尤瑞克林在促进缺血超长随意皮瓣存活的作用制造技术

本发明专利技术涉及尤瑞克林在促进缺血随意皮瓣存活的作用。在促进缺血随意皮瓣存活的过程中采用尾静脉注射的方式，使用方法为每日尾静脉注射剂量0.016PNA/kg，7天为一疗程。通过大量的动物实验得出结论，使用尤瑞克林可以使得皮瓣的成活面积比明显提高，能很好地促进缺血随意皮瓣存活。

The effect of urinary kallidinogenase on the survival of overlong ischemic random flap

【技术实现步骤摘要】
尤瑞克林在促进缺血超长随意皮瓣存活的作用
本专利技术涉及尤瑞克林的新用途，具体是尤瑞克林在促进缺血超长随意皮瓣存活的作用。
技术介绍
皮瓣常用于临床创面修复，创面整形等各个邻域，虽然皮瓣外科技术有了很大的进展，但在临床应用中，皮瓣坏死是整形外科中常见并发症。如何能改善随意皮瓣远端的血供状况以及组织对缺血的耐受能力，有效减少可能发生的缺血坏死，成为创面治疗修复中核心问题之一，具有较强的社会价值、经济价值和理论、实践研究价值。尤瑞克林，主要成份及其化学名称为人尿激肽原酶，化学结构式如图1所示，为从新鲜人尿中提取精制的一种由238个氨基酸组成的糖蛋白，分子量：43000±4000道尔顿。适应症为轻-中度急性血栓性脑梗死，但是对皮瓣存活的影响未见报道。
技术实现思路
本专利技术涉及尤瑞克林在促进缺血超长随意皮瓣存活的作用。尤瑞克林在促进缺血超长随意皮瓣存活的过程中采用尾静脉注射的方式，按每0.15PNA单位尤瑞克林粉末溶于150毫升的生理盐水，配成0.001PNA单位/ml溶液，使用方法为每千克体重大鼠每日通过尾静脉注射0.016PNA单位尤瑞克林，7天为一疗程。通过大量的动物实验得出结论，使用尤瑞克林可以使得皮瓣的成活面积比明显提高，能很好地促进缺血超长随意皮瓣存活。下面将结合具体实施例及附图对本专利技术做进一步详细的说明。附图说明图1尤瑞克林化学结构式；图2尤瑞克林实验组与生理盐水对照组术后7天大鼠背部皮瓣存活情况的对比图；图3尤瑞克林实验组与生理盐水对照组术后七天两组皮瓣血流灌注量对比观察图；图4尤瑞克林实验组与生理盐水对照组皮瓣氧化铅造影对比观察图；图5显微镜下（100倍和200倍）尤瑞克林组与生理盐水组中间区域皮瓣HE染色观察情况对比图；图6尤瑞克林实验组与生理盐水组皮瓣血管内皮生长因子（VEGF）、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6（IL-6）和逆转肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等蛋白表达（免疫组化×400）对照图。具体实施方式尤瑞克林可以促进缺血超长随意皮瓣存活性明显提高。在促进缺血超长随意皮瓣存活的过程中采用尾静脉注射的方式。按每0.15PNA单位尤瑞克林粉末溶于150毫升的生理盐水，配成0.001PNA单位/ml溶液，使用方法为每千克体重大鼠每日通过尾静脉注射0.016PNA单位尤瑞克林，7天为一疗程。（注：在37℃pH8.0的条件下，1分钟水解1μmolVal-Leu-Arg-PNA的尤瑞克林量为1PNA单位。）以下为尤瑞克林在促进缺血随意皮瓣存活的作用评价：1、缺血随意皮瓣模型建立选用健康的雄性SD大鼠36只，由温州医科大学实验动物中心提供，清洁级，SCXK（浙）2015-0019，体重200-250g，2—3个月龄。将大鼠按照随机数字表法分为尤瑞克林实验组和生理盐水对照组，每组18只。采用改良的McFarlane皮瓣制作方法，1%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，将动物俯卧位固定，脱毛，碘伏消毒，铺巾，以大鼠尾部两髂嵴连线为蒂，在背部正中设计一宽3cm、长9cm矩形随意型皮瓣，设计线切开皮肤，皮下组织，达深筋膜浅层，保留真皮下毛细血管网，于深筋膜浅层表面分离皮下组织，遇到知名血管即以4-0号丝线结扎。皮瓣完全掀起后，彻底止血，立即用4-0医用慕丝缝线间断缝合。切口周围碘伏消毒后涂抹金霉素软膏，腹腔注射生理盐水(50ml／kg)抗休克。尤瑞克林实验组：0.016PNA/kg尤瑞克林大鼠尾静脉注射；生理盐水对照组：相同剂量尾静脉注射，均每日1次，连续注射7天，并独笼喂养。为减少手术操作带来的误差，所有手术由1人完成。2、观察指标：2.1皮瓣存活面积比的检测皮瓣存活面积比的检测：术后第7天，各组大鼠在麻醉状态下用透明纸准确测量皮瓣成活及坏死面积，并剪成成活或死亡两部分，分别以电子秤称重。按以下公式计算皮瓣存活面积比：皮瓣存活面积比=皮瓣存活面积玻璃纸重量/皮瓣总表面积玻璃纸重量×100%。皮瓣坏死标准：皮瓣颜色发黑，组织回缩、弹性差，质地坚硬，切割组织不出血。病理表现为组织崩解、细胞核消失、炎症细胞广泛浸润、有局灶出血。术后7天，尤瑞克林组中间区域皮瓣颜色淡红，表面无痂壳形成，弹性较好，远端区域颜色发黑，表明有痂壳，弹性差，原位掀起皮瓣时见皮瓣出血活跃，出血量多，肉膜下无积血，积液，血管丰富。生理盐水组皮瓣中间区域及远端区域颜色均发黑，表面有痂壳形成，弹性极差，原位掀起皮瓣见皮瓣出血较少，肉膜下炎性分泌物较多，血管相对较疏（见图2）。7天后实验组皮瓣的成活面积比为(74.12±4.13%)，对照组皮瓣成活面积比为(52.02±4.13%),比较两组皮瓣的成活面积比，差异有统计学意义（P<0.01）。2.2激光多普勒血流仪测定新生血管在术后第7天，将两组共12只SD大鼠麻醉备用。大鼠取俯卧，头部及四肢用尼龙线捆绑固定于操作台上，用激光多普勒血流仪测量大鼠皮瓣各区域（皮瓣近端（Ⅰ区）、中端（Ⅱ区）、远端（Ⅲ区））血流灌注的血流量。灌注量（PU）表示测量局部组织深度内的微循环血流量大小的相对单位，即在多普勒下红细胞的流动产生的位移值，PU值的变化直接反应了组织微循环血流量的改变，间接反映皮瓣新生血管形成。数据予专用软件moorLDIreviewV6.1进行分析、统计。7天后激光多普勒血流仪显示尤瑞克林组皮瓣的中间端血流量明显多于对照组，尤瑞克林组皮瓣的血流灌注量为(213.96±49.75)，对照组皮瓣血流灌注量为(96.02±56.14),比较两组皮瓣的血流灌注量，差异有统计学意义（P<0.01）（见图3）。2.3明胶-氧化铅血管造影术后第7天，麻醉后先通过向大鼠一侧颈动脉注入0.9%生理盐水，同侧颈静脉放血排净大鼠体内血液，然后将预置的明胶+氧化铅灌注液（100ML/kg）缓慢注射入颈动脉，当观察到大鼠巩膜及四肢末端色泽变成造影剂颜色后停止注射。灌注成功后将大鼠冷藏12-24小时，使明胶凝集，最后将大鼠背部皮瓣及周围皮肤解剖，平铺行X线摄影。尤瑞克林组皮瓣远端造影剂充盈，而对照组的造影剂局限在皮瓣近端和中间区域（见图4）。2.4组织学检测术后7天，在皮瓣中点处取样。样本经10％甲醛固定，石蜡包埋，HE染色，术后7d光镜下(×100和×200)观察肉芽组织层厚度、毛细血管的结构变化、组织水肿、坏死、炎性细胞浸润等情况。尤瑞克林组见成纤维细胞增生，肉芽组织较薄，组织水肿较少，炎症细胞浸润少。生理盐水组成纤维细胞增生较少，组织水肿明显，炎症细胞浸润严重（见图5）。尤瑞克林组在皮瓣中区微血管密度为(29.46±6.32)，对照组在皮瓣中区微血管密度为(12.94±2.94)，两组皮瓣中区微血管密度比较，差异有统计学意义（P＜0.01)。2.5免疫组化观察对血管内皮生长因子（VEGF）、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6（IL-6）和逆转肿瘤本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.尤瑞克林在促进缺血超长随意皮瓣存活的作用。/n

【技术特征摘要】
20190716 CN 201910641447X1.尤瑞克林在促进缺血超长随意皮瓣存活的作用。


2.根据权利要求1所述的尤瑞克林在促进缺血超长随意皮瓣存活的作用，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：林丁盛，林雨婷，金玉枝，高伟阳，
申请(专利权)人：温州医科大学附属第二医院温州医科大学附属育英儿童医院，
类型：发明
国别省市：浙江;33