一种棉花花粉萌发的固体培养基和萌发方法技术

本发明专利技术提供了一种棉花花粉萌发的固体培养基和萌发方法，属于棉花种植技术领域，所述固体培养基以水为溶剂，每升包括12～15g琼脂、0.1g硼酸、0.2g硝酸钙、0.2g硫酸镁、0.1g硝酸钾和250～450g蔗糖。采用本发明专利技术提供的固体培养基稳定了观测区域范围，而且不会造成棉花花粉萌发的渗透压，不会导致棉花花粉吸水涨破。

A solid medium and method for germination of cotton pollen

【技术实现步骤摘要】
一种棉花花粉萌发的固体培养基和萌发方法
本专利技术属于棉花种植
，尤其涉及一种棉花花粉萌发的固体培养基和萌发方法。
技术介绍
许多学者对棉花的开花授精过程做了大量研究，并研究比较了多种测定棉花生活力的试验方法，研究结果表明，花粉及柱头生活力受外界条件影响较大。自然条件下，花粉生活力为1d内，柱头生活力仅限于开花后2d内。花粉活力测定是植物生殖研究的重要内容之一。测定植物花粉的活力通常采用染色法和离体培养两类方法。棉花成熟花粉的活力测定常用联苯胺-甲萘酚染色法，该方法的缺点是判断花粉有无活力的标准存在人为误差。用培养基培养花粉，测定结果受到温度、培养基成分等多种因素的影响。这些方法都只是间接地反映了花粉的活力。现有技术种采用液体培养基对花粉进行萌发，液体培养基的配方为0.35mol/L蔗糖、0.03％CaCl2、0.01％H3BO3和0.7％琼脂。在载玻片上滴2滴培养培养基，撒上少量花粉，加上盖玻片，放在预先备好的放有少量加水卫生纸的培养皿中，培养2～3h，在显微镜下观察花粉萌发。但是现有的液体培养基是在载玻片上进行萌发和观测的，须要事先配制液体培养基将其滴加于载玻片上，观测范围具有较大的局限性，液体培养过程中其中的离子浓度要掌握的较为准确，否则花粉受到胁迫，造成花粉破裂。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种棉花花粉萌发的固体培养基和萌发方法，采用本专利技术提供的固体培养基稳定了观测区域范围，并且不会造成棉花花粉破裂。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：本专利技术提供了一种棉花花粉萌发的固体培养基，所述固体培养基以水为溶剂，每升包括12～15g琼脂、0.1g硼酸、0.2g硝酸钙、0.2g硫酸镁、0.1g硝酸钾和250～450g蔗糖。优选的，每升固体培养基中含有300～400g蔗糖。优选的，每升固体培养基中含有350g蔗糖。本专利技术还提供了一种棉花花粉的萌发方法，将棉花花粉置于上述技术方案所述的固体培养基上进行萌发。优选的，所述萌发的温度为25～30℃。优选的，所述萌发的光照强度为8000～10000Lux。优选的，所述萌发的环境湿度小于60％。优选的，所述萌发的时间为2h～6h。本专利技术提供了一种棉花花粉萌发的固体培养基，所述固体培养基以水为溶剂，每升包括12～15g琼脂、0.1g硼酸、0.2g硝酸钙、0.2g硫酸镁、0.1g硝酸钾和250～450g蔗糖。采用本专利技术提供的固体培养基稳定了观测区域范围，而且不会造成棉花花粉萌发的渗透压，不会导致棉花花粉吸水涨破。具体实施方式本专利技术提供了一种棉花花粉萌发的固体培养基，所述固体培养基以水为溶剂，每升包括12～15g琼脂、0.1g硼酸、0.2g硝酸钙、0.2g硫酸镁、0.1g硝酸钾和250～450g蔗糖。本专利技术对上述试剂的来源没有特殊限定，采用常规市售产品即可。在本专利技术中，所述固体培养基的配置方法优选包括：将所述硼酸、硝酸钙、硫酸镁和硝酸钾溶于水中，煮沸后加入蔗糖和琼脂。在本专利技术中所述水优选为蒸馏水，所述固体培养基无需灭菌，可直接使用。在本专利技术中，所述硝酸钙优选为四水合硝酸钙，所述硫酸镁优选为七水合硫酸镁。在本专利技术中，所述硝酸钙和硫酸镁和硝酸钾促进花粉的萌发。在本专利技术中，每升固体培养基中含有250～450g蔗糖，优选含有300～400g，更优选含有350g。在本专利技术中，所述蔗糖调节棉花花粉萌发的渗透压，提供花粉萌发的碳源，减少导致棉花花粉吸水膨胀机率。本专利技术对所述棉花的品种没有特殊限定，采用常规棉花品种即可。本专利技术还提供了一种棉花花粉的萌发方法，将棉花花粉置于上述技术方案所述的固体培养基上进行萌发。在本专利技术中，所述萌发的温度优选为25～30℃；所述萌发的光照强度优选为8000～10000Lux；所述萌发的环境湿度小于60％；所述萌发的时间优选为2～6h。本专利技术对所述棉花花粉置于固体培养基上的量没有特殊限定，所述花粉置于固体培养基上分布均匀，不影响互相萌发即可。本专利技术优选在体式显微镜下观察棉花花粉的萌发情况，本专利技术对体式显微镜观察的目数没有特殊限定，能够观察清楚即可。在本专利技术中，所述体式显微镜下的每个视野优选观察30个棉花花粉粒，重复3次。下面结合实施例对本专利技术提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本专利技术保护范围的限定。实施例1干旱胁迫处理方法：利用新疆石河子地区棉田，年降水量为125.0～207.7mm之间，滴灌覆膜控制灌水量，通过控制滴灌带仅灌溉出苗水。对照区域则正常灌溉。花粉采集：在7月中旬新疆棉花生长的盛花期，于上午10点～12点花朵初开，花粉活力最强时，分别在转基因棉田(对转基因棉田的品种无要求)和非转基因棉田采集足量带花柄的棉花花朵，采集时应注意选取种植区域中间位置及每株棉花中部的花朵，灌水的受体棉花和干旱区受体棉花的花粉采集是：采集棉花植株中部正常开放的花朵，第二果枝及以上，装于牛皮纸袋内以保持其相对湿度。联苯胺-甲萘酚花粉染色实验方法：每种棉花材料选取3朵花，将花粉均匀涂于载玻片上，先加1～2滴联苯胺-甲萘酚试剂，再加1滴3％过氧化氢3～5分钟后在显微镜下分别观察3个视野，每个视野计数30粒花粉粒，生活力强的花粉染成紫红色，生活力弱的染成浅红色，无生活力的花粉则不着色。联苯胺-甲萘酚溶液的配置：1)3％过氧化氢：取5ml30％过氧化氢加蒸馏水稀释至50ml。2)联苯胺-甲萘酚试剂：称0.2g联苯胺溶于100ml50％酒精中，盛棕色瓶内，称0.15g甲萘酚溶于100L50％酒精中(先用极少量95％酒精溶成浆糊状之后再加入50％酒精)盛棕色瓶内。3)称0.25g碳酸钠溶于100ml蒸馏水中。以上三种试剂在实验时以等体积混合摇匀后使用。将采集的花粉在固体培养基中进行花粉萌发试验，3个重复。将不同材料的花粉轻轻均匀抖入事先配置好的固体培养基中，置于30℃光照培养箱中培养过夜(培养箱中放置适量水，保证萌发的相对湿度)，在显微镜下观察花粉萌发情况。观察记录萌发和不萌发的花粉粒数量，每个培养皿观察3个视野，每个视野观察30个花粉粒，结果见表1。固体培养基的组成：每升培养基中含15g琼脂、H3BO30.1g、Ca(NO3)2·4H2O0.2g、MgSO4·7H2O0.2g、KNO30.1g和250g蔗糖，配置好后室温冷却。实施例2每升固体培养基中含有300g蔗糖，其它条件同实施例1，结果见表1。实施例3每升固体培养基中含有350g蔗糖，其它条件同实施例1，结果见表1。实施例4每升固体培养基中含有400g蔗糖，其它条件同实施例1，结果见表1。实施例5每升固体培养基中含有450g蔗糖，其它条件同实施例1，结果见表1。表1棉花花粉的萌发情况从表1中可以得出，干旱胁迫和本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种棉花花粉萌发的固体培养基，其特征在于，所述固体培养基以水为溶剂，每升包括12～15g琼脂、0.1g硼酸、0.2g硝酸钙、0.2g硫酸镁、0.1g硝酸钾和250～450g蔗糖。/n

【技术特征摘要】
1.一种棉花花粉萌发的固体培养基，其特征在于，所述固体培养基以水为溶剂，每升包括12～15g琼脂、0.1g硼酸、0.2g硝酸钙、0.2g硫酸镁、0.1g硝酸钾和250～450g蔗糖。


2.根据权利要求1所述的固体培养基，其特征在于，每升固体培养基中含有300～400g蔗糖。


3.根据权利要求2所述的固体培养基，其特征在于，每升固体培养基中含有350g蔗糖。


4.一种棉花花粉的萌发方法，其特征在于，将棉花花粉置于权利要求1～3任一项所述的固体培养基上进...

【专利技术属性】
技术研发人员：王爱英，田文辉，周超，朱辉亚，王军霞，祝建波，
申请(专利权)人：石河子大学，
类型：发明
国别省市：新疆;65