一组用于胃低分化腺癌诊断的circRNA标志物及其应用制造技术

一组用于胃低分化腺癌诊断的circRNA标志物，所述标志物包括SEQ ID NO:1所示的hsa_circ_0102434、SEQ ID NO:2所示的hsa_circ_0005505、SEQ ID NO:3所示的hsa_circ_0077837、SEQ ID NO:4所示的hsa_circ_0072309、SEQ ID NO:5所示的hsa_circ_0070033五种circRNAs，本发明专利技术对胃低分化腺癌诊断均有一定的诊断价值，其联合诊断的AUC、灵敏度和特异度均优于单项circRNA测定，AUC曲线下面积最大，灵敏度和特异度可达到90％以上，是诊断胃低分化腺癌的比较可靠的特异性生物标志物。

A set of circrna markers for the diagnosis of gastric poorly differentiated adenocarcinoma and their application

【技术实现步骤摘要】
一组用于胃低分化腺癌诊断的circRNA标志物及其应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一组用于胃低分化腺癌诊断的circRNA标志物及其应用。
技术介绍
一般而言，组织学范围内具有少量腺体结构的腺癌被诊断为低分化腺癌(Poorlydifferentiatedadenocarcinoma)。在胃癌(Gastriccancer)中，低分化腺癌主要发生在女性和年轻患者中，包括印戒细胞癌及低粘附性腺癌等。目前胃低分化性腺癌的标准治疗包括手术切除，化疗和靶向治疗。胃低分化腺癌恶性程度高，预后差。虽然随着诊治水平逐步改善，胃低分化腺癌患者的5年生存率仍较低。因此，鉴定新型生物标志物及靶向治疗位点对胃低分化腺癌具有十分重要的意义。环状RNA(circularRNA,circRNA)是由反向剪接反应(back-splicing)的特殊剪接机制形成的、具有闭合环状结构、大量存在于真核转录组中的一类特殊的非编码RNA。相较于线性非编码RNA，circRNA分子呈封闭环状结构，不受RNA外切酶影响，表达更稳定。有研究表明circRNA可以在转录以及转录后等多个层面上调节基因的表达，对机体的多种生理及病理过程起着重要的调控作用，最近的研究也发现circRNA参与肿瘤的发生发展，目前在胃癌中已有一些具有诊断潜能的circRNA标志物被相继发现，然而在胃低分化腺癌中具有诊断潜能的circRNA标志物尚无报道。
技术实现思路
：解决的技术问题：本专利技术提供用于胃低分化腺癌诊断的circRNA标志物及其应用，为胃癌诊断提供参考依据。本专利技术所提供的circRNA生物标志物对于胃癌具有很高的灵敏度和特异性，可以作为新型的生物标志物用于胃癌的检测。本专利技术可通过下列技术方案来实现：一组用于胃低分化腺癌诊断的circRNA标志物，所述标志物包括SEQIDNO:1所示的hsa_circ_0102434、SEQIDNO:2所示的hsa_circ_0005505、SEQIDNO:3所示的hsa_circ_0077837、SEQIDNO:4所示的hsa_circ_0072309、SEQIDNO:5所示的hsa_circ_0070033五种circRNAs。作为优选：所述引物组合包括：针对hsa_circ_0102434的特异性引物，针对hsa_circ_0005505的特异性引物、针对hsa_circ_0077837的特异性引物、针对hsa_circ_0072309的特异性引物、针对hsa_circ_0070033的特异性引物。作为优选：所述针对hsa_circ_0102434的特异性引物包括上游引物和下游引物，针对hsa_circ_0005505的特异性引物包括上游引物和下游引物、针对hsa_circ_0077837的特异性引物包括上游引物和下游引物、针对hsa_circ_0072309的特异性引物包括上游引物和下游引物、针对hsa_circ_0070033的特异性引物包括上游引物和下游引物。上述标志物在制备诊断胃低分化腺癌试剂盒中的应用。上述引物组合在制备诊断胃低分化腺癌试剂盒中的应用。上述引物组合在筛选或制备胃低分化腺癌靶向药物中的应用。一种胃低分化腺癌的诊断试剂盒，包括上述的引物组合。本方法采用实时荧光PCR(RT-PCR)对一组circRNA检测，对胃低分化腺癌的发现和诊断提供参考价值。(2)本方法特异性强，敏感性高，结果稳定，所提供的胃低分化腺癌诊断用circRNA生物标志物，可用于胃低分化腺癌的诊断，具有广泛的临床应用前景和巨大的商业价值。附图说明：图1为hsa_circ_0102434和hsa_circ_0005505在正常胃组织对照高中低分化腺癌中的表达水平图图2为hsa_circ_0077837、hsa_circ_0072309和hsa_circ_0070033在正常胃组织对照高中低分化腺癌中的表达水平图图3为hsa_circ_0102434用于胃低分化腺癌诊断的ROC曲线图。图4为hsa_circ_0005505用于胃低分化腺癌诊断的ROC曲线图。图5为hsa_circ_0077837用于胃低分化腺癌诊断的ROC曲线图。图6为hsa_circ_0072309用于胃低分化腺癌诊断的ROC曲线图。图7为hsa_circ_0070033用于胃低分化腺癌诊断的ROC曲线图。具体实施方式以下通过特定的具体实施说明本专利技术的实施方式。实施例11.临床样本收集病例人群和临床标本：40例来自2017年10月至2018年12月在浙江省人民医院进行的胃癌根治术病人的临床信息，以及相对应的胃癌外科手术标本和配对癌旁手手术标本，所有组织标本一旦从体内取出使用PBS清洗血水后立即保存在液氮罐中，随后将标本储存在-80℃生生物标本库直至使用，癌旁组织取自自距离癌组织边缘5cm处，且没有明显的肿瘤细胞，2.总RNA提取和定量，使用TRIzolReagent试剂盒从胃癌和癌旁组织中提取组织总RNA。然后使用超微量紫外可见分光光度计(NanoDropND2000)对于提取的总RNA进行定量。本专利技术所提供的5组hsa_circ_0102434、hsa_circ_0005505、hsa_circ_0077837、hsa_circ_0072309、hsa_circ_0070033均为胃癌患者circRNA芯片检测的结果中筛选出来的，引物序列如下所示：3.逆转录：运用用PrimeScriptRTReagentKitwithgDNAEraser(Takara，RR047A，Japan)试剂盒合成cDNA。逆转录过程引物为试剂盒内的随机引物(RandomPrimer)。3.1基因组DNA消除反应准备好除RNA样本以外的其它成分的主混合物，体积应足以容纳反应次数的2倍，将适量的主混合物放入微管中，然后加入RNA样品，具体试剂如表2：成分用量5XgDNAEraserBuffer2.0μLgDNAEraser1.0μLtotalRNA*1RNaseFreedH2OTotal10.0μL温度为：42℃2分钟(常温下5分钟)保存在4℃3.2逆转录过程：在冰面上制备反转录反应液准备一个足够的反应量的主混合液，主成分应该包含除基因组DNA消除反应溶液以外的所有成分，从步骤1中加入10μL的混合母液，然后轻轻混合，立即进行反转录反应，具体试剂如表3：在37℃下15min在85℃下5秒3.3实时荧光定量PCR：使用CFX96RealTimePCR系统，使用TBGreenPremixExTaq(Takar本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一组用于胃低分化腺癌诊断的circRNA标志物，其特征在于所述标志物包括SEQ IDNO:1所示的hsa_circ_0102434、SEQ ID NO:2所示的hsa_circ_0005505、SEQ ID NO:3所示的hsa_circ_0077837、SEQ ID NO:4所示的hsa_circ_0072309、SEQ ID NO:5所示的hsa_circ_0070033五种circRNAs。/n

【技术特征摘要】
1.一组用于胃低分化腺癌诊断的circRNA标志物，其特征在于所述标志物包括SEQIDNO:1所示的hsa_circ_0102434、SEQIDNO:2所示的hsa_circ_0005505、SEQIDNO:3所示的hsa_circ_0077837、SEQIDNO:4所示的hsa_circ_0072309、SEQIDNO:5所示的hsa_circ_0070033五种circRNAs。


2.权利要求1所述的一组circRNA标志物的引物组合，其特征在于所述引物组合包括：针对hsa_circ_0102434的特异性引物，针对hsa_circ_0005505的特异性引物、针对hsa_circ_0077837的特异性引物、针对hsa_circ_0072309的特异性引物、针...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘文胜，张晨静，王婧雅，耿晓歌，
申请(专利权)人：潘文胜，
类型：发明
国别省市：浙江;33