌合抗原受体(CAR)的自体T细胞可使淋巴瘤消退。Kochenderfer等,Blood.2010,116(20):4099-102。然而，由于缺乏T淋巴母细胞特异性表面抗原，T细胞恶性肿瘤的治疗变得复杂。因此，产生靶向恶性T细胞的CART细胞有被杀死的危险，即CART细胞自毁。因此，它们针对靶向的癌症T细胞的活化受到损害。因此，需要确定改进的方法。CD5是泛T细胞标志物，其常常在大多数T细胞恶性肿瘤中过表达。正常细胞的CD5表达被认为仅限于胸腺细胞、外周血T细胞和被称为B-1细胞的B淋巴细胞小亚群。Chen等报道使用抗CD5嵌合抗原受体的攻击性T细胞恶性肿瘤的临床前靶向。Leukemia,2017,31(10):2151–2160。此报道表明由于固有的CD5表达，在工程改造的CART细胞中存在杀伤行为。还参见Mamonkin等,Blood.2015,126(8):983–92、WO2016/172606、WO2016/138491、WO2017/146767和标题为AutologousT-CellsExpressingaSecondGenerationCARforTreatmentofT-CellMalignanciesExpressingCD5Antigen(MAGENTA)的ClinicalTrials.govIdentifierNCT03081910。本文引用的参考文献不是对现有技术的承认。
技术实现思路
本公开涉及包含靶向的嵌合抗原受体的工程改造的细胞，诸如T细胞。在某些实施方案中，当T细胞抗原的内源性表达在所述T细胞中被敲低或降低时，T细胞靶向的嵌合抗原受体(CAR)以更高的水平表达。在某些实施方案中，所述工程改造的细胞是，与其中T细胞抗原的表达未改变或降低的类似定位的免疫调节细胞相比，在使得降低T细胞抗原表达导致嵌合抗原受体表达增加的条件下，经遗传修饰以阻止或降低T细胞抗原表达的免疫调节细胞，或含有降低或敲低T细胞mRNA表达的核酸的免疫调节细胞。在某些实施方案中，T细胞抗原包括但不限于CD5、CD7和CD3。在某些实施方案中，本公开涉及包含T细胞抗原靶向的嵌合抗原受体的工程改造的细胞。在某些实施方案中，所述工程改造的细胞是经遗传修饰以阻止或减少T细胞抗原表达的免疫调节细胞，或含有降低或敲低T细胞抗原mRNA表达的核酸的免疫调节细胞。在某些实施方案中，本公开涉及管理与异常T细胞病状相关联的病状(诸如治疗T细胞恶性肿瘤)的方法，所述方法包括向诊断患有T细胞恶性肿瘤的受试者施用具有T细胞抗原靶向的嵌合抗原受体(CARS)的工程改造的细胞，从而降低天然T细胞抗原表面表达。在某些实施方案中，与其中T细胞抗原的表达未改变或降低的类似定位的免疫调节细胞相比，T细胞抗原的表达降低导致免疫调节细胞(诸如T细胞)上包含T细胞抗原识别结构域的嵌合抗原受体的表达增加。在某些实施方案中，本公开涉及包含CD5、CD7和/或CD3靶向的嵌合抗原受体的工程改造的细胞。在某些实施方案中，所述工程改造的细胞是经遗传修饰以阻止或减少CD5、CD7和/或CD3表达的免疫调节细胞，或含有降低或敲低CD5、CD7和/或CD3mRNA表达的核酸的免疫调节细胞。在某些实施方案中，本公开涉及管理与异常T细胞病状相关联的病状(诸如治疗T细胞恶性肿瘤)的方法，所述方法包括向诊断患有T细胞恶性肿瘤的受试者施用具有CD5、CD7和/或CD3靶向的嵌合抗原受体(CARS)的工程改造的细胞，从而降低天然CD5、CD7和/或CD3表面表达。在某些实施方案中，与其中CD5、CD7和/或CD3的表达未改变或降低的类似定位的免疫调节细胞相比，CD5、CD7和/或CD3的表达降低导致免疫调节细胞(诸如T细胞)上包含CD5、CD7和/或CD3抗原识别结构域的嵌合抗原受体的表达增加。在某些实施方案中，本公开提供了用于血液恶性肿瘤的CD5、CD7和/或CD3靶向的嵌合抗原受体(CARS)、其组合物及其使用方法。在某些实施方案中，本公开提供了工程改造的嵌合抗原受体多肽，其包含：信号肽，CD5、CD7和/或CD3抗原识别结构域，铰链区，跨膜结构域，至少一个共刺激结构域和信号传导结构域。在某些实施方案中，本公开提供了工程改造的嵌合抗原受体多肽或多核苷酸，其编码具有对CD5具有选择性的抗原识别结构域的嵌合抗原受体多肽，诸如靶向CD5的scFv。在某些实施方案中，CD5靶向的scFv具有SEQIDNO:8或其变体。在某些实施方案中，变体与SEQIDNO:8具有大于99％、98％、97％、96％、95％、94％、93％、92％、91％、90％、89％、88％、87％、86％、85％、84％、83％、82％、81％、80％、79％、78％、77％、76％、75％、74％、73％、72％、71％、70％或更高的同一性。在某些实施方案中，变体是轻链或重链可变区的CDR1、CDR2或CDR3外部的1或2个突变、缺失或插入。在某些实施方案中，变体是轻链或重链可变区的CDR1、CDR2或CDR3外部的3或4个突变、缺失或插入。在某些实施方案中，变体是轻链或重链可变区的CDR1、CDR2或CDR3内部的1或2个突变、缺失或插入。在另一个实施方案中，本公开提供了表达任意上述嵌合抗原受体多核苷酸或多肽的工程改造的细胞。在某些实施方案中，工程改造的细胞是免疫调节细胞，诸如T细胞或NK细胞。在某些实施方案中，T细胞是纯化的γδT细胞、αβT细胞或其组合的组合物。在某些实施方案中，本公开涉及治疗癌症，其包括：从受试者中分离免疫调节细胞(诸如T细胞)；修饰分离的免疫调节细胞(诸如T细胞)使得T细胞抗原的表达降低；将载体或DNA插入免疫调节细胞(诸如T细胞)中，其中在使得免疫调节细胞(诸如T细胞)表达T细胞抗原识别结构域从而提供转导或工程改造的细胞(诸如转导或工程改造的T细胞)的条件下，所述载体或DNA编码并表达包含T细胞抗原识别结构域的嵌合抗原受体；以及向所述受试者施用有效量的转导或工程改造的细胞，其任选地与IL-2组合施用于受试者。在某些本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：/n从受试者中分离T细胞；/n修饰所述分离的T细胞，使得T细胞抗原的表达降低；/n将载体插入所述T细胞中，其中在使得所述T细胞表达抗原识别结构域从而提供转导的T细胞的条件下，所述载体编码并表达包含所述T细胞抗原识别结构域的嵌合抗原受体，其中，与其中所述T细胞抗原的表达未改变或降低的T细胞相比，所述T细胞抗原的表达降低导致所述T细胞上包含所述T细胞抗原识别结构域的嵌合抗原受体的表达增加；以及/n向所述受试者施用有效量的转导的T细胞，其任选地与IL-2组合施用于所述受试者。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170612 US 62/518,5881.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
从受试者中分离T细胞；
修饰所述分离的T细胞，使得T细胞抗原的表达降低；
将载体插入所述T细胞中，其中在使得所述T细胞表达抗原识别结构域从而提供转导的T细胞的条件下，所述载体编码并表达包含所述T细胞抗原识别结构域的嵌合抗原受体，其中，与其中所述T细胞抗原的表达未改变或降低的T细胞相比，所述T细胞抗原的表达降低导致所述T细胞上包含所述T细胞抗原识别结构域的嵌合抗原受体的表达增加；以及
向所述受试者施用有效量的转导的T细胞，其任选地与IL-2组合施用于所述受试者。
2.如权利要求1的方法，其中所述T细胞抗原是CD5、CD7或CD3。
3.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
从受试者中分离T细胞；
修饰所述分离的T细胞，使得CD5的表达降低；
将载体插入所述T细胞，其中在使得所述T细胞表达CD5抗原识别结构域从而提供转导的T细胞的条件下，所述载体编码并表达包含所述CD5抗原识别结构域的嵌合抗原受体；以及
向所述受试者施用有效量的转导的T细胞，其任选地与IL-2组合施用于所述受试者。
4.如权利要求3所述的方法，其中，与其中所述CD5的表达未改变或降低的T细胞相比，CD5的表达降低导致所述T细胞上包含CD5抗原识别结构域的嵌合抗原受体的表达增加。
5.如权利要求3所述的方法，其中修饰所述分离的T细胞使得CD5的表达降低包括将载体插入所述T细胞中，其中所述载体编码并表达Cas核酸酶和指导RNA，所述指导RNA靶向用于切割、切开或阻断所述CD5基因或CD5mRNA的表达的序列。
6.如权利要求5所述的方法，其中所述指导RNA包含AGCGGTTGCAGAGACCCCAT(SEQIDNO:5)。
7.如权利要求3所述的方法，其中修饰所述分离的T细胞使得CD5的表达降低包括将mRNA插入所述T细胞中，其中所述mRNA编码Cas核酸酶和指导RNA，所述指导RNA靶向用于切割或切开CD5基因或CD5mRNA的序列。
8.如权利要求7所述的方法，其中所述指导RNA包含AGCGGTTGCAGAGACCCCAT(SEQIDNO:5)。
9.如权利要求3所述的方法，其中修饰所述分离的T细胞使得CD5的表达降低包括将载体或mRNA插入所述T细胞中，其中所述载体或mRN...
【专利技术属性】
技术研发人员：H·特伦特·斯宾塞，克里斯托弗·德林，苏尼尔·雷卡尔，劳伦·弗莱舍，
申请(专利权)人：爱莫里大学，亚特兰大儿童保健公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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