【技术实现步骤摘要】
将干细胞诱导为肝细胞的方法和试剂盒
本专利技术属于生物
，具体地，本专利技术涉及将干细胞诱导为肝细胞的方法和试剂盒。
技术介绍
肝脏疾病通常分为以下四类：病毒性肝炎、肝硬化、肝癌和代谢类肝病，代谢类肝病包括家族性高胆固醇血症、高脂血症、苯丙酮尿症等。肝炎在世界范围内，尤其是东亚、东南亚地区发病率非常高，全世界约有3.6亿人患有肝炎。在肝炎中，乙型病毒性肝炎占很大比例，并且中国是乙型肝炎的高发区，目前保守且相对有效的治疗方法就是抗病毒治疗。肝硬化大多是由肝纤维化、肝损伤等病情恶化导致大面积的细胞凋亡，肝脏失去自发重建的功能，最终导致肝衰竭。代谢类肝病的致病机制一般是由于肝细胞某种功能的缺陷，导致肝脏不能合成或分解某一类物质，大部分是基因水平上，也就是遗传性的代谢疾病。对于肝衰竭和遗传性代谢疾病，目前临床上最主流的治疗方法就是原位肝移植，其它治疗方法如人工肝支持系统、肝细胞移植等已经可以作为辅助治疗或过渡治疗的手段。最早的原位肝移植试验尝试是在20世纪50年代中期，而最早成功的人肝移植临床案例是在1963年...
【技术保护点】
1.一种试剂盒，其化学成分明确，包括：/n第二培养基，用于将表达内胚层谱系特征性标志物的细胞诱导为肝祖细胞，所述第二培养基中含有维生素C磷酸酯盐、胰岛素、转铁蛋白和亚硒酸盐；和/或，/n第三培养基，用于将肝祖细胞诱导为表达肝谱系特征性标志物的细胞；/n任选地，所述试剂盒中还包括第一培养基，用于将干细胞诱导为表达内胚层谱系特征性标志物的细胞；/n优选地，所述维生素C磷酸酯盐选自维生素C磷酸酯镁、维生素C磷酸酯钠和维生素C磷酸酯钙；优选地，所述维生素C磷酸酯盐的浓度为10-100μg/L，例如10、20、30、40、50、60、70、80、90或100μg/L；优选地，所述胰岛...
【技术特征摘要】
20181123 CN 20181140524951.一种试剂盒，其化学成分明确，包括：
第二培养基，用于将表达内胚层谱系特征性标志物的细胞诱导为肝祖细胞，所述第二培养基中含有维生素C磷酸酯盐、胰岛素、转铁蛋白和亚硒酸盐；和/或，
第三培养基，用于将肝祖细胞诱导为表达肝谱系特征性标志物的细胞；
任选地，所述试剂盒中还包括第一培养基，用于将干细胞诱导为表达内胚层谱系特征性标志物的细胞；
优选地，所述维生素C磷酸酯盐选自维生素C磷酸酯镁、维生素C磷酸酯钠和维生素C磷酸酯钙；优选地，所述维生素C磷酸酯盐的浓度为10-100μg/L，例如10、20、30、40、50、60、70、80、90或100μg/L；优选地，所述胰岛素的浓度为1-50μg/L，例如1、5、10、20、30、40或50μg/L；优选地，所述转铁蛋白的浓度为1-20mg/mL，例如1、5、10或20mg/mL；优选地，所述亚硒酸盐为亚硒酸钠；进一步优选地，所述亚硒酸盐的浓度为0.1-1ng/mL，例如0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1ng/mL；
优选地，所述第二培养基中还含有NEAA、GlutaMax和DMSO中的一种或多种；
优选地，所述DMSO的含量(体积)为0.5％-5％，例如0.5％、1％、2％、3％、4％或5％。
2.权利要求1的试剂盒，其中所述第一培养基中含有肝糖原合成激酶3β(优选为CHIR99021)、B27和ActivinA中的一种或多种；
优选地，所述肝糖原合成激酶3β的浓度为2-4μM，例如2、3或4μM；优选地，所述ActivinA的浓度为50-500ng/mL，例如50、100、200、300、400或500ng/mL。
3.权利要求1或2的试剂盒，其中所述第三培养基中含有TGF-β受体抑制剂和NOTCH信号通路抑制剂；
优选地，所述TGF-β受体抑制剂为SB431542；优选地，所述TGF-β受体抑制剂添加量为1-5μM，例如1、2、3、4或5μM；优选地，所述NOTCH信号通路抑制剂为RO4929097；优选地，所述NOTCH信号通路抑制剂添加量为0.5-5μM，例如0.5、1、2、3、4或5μM；
优选地，所述第三培养基中还含有抑瘤素(OSM)、肝细胞生长因子(HGF)、地塞米松(DX...
【专利技术属性】
技术研发人员：周琪，郝捷，李仲文，吴骏，李伟，王柳，
申请(专利权)人：中国科学院动物研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。