鸭疫里默氏杆菌CH-1株fur基因缺失弱毒疫苗候选株、构建方法与应用技术

本发明专利技术涉及一种鸭疫里默氏杆菌CH‑1株fur基因缺失弱毒疫苗候选株、构建方法与应用，本发明专利技术构建的弱毒株RA CH‑1△fur免疫雏鸭后，对雏鸭无明显的病理损伤；对雏鸭的体重增殖无明显的影响，具有良好的安全性。RA CH‑1△fur免疫雏鸭后对RA CH‑1野生型强毒株的攻毒保护率达100％，具有良好的免疫保护。

Candidate strain, construction method and application of attenuated vaccine with fur gene deletion of Riemerella anatipestifer CH-1 strain

【技术实现步骤摘要】
鸭疫里默氏杆菌CH-1株fur基因缺失弱毒疫苗候选株、构建方法与应用
本专利技术属于生物
，涉及一种鸭疫里默氏杆菌CH-1株fur基因缺失弱毒疫苗候选株、构建方法与应用。
技术介绍
鸭疫里默氏杆菌病是由鸭疫里默氏杆菌(Riemerellaanatipestifer,RA)引起的一种主要感染鸭、鹅、火鸡等多种禽类的急性或慢性的接触性传染病。该病分布范围广，已成为严重危害我国养鸭业的细菌性传染病之一。目前防控该病主要通过注射灭活疫苗和药物防治。灭活疫苗制备工艺繁琐，需要多次注射才能达到保护效果；药物防治易使细菌对药物产生耐药性及对环境造成污染，而且在目前“减抗限抗”趋势下，抗生素药物的使用将会被进一步限制。所以，急需开发一种能够注射一次且具有良好保护效果的基因工程弱毒疫苗。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种鸭疫里默氏杆菌CH-1株fur基因缺失弱毒疫苗候选株、构建方法与应用。为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：1、本专利技术提供了鸭疫里默氏杆菌CH-1株fur基因缺失弱毒本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.鸭疫里默氏杆菌CH-1株fur基因缺失弱毒疫苗候选株RA CH-1△fur，即鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer)CH-1△fur，于2019年8月20日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M2019600。/n

【技术特征摘要】
1.鸭疫里默氏杆菌CH-1株fur基因缺失弱毒疫苗候选株RACH-1△fur，即鸭疫里默氏杆菌(Riemerellaanatipestifer)CH-1△fur，于2019年8月20日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCCNO：M2019600。


2.权利要求1所述鸭疫里默氏杆菌CH-1株fur基因缺失弱毒疫苗候选株RACH-1△fur的构建方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)RACH-1fur基因左右同源臂及Spec抗性基因的PCR扩增：以RACH-1基因组作为模板，利用SEQIDNO.1～4所示的两对引物fur-LF/R和fur-RF/R，PCR扩增fur基因左右同源臂片段fur-L和fur-R，它们的核苷酸序列分别如SEQIDNO.5和SEQIDNO.6所示；以核苷酸序列分别如SEQIDNO.7所示的质粒pBAD24::SpecR作为模板，利用SEQIDNO.8～9所示的引物对，PCR扩增SpecR序列，其核苷酸序列如SEQIDNO.10所示；
(2)fur-LSR融合片段的构建：用融合PCR技术构建融合片段fur-LSR，即fur-L+SpecR+fur-R，其核苷酸序列如SEQIDNO.11所示；
(3)RACH-1fur基因缺失株的构建：向RACH-1株培养所得菌悬液中加入fur-LSR融合片段，孵育，稀释后涂布于含壮观霉素的GCB固体培养基上培养24h-48h后，即得RACH-1fur基因缺失株。


3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)中，RACH-1fur基因左右同源臂的PCR扩增条件为：98℃变性30s，经98℃10s，55℃30s，72℃30s循环扩增30次，72℃延伸7min。


4.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)中，壮观霉素抗性基因SpecR的PCR扩增条件为：98℃变性30s，经98℃10s，55℃30s，72℃50s循环扩增30次，72℃延伸7min。


5.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)的具体方法是：用融合PCR技术构建融合片段fur-LSR：回收的基因片段fur-L、SpecR、fur-R，经Nanodrop2000测定浓度，以2:1:2的质量...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘马峰，刘珈均，项晨，黄觅，程安春，汪铭书，朱德康，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：四川;51