抽提缓冲液、兔脑抽提液、PT检测试剂及PT检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及医学检测领域，特别涉及抽提缓冲液、兔脑抽提液、PT检测试剂及PT检测试剂盒。本发明专利技术提供的抽提缓冲液包括柠檬酸盐或磷酸盐、无水乙酸钠和水。本发明专利技术通过外加电解质，增加了磷脂间电荷的斥力，使PT试剂不容易形成沉淀，更加稳定，测试时的重复性更好。

Extraction buffer, rabbit brain extract, Pt detection reagent and Pt detection kit

【技术实现步骤摘要】
抽提缓冲液、兔脑抽提液、PT检测试剂及PT检测试剂盒
本专利技术涉及医学检测领域，特别涉及抽提缓冲液、兔脑抽提液、PT检测试剂及PT检测试剂盒。
技术介绍
临床上，在手术前，为了了解患者的止血功能有无缺陷，以事前有所准备，防止术中大出血而措手不及，需要检测患者的凝血功能，而凝血酶原时间(PT)是检测凝血功能之一。PT是检测外源性凝血因子缺乏的主要途径，是证实先天性或获得性纤维蛋白原、凝血酶原和凝血因子V、VII、X的缺陷或者抑制物的存在，同时用于检测口服抗凝剂的用量，是监控口服抗凝剂的首选指标。PT试剂主要成份为组织凝血活酶(即组织因子和磷脂的混合物)，有些研究提到处理新鲜兔脑得到兔脑粉，在生理盐水中，37℃热激活，再离心得到上清液，冻干得到兔脑组织因子冻干制剂，但该专利中并未提到怎样提高兔脑组织因子冻干制剂的悬浮性。其他的学者提到了用兔脑粉为原材料PT测定体外诊断试剂盒的制备，但是并未提到怎么样提高PT试剂的悬浮性，而悬浮性直接影响到试剂的重复性。兔脑粉来源的PT试剂是通过浸润把兔脑粉含有的组织因子和磷脂这两种促进凝血的物质以溶液的形式存在，也是这两种物质构成了PT试剂的主要原材料。实际生产过程中兔脑粉的浸出物不止组织因子和磷脂两种物质，还含有其他一些蛋白质等非必须成分，这些非必须成分的存在使得兔脑粉浸出液的溶质浓度过高，另一方面使兔脑浸出液里含有大量的磷脂，这些磷脂远远超出了使PT试剂凝固所需要的最佳量。过高的溶质浓度和大量的磷脂存在使得这种PT试剂稳定性差，即容易形成沉淀。因此，提供一种稳定性好的PT试剂具有重要的现实意义。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供一种抽提缓冲液、兔脑抽提液、PT检测试剂及PT检测试剂盒。本专利技术通过外加电解质，增加了磷脂间电荷的斥力，使PT试剂不容易形成沉淀，更加稳定，测试时的重复性更好。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了兔脑粉的抽提缓冲液，以质量百分含量计，包括如下组分：在本专利技术的一些具体实施方案中，以质量百分含量计，包括如下组分：在本专利技术的一些具体实施方案中，所述柠檬酸盐为柠檬酸三钠；所述磷酸盐包括磷酸钠，磷酸钾，磷酸二氢钠，磷酸氢二钠，磷酸二氢钾或磷酸氢二钾中的一种或两者以上的混合物。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述pH值采用乙酸调节。抽提出的兔脑抽提液由于磷脂的关系，属于表面带负电荷的胶体，胶体的稳定是有条件的，一旦稳定条件被破坏，溶胶中的粒子就会聚集，长大，最后从介质中聚沉，影响胶体聚沉的因素包括加热、电解质等。由于兔脑浸出液带的是负电荷，所以只能加入低浓度高价阴离子，使负电荷间相互排斥，保持胶体粒子的稳定性，而不能只用水或者生理盐水，或者价数高的阳离子。所以加入柠檬酸三钠，由于柠檬酸三钠碱性很强，则加入酸性的无水乙酸钠降低pH值，同时用乙酸来调整pH值。可以替代柠檬酸三钠的高价阴离子化合物可以是磷酸化合物，如磷酸钠，磷酸钾，磷酸二氢钠，磷酸氢二钠，磷酸二氢钾，磷酸氢二钾等。在上述研究的基础上，本专利技术还提供了所述的抽提缓冲液在制备兔脑抽提液中的应用。本专利技术还提供了所述的抽提缓冲液在制备PT检测试剂或PT检测试剂盒中的应用。在上述研究的基础上，本专利技术还提供了兔脑抽提液，其制备方法为：取如权利要求1至4任一项所述的抽提缓冲液溶解兔脑粉，于33℃～45℃温育0.5h～1.5h；以g/mL计，所述兔脑粉与所述抽提缓冲液的质量体积比为(3～5):100。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述温育时，每15min摇匀一次，所述温育后还包括3000RPM离心后收集上清的步骤。本专利技术还提供了PT检测试剂，包括所述的兔脑抽提液、冻干保护剂、肝素拮抗剂和钙离子；所述冻干保护剂包括牛血清白蛋白、蛋白胨、甘氨酸、丙氨酸、蔗糖、海藻糖中的一种或两者以上的混合物；所述牛血清白蛋白、蛋白胨的质量百分含量为0.5％～5％，所述甘氨酸、丙氨酸、蔗糖、海藻糖的质量百分含量为0.1％～10％；试剂中加入聚凝胺可以拮抗肝素，是PT试剂在测试时不受肝素的影响，可以只对口服华法林进行监控。所述肝素拮抗剂包括聚凝胺、鱼精蛋白中的一种或两种；所述肝素拮抗剂的浓度为0.01mg/ml～0.1mg/ml；提供所述钙离子的试剂包括氯化钙、乳酸钙或碳酸钙中的一种或两者以上的混合物；所述钙离子的浓度为10mM～25mM。本专利技术还提供了PT检测试剂盒，包括所述的抽提缓冲液、所述的兔脑抽提液或所述的PT检测试剂。本专利技术提供的抽提缓冲液包括柠檬酸盐或磷酸盐、无水乙酸钠和水。本专利技术通过外加电解质，增加了磷脂间电荷的斥力，使PT试剂不容易形成沉淀，更加稳定，测试时的重复性更好。具体实施方式本专利技术公开了一种抽提缓冲液、兔脑抽提液、PT检测试剂及PT检测试剂盒，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。本专利技术提供了如下方案：1.配制抽提缓冲液柠檬酸三钠和无水乙酸钠的浓度可以是一个范围，0.1％-1％。2.兔脑抽提液的获得用配制的抽提缓冲液溶解3％～5％的兔脑粉(商业购买，质量体积比，单位为g/ml)，温育温度可以在一定的范围内，可以在33℃～45℃之间，温度越高，测正常质控的秒值越长，温度越低，测正常质控的秒值越短，温育可以调节，范围可以在30min到1.5h之间，时间越长，测正常质控秒值越长，时间越短，测正常质控秒值越短。3.冻干保护剂及肝素拮抗剂的加入向兔脑抽提液中加入冻干保护剂，肝素拮抗剂和钙离子。保护剂可以为牛血清白蛋白，蛋白胨等大分子蛋白类，浓度在0.5％-5％范围内；也可以是甘氨酸，丙氨酸等小分子蛋白，或者是小分子糖类，浓度范围在0.1％-10％范围内。肝素拮抗剂可以是聚凝胺、鱼精蛋白，浓度在0.01mg/ml-0.1mg/ml范围内。必须要加钙离子，可以选择氯化钙、乳酸钙、碳酸钙等，钙离子浓度在10-25mM范围内。本专利技术通过外加电解质，增加了磷脂间电荷的斥力，使PT试剂不容易形成沉淀，更加稳定，测试时的重复性更好。本专利技术提供的抽提缓冲液、兔脑抽提液、PT检测试剂及PT检测试剂盒中所用原料及试剂均可由市场购得。下面结合实施例，进一步阐述本专利技术：实施例1(1)配制抽提缓冲液0.3％的柠檬酸三钠，0.3％的无水乙酸钠，用乙酸调节pH至6.4。(2)兔脑抽提液的获得用配制的抽提缓冲液溶解4.5％的兔脑粉(以g/mL计，兔脑粉与抽提缓冲液的质量体积比为4.5:100)，在39℃下温育1h，每15min摇匀一次，3000RPM离心后收集上清，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.兔脑粉的抽提缓冲液，其特征在于，以质量百分含量计，包括如下组分：/n

【技术特征摘要】
1.兔脑粉的抽提缓冲液，其特征在于，以质量百分含量计，包括如下组分：





2.如权利要求1所述的抽提缓冲液，其特征在于，以质量百分含量计，包括如下组分：





3.如权利要求1或2所述的抽提缓冲液，其特征在于，所述柠檬酸盐为柠檬酸三钠；所述磷酸盐包括磷酸钠，磷酸钾，磷酸二氢钠，磷酸氢二钠，磷酸二氢钾或磷酸氢二钾中的一种或两者以上的混合物。


4.如权利要求1至3任一项所述的抽提缓冲液，其特征在于，所述pH值采用乙酸调节。


5.如权利要求1至4任一项所述的抽提缓冲液在制备兔脑抽提液中的应用。


6.如权利要求1至4任一项所述的抽提缓冲液在制备PT检测试剂或PT检测试剂盒中的应用。


7.兔脑抽提液，其特征在于，其制备方法为：取如权利要求1至4任一项所述的抽提缓冲液溶解兔脑粉，于33℃～45℃温育0.5h～1.5h；
以g/mL计，所述兔脑粉与所述抽提缓冲液的质量...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁重辉，胡晓娟，
申请(专利权)人：北京赛科希德科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11