基于AAV病毒的基因编辑表达盒制造技术

本发明专利技术涉及基因编辑领域。具体而言，本发明专利技术涉及基于AAV病毒的基因编辑表达盒。更具体而言，本发明专利技术涉及基于AAV病毒的基因编辑表达盒，以及包括所述表达盒的载体和利用所述表达盒或载体的基因编辑方法。

Gene editing and expression box based on AAV virus

【技术实现步骤摘要】
基于AAV病毒的基因编辑表达盒
本专利技术涉及基因编辑领域。具体而言，本专利技术涉及基于AAV病毒的基因编辑表达盒。更具体而言，本专利技术涉及基于AAV病毒的基因编辑表达盒，以及包括所述表达盒的载体和利用所述表达盒或载体的基因编辑方法。
技术介绍
成簇的规律间隔的短回文重复序列(Clusteredregularlyinterspacedshortpalindromicrepeats，CRISPR)及其相关蛋白9(CRISPR-associatedproteins9，Cas9)在基础生物学研究、生物化学、农业、医药业等领域成为一种革命性的工具(Barrangouetal.,CRISPRprovidesacquiredresistanceagainstvirusesinprokaryotes[J].Science,2007,315(5819):1709-1712；DoudnaandCharpentier,Genomeediting.ThenewfrontierofgenomeengineeringwithCRISPR-Cas9[J].Science本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种表达盒，其包含分别位于表达盒5'端和3'端的两个反向末端重复(ITR)，以及位于两个反向末端重复之间的第一启动子、和与第一启动子可操作地连接的编码Cas9多肽的第一多核苷酸、及第二启动子、和与第二启动子可操作地连接的编码单向导RNA(sgRNA)的第二多核苷酸，其中所述表达盒的大小不超过4.3kb。/n

【技术特征摘要】
1.一种表达盒，其包含分别位于表达盒5'端和3'端的两个反向末端重复(ITR)，以及位于两个反向末端重复之间的第一启动子、和与第一启动子可操作地连接的编码Cas9多肽的第一多核苷酸、及第二启动子、和与第二启动子可操作地连接的编码单向导RNA(sgRNA)的第二多核苷酸，其中所述表达盒的大小不超过4.3kb。


2.权利要求1的表达盒，其中所述Cas9多肽为金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)Cas9(SaCas9)，如SEQIDNO:7所示，其任选地与核定位序列(NLS)连接，并且所述sgRNA为SaCas9对应的sgRNA。


3.权利要求1的表达盒，其中所述第一启动子和所述第二启动子的大小总共不超过300bp。


4.权利要求1的表达盒，其中所述第一启动子是SEQIDNO:5所示的EF1α启动子。


5.权利要求1的表达盒，其中所述第二启动子是tRNA编码序列。


6.权利要求5的表达盒，其中所述tRNA编码序列是哺乳动物的tRNA，例如GlntRNA、ProtRNA、GlytRNA、AsntRNA、CystRNA、或GlutRNA。


7.权利要求5的表达盒，其中所述tRNA编码序列是SEQIDNO:4所示的GlntRNA。


8.权利要求1的表达盒，其中所述第二启动子是小鼠γ疱疹病毒-68(MHV68)R...

【专利技术属性】
技术研发人员：褚贝贝，杨国宇，王江，刘忠虎，汪新建，钟凯，鲁维飞，郭豫杰，
申请(专利权)人：河南农业大学，
类型：发明
国别省市：河南;41