一种维格列汀中间体-5的HPLC检测方法技术

本发明专利技术涉及药物检测技术领域，具体公开一种维格列汀中间体‑5的HPLC检测方法。所述HPLC的色谱条件：色谱柱：填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相：流动相A为体积比为200:3‑5:3‑5的磷酸盐缓冲液‑乙腈‑甲醇；流动相B为体积比为80:90‑100:25‑35的磷酸盐缓冲液‑乙腈‑甲醇；柱温：33‑37℃；检测波长：208‑212nm；流速：1.6‑1.8ml/min；洗脱方式为梯度洗脱。本发明专利技术得到的色谱图中各色谱峰可以完全分离，且分离度良好，能够保证样品中维格列汀中间体‑5纯度检测的准确性，为后续合成的维格列汀的质量和疗效提供可靠保障。

A HPLC method for the determination of the intermediate-5 of veggliptin

【技术实现步骤摘要】
一种维格列汀中间体-5的HPLC检测方法
本专利技术涉及药物检测
，尤其涉及一种维格列汀中间体-5的HPLC检测方法。
技术介绍
维格列汀(Vildagliptin)是一种二肽基肽酶Ⅳ抑制剂，它是一种新型口服治疗糖尿病的药物。而维格列汀中间体-5是维格列汀合成过程中关键中间体之一，其化学名称为：S-1-(2-氯乙酰基)吡咯烷-2-甲腈，分子式为：C7H9ClN2O；分子量为：172.61；维格列汀中间体-5化学结构式如下：在合成维格列汀中间体-5的过程中，伴随着生成了对甲苯磺酸，若对甲苯磺酸去除不完全则会影响维格列汀中间体-5的纯度和质量，而且，残留的对甲苯磺酸可能会参与到后续的反应中生成基因毒性杂质，从而对产品质量带来更大的影响。此外，中间体-5后处理过程中会发生水解，生成杂质中间体-5酰胺，同时中间体-5中还含有少量的未知单杂(WZ5-1)。因此检测和控制维格列汀中间体-5的纯度和对甲苯磺酸以及中间体-5酰胺的含量对于维格列汀的质量和疗效的控制格外重要。
技术实现思路
针对现有合成维格列汀中间体-5的过程中，会产生对甲苯磺酸和中间体-5酰胺等杂质，用其合成的维格列汀的质量和疗效难以保障的问题，本专利技术提供一种维格列汀中间体-5的HPLC检测方法。为达到上述专利技术目的，本专利技术实施例采用了如下的技术方案：一种维格列汀中间体-5的HPLC检测方法，所述HPLC的检测条件：色谱柱：填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相：流动相A为体积比为200:3-5:3-5的磷酸盐缓冲液-乙腈-甲醇；流动相B为体积比为80:90-100:25-35的磷酸盐缓冲液-乙腈-甲醇；其中，所述磷酸盐缓冲液的pH为2-3；柱温：33-37℃；检测波长：208-212nm；流速：1.6-1.8ml/min；洗脱条件：0-3min，A相90→70vol％，B相10→30vol％；3-10min，A相70→55vol％，B相30→45vol％；10-18min，A相55vol％，B相45vol％；18-18.1min，A相55→90vol％，B相45→10％；18.1-22min，A相90vol％，B相10vol％。相对于现有技术，本专利技术提供的格列汀中间体-5的HPLC检测方法，通过选择上述HPLC色谱条件，可实现对合成的维格列汀中间体-5粗品中维格列汀中间体-5、对甲苯磺酸和中间体-5酰胺的含量进行准确的检测，检测得到的高效液相色谱图中对甲苯磺酸与中间体-5的分离度在2.5以上，各杂质峰对主峰无干扰，各色谱峰可以完全分离，且分离度良好，能够保证样品中维格列汀中间体-5纯度检测的准确性，为后续合成的维格列汀的质量和疗效提供可靠保障。优选的，所述色谱柱为AgelaVenusilMPC18柱。采用AgelaVenusilMPC18柱，配合磷酸盐缓冲液-乙腈-甲醇作为流动相，可以进一步HPLC检测图谱各共有峰之间的分离度并保证良好的峰形。优选的，所述磷酸盐缓冲液是用20-40vt％的磷酸溶液调节0.01-0.1mol/L的磷酸盐溶液的pH至2-3得到。优选的，所述磷酸盐为磷酸二氢钾。优选的，所述流动相A为体积比为200:3:3的磷酸盐缓冲液-乙腈-甲醇；流动相B为体积比为80:90:30的磷酸盐缓冲液-乙腈-甲醇。优选的，所述柱温为35℃，所述流速为1.7ml/min。优选的，所述检测波长为210nm。该波长条件下，各共有峰的基线平稳且响应良好。优选的，所述检测方法中的进样体积为8-12μL。上述优选的色谱条件可以进一步提高色谱图中各检测峰之间的分离度。优选的，所述检测方法中对照品溶液和供试品溶液的稀释液由体积比为9-10:1的0.1vt％盐酸溶液和乙腈组成。优选的，所述检测方法中对照品溶液中中间体-5酰胺、对甲苯磺酸和维格列汀中间体-5的含量分别为1.5-2μg/ml、1.5-2μg/ml和150-200μg/ml；供试品溶液中待测维格列汀中间体-5粗品的含量为0.4-0.6mg/ml。附图说明图1是本专利技术实施例1中对照品溶液的HPLC色谱图；其中，峰1为中间体-5酰胺，峰2为对甲苯磺酸，峰3为维格列汀中间体-5，峰4为WZ5-1；图2是本专利技术实施例1中供试品溶液的HPLC色谱图；其中，峰1为中间体-5酰胺，峰2为对甲苯磺酸，峰3为维格列汀中间体-5，峰4为WZ5-1；图3是本专利技术实施例1中稀释液的HPLC色谱图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。实施例1仪器与条件：高效液相色谱仪：日立L-2000；色谱柱：AgelaVenusilMPC18(2)柱(4.6mm×50mm,3μm)；流动相：以磷酸盐缓冲液(取0.01mol/L磷酸二氢钾溶液，用20％(v/v)磷酸溶液调pH至2.4)-乙腈-甲醇(200:3:3)为流动相A，以磷酸盐缓冲液-乙腈-甲醇(80:90:30)为流动相B；流速：1.7ml/min；柱温：35℃；检测波长：210nm；进样体积：10μl；洗脱方式为梯度洗脱，具体洗脱条件为：0-3min，A相90→70vol％，B相10→30vol％；3-10min，A相70→55vol％，B相30→45vol％；10-18min，A相55vol％，B相45vol％；18-18.1min，A相55→90vol％，B相45→10％；18.1-22min，A相90vol％，B相10vol％。试验方法配制稀释液：体积比为9:1的0.1vt％盐酸溶液和乙腈混合均匀得到；对照品溶液：分别精密称取中间体-5酰胺、对甲苯磺酸、维格列汀中间体-5适量，分别制成5μg/mL的中间体-5酰胺母液、5μg/mL的对甲苯磺酸母液和500μg/ml的维格列汀中间体-5母液，精密量取每种溶液各1ml，混匀得到对照品溶液；供试品溶液：精密称取待检测维格列汀中间体-5(批号1)12.5mg，置25ml量瓶中，加入上述稀释液15ml，充分振摇，使维格列汀中间体-5完全溶解，再用稀释液稀释至刻度，摇匀得到供试品溶液；检测方法：分别精密量取对照品溶液、供试品溶液和空白稀释液各10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，检测对照品溶液得到的色谱图如图1所示，其中峰1的保留时间为1.013，峰2的保留时间为1.953，峰3的保留时间为2.453，峰4的保留时间是4.620；检测供试品溶液得到的色谱图如图2所示，其中峰1的保留时间为0.907，峰2的保留时间为1.967，峰3的保留时间为2.460，峰4的保留时间是4.633，检测空白稀释液得到的色谱图如图3所示。按照面积归一化法计算待检测的维格列汀中间体-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种维格列汀中间体-5的HPLC检测方法，其特征在于：所述HPLC的检测条件：/n色谱柱：填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；/n流动相：流动相A为体积比为200:3-5:3-5的磷酸盐缓冲液-乙腈-甲醇；流动相B为体积比为80:90-100:25-35的磷酸盐缓冲液-乙腈-甲醇；其中，所述磷酸盐缓冲液的pH为2-3；/n柱温：33-37℃；/n检测波长：208-212nm；/n流速：1.6-1.8ml/min；/n洗脱条件：0-3min，A相90→70vol％，B相10→30vol％；3-10min，A相70→55vol％，B相30→45vol％；10-18min，A相55vol％，B相45vol％；18-18.1min，A相55→90vol％，B相45→10％；18.1-22min，A相90vol％，B相10vol％。/n

【技术特征摘要】
1.一种维格列汀中间体-5的HPLC检测方法，其特征在于：所述HPLC的检测条件：
色谱柱：填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；
流动相：流动相A为体积比为200:3-5:3-5的磷酸盐缓冲液-乙腈-甲醇；流动相B为体积比为80:90-100:25-35的磷酸盐缓冲液-乙腈-甲醇；其中，所述磷酸盐缓冲液的pH为2-3；
柱温：33-37℃；
检测波长：208-212nm；
流速：1.6-1.8ml/min；
洗脱条件：0-3min，A相90→70vol％，B相10→30vol％；3-10min，A相70→55vol％，B相30→45vol％；10-18min，A相55vol％，B相45vol％；18-18.1min，A相55→90vol％，B相45→10％；18.1-22min，A相90vol％，B相10vol％。


2.如权利要求1所述的维格列汀中间体-5的HPLC检测方法，其特征在于：所述色谱柱为AgelaVenusilMPC18柱。


3.如权利要求1所述的维格列汀中间体-5的HPLC检测方法，其特征在于：所述磷酸盐缓冲液是用20-40vt％的磷酸溶液调节0.01-0.1mol/L的磷酸盐溶液的pH至2-3得到。


4.如权利要求3所述的维格列汀中间体-5的HPLC检测方...

【专利技术属性】
技术研发人员：高子彬，候丽蓓，黄德胜，霍月香，臧香环，李玲玲，孟思，付玉飞，李硕，张惠敏，孙艳平，孙勇军，
申请(专利权)人：河北科技大学，
类型：发明
国别省市：河北;13