血液透析器中二苯基甲烷-4,4′-二异氰酸酯残留的测定方法技术

本发明专利技术提供了血液透析器中二苯基甲烷‑4,4′‑二异氰酸酯残留的测定方法，为：将有机溶剂和衍生剂、内标物混合，对血液透析器密封层进行浸提，获得样品供试液；采用HPLC‑荧光‑内标法检测样品供试液中目标物含量，进而计算出残留量；激发波长250‑260nm，发射波长410‑415nm，乙腈、缓冲溶液和甲醇以30～100:0～60:0～15的体积比梯度洗脱，缓冲溶液pH为2.0～2.5，内标物为1,5‑萘二异氰酸酯，衍生剂为9‑N‑甲氨甲基蒽。本发明专利技术能准确、灵敏、高效地测定血液透析器中的二苯基甲烷‑4,4′‑二异氰酸酯残留量，这对于血液透析器的研究开发，质量控制及产品监管都具有重要的意义。

Determination of diphenylmethane-4,4 \u2032 - diisocyanate residue in blood dialyzer

【技术实现步骤摘要】
血液透析器中二苯基甲烷-4,4′-二异氰酸酯残留的测定方法
本专利技术涉及分析化学领域，尤其是涉及血液透析器中二苯基甲烷-4,4′-二异氰酸酯的测定方法。
技术介绍
血液透析器是一种用于治疗急慢性肾功能衰竭的医疗器械，由空心纤维、外壳、密封层和端盖组成。血液透析器两端是由医用聚氨酯胶黏剂密封并与外壳固定。二苯基甲烷-4,4-二异氰酸酯(MDI)或聚合的MDI为医用聚氨酯胶黏剂主体材料的一种，常用于血液透析器。MDI具有2个杂积累双键再加上芳环的吸电子效应使其化学性质非常活泼，极易与其他含活泼氢原子的化合物反应生成氨基甲酸酯结构。血液透析器在使用时密封层直接与人体血液接触，血液透析器密封层中游离的MDI与包含氨基、羟基和巯基蛋白质和缩氨酸反应，产生不同的半抗原-蛋白质复合体或抗原，从而诱发机体致敏反应，损坏免疫系统，还可能产生遗传毒性和生殖毒性。此外，MDI与血液接触后会迅速水解生成4,4-二氨基二苯甲烷(MDA)，而MDA有潜在的致癌性。血液透析器密封层MDI单体具有明显的安全风险，所以控制MDI单体残留是非常有必要的。目前尚无血液透析器MDI单体残留测定报道。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供血液透析器中二苯基甲烷-4,4′-二异氰酸酯残留的测定方法，该测定方法能够准确、灵敏、高效地测定血液透析器中二苯基甲烷-4,4′-二异氰酸酯的残留量。为了实现以上目的，本专利技术提供了以下技术方案：血液透析器中二苯基甲烷-4,4′-二异氰酸酯残留的测定方法，包括下列步骤：将有机溶剂和衍生剂、内标物混合，对血液透析器密封层进行浸提，获得样品供试液；所述内标物为1,5-萘二异氰酸酯，所述衍生剂为9-N-甲氨甲基蒽。采用高效液相色谱-荧光-内标法检测所述样品供试液中的二苯基甲烷-4,4′-二异氰酸酯的含量，进而计算出血液透析器中二苯基甲烷-4,4′-二异氰酸酯的残留量；所述检测的色谱条件为：色谱柱：C18柱，流速：1～2.5mL/min，激发波长250-260nm，发射波长410-415nm，柱温：20～30℃，进样量：3～10μL，流动相：乙腈、缓冲溶液和甲醇以30～100:0～60:0～15的体积比梯度洗脱，优选35～100:0～55:0～10的体积比，所述缓冲溶液为pH为2.0～2.5的无机盐缓冲液，优选pH2～2.3；并且所述检测时标准溶液中加入所述衍生剂。本专利技术测定方法的核心在于内标物、衍生剂以及色谱条件。相比传统检测方法，本专利技术所用的内标物和衍生剂检测二苯基甲烷-4,4′-二异氰酸酯时灵敏度和准确度更高。本专利技术用9-N-甲氨甲基蒽作衍生剂保护目标物，用1,5-萘二异氰酸酯作内标物减小误差对结果的影响以及提高回收率；采用高效液相色谱-荧光检测器，采用特定的流动相和固定相，才能将二苯基甲烷-4,4′-二异氰酸酯从浸提液中有效分离出，并且保证目标物的衍生物与邻近色谱峰的分离度大于1.5，进而提高检测方法的准确度、精密度和高效性，且满足了方法验证过程中对专属性、线性、准确度、精密度等方面的要求，该方法对于血液透析器的研究开发、质量控制及产品监管都具有重要意义。本专利技术中，流速可在1～2.5mL/min范围内任意选择，例如1mL/min、1.2mL/min、1.5mL/min、2.0mL/min、2.2mL/min等。本专利技术中，激发波长可在250-260nm范围内任意选择，例如250nm、251nm、252nm、255nm、254nm、255nm、256nm、257nm、258nm、259nm等，发射波长可在410-415nm范围内任意选择，例如410nm、412nm、414nm、415nm等。本专利技术中，柱温可在20～30℃范围内任意选择，例如20℃、22℃、25℃、27℃、29℃、30℃等。本专利技术中，进样量可在5～20μL范围内任意选择，例如5μL、6μL、8μL、10μL、15μL、18μL、20μL等。本专利技术采用梯度洗脱，乙腈/缓冲溶液的初始体积比可以为30:60:10，或者35:55:10，或者35:60:5等；终点体积比可以为30:60:10，或者35:55:10，等；初始体积比与终点体积相同，不同梯度下的流速可以相同或不同。在以上范围内，各参数的优选范围如下。优选地，所述高效液相色谱法的色谱柱为150mm×4.6mm×3.5μm的C18柱或等效色谱柱；优选地，流速为1.5～2.0mL/min，优选地，激发波长250-254nm，发射波长410-412nm，优选地，柱温为：25～30℃，优选地，进样量：5～10μL。优选地，所述缓冲溶液由醋酸铵、醋酸和水组成，以定容1L的缓冲液为例，配制过程为：精密称取1.54g醋酸铵于1L容量瓶中，用水溶解、稀释、定容，用醋酸调节pH至2.3。本专利技术中，浸提的目的是充分提取出血液透析器的密封层残留的二苯基甲烷-4,4′-二异氰酸酯，进而检测残留量，为血液透析器的安全性监控提供准确数据。因此，浸提时需浸提完全，需要进行极限浸提测试，确定浸提完全所需的条件，包括料液比、时间、重复次数等。优选地，所述浸提的方法为：将有机溶剂和衍生剂、内标物混合，对血液透析器密封层进行多次超声浸提，合并浸提液，即为样品供试液。以1g密封层样品为例，优选的浸提过程是：精密称取供试样品1g(精确到0.01g)于棕色玻璃瓶，加入10mL二氯甲烷和1.0mL衍生试剂，密封，室温超声30min,取浸提液于另一瓶中，用二氯甲烷两次清洗剩余样品，将清洗液与浸提液合并。剩余样品残渣同上操作重复浸提衍生两次。将三次浸提液氮气浓缩至干，精密加入5.0mL衍生物溶剂，超生溶解，0.45μm滤膜过滤，采用高效液相-荧光法测定。优选地，在所述合并浸提液之后，进行浓缩，之后用所述有机溶剂重溶。以上操作一方面可以富集目标物，另一方面可以除去部分杂质。优选地，每克所述密封层中衍生剂的加入量为255μg以上，优选260μg以上。通常衍生剂的加入量应过量，但量过多也不利于准确检测，针对常规的血液透析器，每克密封层加入衍生剂255μg以上足够，优选260μg。同样，优选地，每克所述密封层中内标物的加入量为0.9μg以上，优选0.93μg以上。为了提高检测准确度，优选地，所述有机溶剂为卤代烷烃，优选C1～C3的卤代烷烃，优选二氯甲烷。优选地，在所述浸提之前，将所述密封层切成碎块。另外，为了减少杂质对测定的干扰，在获取样品供试液后，建议取部分溶液氮吹至干，然后用同样的有机溶剂重溶，如有必要还可以用滤膜(通常用0.45μm滤膜)过滤。综合考虑样品的获取方法，优选的色谱条件如下：色谱柱：C18柱，柱长150mm，内径4.6mm，3.5μm或等效柱；流速：1.5～2.0mL/min；激发波长：254nm，发本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.血液透析器中二苯基甲烷-4,4′-二异氰酸酯残留的测定方法，其特征在于，包括下列步骤：/n将有机溶剂和衍生剂、内标物混合，对血液透析器密封层进行浸提，获得样品供试液；所述内标物为1,5-萘二异氰酸酯，所述衍生剂为9-N-甲氨甲基蒽；/n采用高效液相色谱-荧光-内标法，检测所述样品供试液中的二苯基甲烷-4,4′-二异氰酸酯的含量，进而计算出血液透析器中二苯基甲烷-4,4′-二异氰酸酯的残留量；/n所述检测的色谱条件为：/n色谱柱：C18柱，/n流速：1～2.5mL/min，/n激发波长250-260nm，发射波长410-415nm，/n柱温：20～30℃，/n进样量：5～20μL，/n流动相：乙腈、缓冲溶液和甲醇以30～100:0～60:0～15的体积比梯度洗脱，优选35～100:0～55:0～10的体积比，所述缓冲溶液为pH为2.0～2.5的无机盐缓冲液，优选pH2～2.3；/n并且所述检测时标准溶液中加入所述衍生剂和所述内标物。/n

【技术特征摘要】
1.血液透析器中二苯基甲烷-4,4′-二异氰酸酯残留的测定方法，其特征在于，包括下列步骤：
将有机溶剂和衍生剂、内标物混合，对血液透析器密封层进行浸提，获得样品供试液；所述内标物为1,5-萘二异氰酸酯，所述衍生剂为9-N-甲氨甲基蒽；
采用高效液相色谱-荧光-内标法，检测所述样品供试液中的二苯基甲烷-4,4′-二异氰酸酯的含量，进而计算出血液透析器中二苯基甲烷-4,4′-二异氰酸酯的残留量；
所述检测的色谱条件为：
色谱柱：C18柱，
流速：1～2.5mL/min，
激发波长250-260nm，发射波长410-415nm，
柱温：20～30℃，
进样量：5～20μL，
流动相：乙腈、缓冲溶液和甲醇以30～100:0～60:0～15的体积比梯度洗脱，优选35～100:0～55:0～10的体积比，所述缓冲溶液为pH为2.0～2.5的无机盐缓冲液，优选pH2～2.3；
并且所述检测时标准溶液中加入所述衍生剂和所述内标物。


2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述浸提的方法为：
将有机溶剂和衍生剂、内标物混合，对血液透析器密封层进行多次超声浸提，合并浸提液，即为样品供试液。


3.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于，在所述合并浸提液之后，进行浓缩，之后用...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭利娟，沈永，薄晓文，刘叶，赵长帅，秦洋，刘晓林，朱晓明，
申请(专利权)人：山东省医疗器械产品质量检验中心，
类型：发明
国别省市：山东;37