本发明专利技术公开了miR‑674‑5p的新的医药用途，具体是miR‑674‑5p在制备治疗胶质瘤药物中的应用。本发明专利技术通过体外增殖和迁移实验证明miR‑674‑5p在体外能抑制胶质瘤细胞的增殖（P<0.05）和迁移（P<0.05）；进一步地，通过体内成瘤实验得知miR‑674‑5p在体内能抑制胶质瘤的生长，过表达miR‑674‑5p的胶质瘤重量明显比正常表达miR‑674‑5p的胶质瘤重量轻。因此，miR‑674‑5p及其类似物可用于制备治疗胶质瘤的药物，具有很好的应用前景。
Application of mir-674-5p in the preparation of glioma drugs
【技术实现步骤摘要】
miR-674-5p在制备治疗胶质瘤药物中的应用
本专利技术属于生物医药
，具体涉及miR-674-5p在制备治疗胶质瘤药物中的应用。
技术介绍
胶质瘤是一种常见的原发性脑肿瘤，有多种类型，包括星形胶质细胞瘤、少突胶质细胞瘤和室管膜瘤等，其中多形性胶质母细胞瘤（glioblastomamultiforme，简称GBM）是最常见的中枢神经系统恶性肿瘤，占恶性脑肿瘤的80%以上。死亡率高、复发率高、总生存时间短是GBM的典型特征。GBM的弥散侵袭性和高转移性使得其无法被手术完全切除，虽然可以采用手术和放、化疗相结合的方法，但GBM患者的中位生存期仍然很短，只有12~15个月。因此，包括免疫治疗和基因治疗在内的其他治疗策略成为重要的研究方向。微小RNA（microRNA，简称miRNA）是长度约为20~24个核苷酸的短链非编码RNA，可以通过阻断靶基因mRNA的翻译或加速其降解来调节靶基因的转录后表达。microRNAs通过调节其靶基因的表达从而在细胞增殖、分化、迁移和凋亡等过程中发挥重要作用。大量数据表明microRNAs与许多人类疾病有关，包括癌症，它们参与肿瘤的发生、发展、侵袭、迁移、转移等过程。基于以上背景，若能找到影响胶质瘤发生发展的关键microRNAs，则可能成为治疗胶质瘤的新靶点，为胶质瘤的治疗带来突破。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供miR-674-5p的新的医药用途，具体是miR-674-5p在制备治疗胶质瘤药物中的应用。为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：miR-674-5p在制备用于治疗胶质瘤药物中的应用，其中所述miR-674-5p的RNA序列为：GCACUGAGAUGGGAGUGGUGUA（SEQIDNO.1）。进一步地，miR-674-5p抑制胶质瘤的生长。进一步地，miR-674-5p抑制胶质瘤细胞的增殖和迁移。能表达miR-674-5p的试剂在制备用于治疗胶质瘤药物中的用途。进一步地，所述能表达miR-674-5p的试剂包括小分子RNA类似物。进一步地，所述能表达miR-674-5p的试剂包括直接化学合成的双链RNA、质粒和病毒载体中的一种或多种。本专利技术通过体外增殖和迁移实验证明miR-674-5p在体外能抑制胶质瘤细胞的增殖（P<0.05）和迁移（P<0.05）；进一步地，通过体内成瘤实验得知miR-674-5p在体内能抑制胶质瘤的生长，过表达miR-674-5p的胶质瘤重量明显比正常表达miR-674-5p的胶质瘤重量轻。因此，miR-674-5p及其类似物可用于制备治疗胶质瘤的药物，具有很好的应用前景。附图说明图1为实施例1增殖检测实验的结果。其中：A为C6细胞转染miR-NC或miR-674-5p类似物后48小时的EdU掺入实验结果，Hoechst染核，标尺=200微米；B为EdU阳性细胞比例的统计（均值±标准误，***P<0.001）；C为C6细胞转染miR-NC或miR-674-5p类似物后24小时的流式细胞周期结果；D为处于S期的细胞比例的统计（均值±标准误，***P<0.001）；E为C6细胞转染miR-NC或miR-674-5p类似物后0，1，2，3，4天的生长曲线。图2为实施例2中迁移检测实验的结果。其中：A为C6细胞转染miR-NC或miR-674-5p类似物后24小时的Transwell实验结果，标尺=200微米；B为穿过小室的细胞数统计（均值±标准误，***P<0.001）；C为C6细胞转染miR-NC或miR-674-5p类似物后0，24和48小时的划痕实验结果，标尺=400微米；D为划痕愈合面积占比的统计（均值±标准误，**P<0.01，*P<0.05）。图3为实施例3中体内成瘤实验的结果。其中：A为移植正常表达或过表达miR-674-5p的C6细胞3周后裸鼠的照片及取出的肿瘤的照片；B为肿瘤重量的统计（均值±标准误，*P<0.05）；C为肿瘤组织中miR-674-5p的表达验证（均值±标准误，***P<0.001）。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术提供的具体实施方式作详细说明。应强调的是，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。除非另有描述，本专利技术的实施将采用分子生物学、微生物学、重组DNA和免疫学的常规技术，这些均是本领域技术人员所知的。这些技术在下列文献中有完整的描述：例如，Sambrook《分子克隆实验指南》第2版(1989)；《DNA克隆》第I和II卷(D.N.Glover编辑1985)；《寡核苷酸合成》(M.J.Gait编辑，1984)；《核酸杂交》(B.D.Hames和S.J.Higgins编辑.1984)；《蛋白质纯化：原理和实践》第2版(Springer-Verlag，N.Y.)，以及《实验免疫学手册》I-IV卷(D.C.Weir和C.C.Blackwell编辑1986)。或者，可按照试剂生产商所提供的说明书进行。本专利技术所述miR-674-5p，在专利技术人之前的研究中发现它可以促进神经干细胞的分化，而多形性胶质母细胞瘤拥有一部分干细胞特性，并且干细胞的分化和增殖一般认为是反向的过程，因此专利技术人认为miR-674-5p有可能可以影响胶质瘤的生长。本专利技术的体外增殖和迁移实验使用大鼠胶质瘤细胞系C6，体内成瘤实验使用免疫缺陷的BALB/c裸鼠。本专利技术采用miRNA类似物对miR-674-5p的表达进行上调，以miR-NC作为对照，观察C6细胞的增殖和迁移是否有变化。本专利技术将携带有miR-674-5p类似物和对照miR-NC的慢病毒分别感染C6细胞后进行筛选，得到稳定过表达和正常表达miR-674-5p的C6细胞系，注射到裸鼠皮下进行成瘤实验，观察两种情况下肿瘤的生长情况。本专利技术在具体实施时可采用多种方式给予对象：注射miR-674-5p类似物、注射携带有miR-674-5p类似物的慢病毒，注射脂质体包被的miR-674-5p类似物等。下列实施例所采用的大鼠胶质瘤细胞系C6来自美国模式细胞保存中心（ATCC），培养在5%CO2的37度培养箱中，培养液为加入了10%胎牛血清和1%青霉素/链霉素的DMEM（Gibco公司）。下列实施例miRNA类似物来自广州锐博公司，细胞转染利用Invitrogen的LipofectamineRNAiMAX转染试剂，转染步骤按照说明书操作，miRNA类似物浓度为50纳摩。携带有miRNA类似物的慢病毒来自上海吉凯公司。miR-674-5p类似物的序列：正义链(5'->3'):GCACUGAGAUGGGAGUGGUGUA（SEQIDNO.2）；反义链(5'->3'):UACACCACUCCCAUCUCAGUGC（SEQIDNO.3）。miR-674-5p过表达慢病毒信息：载体名称：G本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.miR-674-5p在制备用于治疗胶质瘤药物中的应用，其中所述miR-674-5p的RNA序列为：GCACUGAGAUGGGAGUGGUGUA。/n
【技术特征摘要】
20191104 CN 20191106463041.miR-674-5p在制备用于治疗胶质瘤药物中的应用，其中所述miR-674-5p的RNA序列为：GCACUGAGAUGGGAGUGGUGUA。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述miR-674-5p抑制胶质瘤细胞的增殖和迁移。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在...
【专利技术属性】
技术研发人员：何辉，金国华，李雯，秦建兵，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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