一种以玉米黄粉为原料制备免疫活性肽的方法技术

本发明专利技术提供了一种以玉米黄粉为原料制备免疫活性肽的方法，涉及免疫活性肽的制备技术领域。本发明专利技术提供的制备方法包括将玉米黄粉经去淀粉处理、复合蛋白酶酶解、碱性蛋白酶酶解、灭酶、膜分离和离心去渣制备得到；所述复合蛋白酶、碱性蛋白酶酶解包括：将所述玉米黄粉经去淀粉处理后，利用复合蛋白酶进行第一酶解，得到第一酶解液后，再用碱性蛋白酶进行第二酶解，得到第二酶解液。利用本发明专利技术的制备方法制备得到的免疫活性肽具有提高机体免疫力，增强机体免疫功能的作用。

A method of preparing immunoactive peptide from corn flour

【技术实现步骤摘要】
一种以玉米黄粉为原料制备免疫活性肽的方法
本专利技术涉及免疫活性肽的制备
，具体涉及一种以玉米黄粉为原料制备免疫活性肽的方法。
技术介绍
谷物蛋白是一类产量大、价格低廉的植物源蛋白，存在利用方法单一、不能很好发挥价值的问题。我国是玉米生产大国，玉米产量占世界玉米产量的两成以上，居世界第二。除去直接食用，玉米目前的用途有饲料用途、工业生产淀粉及糖、工业榨油，经济价值不高。玉米黄粉是湿法生产淀粉的副产物，含有约60％的蛋白质。玉米黄粉预处理后经过蛋白酶酶解改性后得到谷物蛋白水解物具有完整蛋白丰富生物活性，经过酶改性的谷物蛋白扩宽其应用领域，提高了其附加价值，得到经济价值更高的产品。免疫活性肽是指一类在生物体内具有免疫调节功能的肽类分子。在现代生活中，由于饮食不规律、不健康，年轻人及中年人生活压力大、熬夜成瘾，这些不健康的生活习惯是目前亚健康问题严重的主要因素，而亚健康必然导致机体免疫力低下，长此以往必定会使机体出现或大或小的健康问题，这也是目前好多疾病呈现年轻化趋势的主要原因，因此这类现代人急需一种提高免疫力，改善亚健康的产品；而对于免疫力低下人群(老年、儿童、慢性疾病病人)而言，寻求一种能够调解免疫的功能性食品的更加迫在眉睫。免疫活性肽的种类较多，目前而言，可以通过分离纯化天然活性肽、化学合成法、重组DNA法、蛋白质酶解法制备免疫活性肽，食物蛋白是生物活性肽的重要来源，食物蛋白分子隐藏的具有不同生物学活性的氨基酸序列经适宜的蛋白酶酶解后可被释放出来。免疫活性肽可从免疫器官、免疫细胞和免疫分子等多个层面广泛地调节机体的免疫功能，对提高机体免疫力、增强机体免疫功能以及确保机体健康具有重要的意义。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种以玉米黄粉为原料制备免疫活性肽的方法。利用本专利技术的制备方法制备得到的免疫活性肽具有提高机体免疫力，增强机体免疫功能的作用。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种以玉米黄粉为原料制备免疫活性肽的方法，包括将玉米黄粉依次去淀粉处理、复合蛋白酶酶解、碱性蛋白酶酶解、灭酶、膜分离和离心去渣制备得到；所述复合蛋白酶、碱性蛋白酶酶解包括：将所述玉米黄粉经去淀粉处理，得到蛋白质后，再利用复合蛋白酶进行第一酶解，得到第一酶解液后，再用碱性蛋白酶进行第二酶解，得到第二酶解液；所述第一酶解的条件包括：复合蛋白酶的质量占蛋白质质量的2.5％～3％，酶解温度为50℃～65℃，酶解时间为2h～3h，酶解pH值为7～8.5；所述第二酶解的条件包括：碱性蛋白酶的质量占第一酶解液总质量的2.5％～3％，酶解温度为50℃～60℃，酶解时间为2.5h～3h，酶解pH值为7～8.5。优选地，所述玉米黄粉的粒径为≤180μm。优选地，所述去淀粉处理包括：将所述玉米黄粉与PBS缓冲液混合得到悬液，再与α-淀粉酶混合后进行酶解、灭酶和离心。优选地，所述悬液中玉米黄粉的质量浓度为8％～12％。优选地，所述α-淀粉酶的质量占悬液的质量的0.8％～1.2％。优选地，所述酶解的条件包括：酶解的温度为60℃～70℃，酶解的时间为1.5h～2.5h。优选地，所述灭酶的条件包括：灭酶的温度为90℃～115℃，灭酶的时间为15min～25min。优选地，所述离心的条件包括：离心的转速为7500rpm～8500rpm，离心的时间15min～25min。优选地，所述离心去渣的条件包括：离心去渣的转速为2800rpm～3200rpm，离心去渣的时间为15min～25min。本专利技术提供了一种以玉米黄粉为原料制备免疫活性肽的方法。本专利技术采用复合蛋白酶和碱性蛋白酶对玉米黄粉进行酶解，获得了玉米黄粉酶解液，实现了对玉米黄粉的有效利用。利用本专利技术提供的制备方法制备得到的免疫活性肽可以促进机体分泌IgA、IgM和IgG，具有一定的调节机体体液免疫功能的能力；能够显著提高小鼠脾淋巴细胞增殖能力，使小鼠血清中IFN-γ、TNF-α、IL-2和IL-6含量显著提高，可促进机体的细胞免疫。附图说明图1是实施例1所制备的玉米免疫活性肽对脾淋巴细胞增殖率的影响。具体实施方式本专利技术提供了一种以玉米黄粉为原料制备免疫活性肽的方法，包括将玉米黄粉依次去淀粉处理、复合蛋白酶酶解、碱性蛋白酶酶解、灭酶、膜分离和离心去渣制备得到；所述复合蛋白酶、碱性蛋白酶酶解包括：将所述玉米黄粉经去淀粉处理得到蛋白质后，再利用复合蛋白酶进行第一酶解，得到第一酶解液后，再用碱性蛋白酶进行第二酶解，得到第二酶解液；所述第一酶解的条件包括：复合蛋白酶的质量占蛋白质质量的2.5％～3％，酶解温度为50℃～65℃，酶解时间为2h～3h，酶解pH值为7～8.5；所述第二酶解的条件包括：碱性蛋白酶的质量占第一酶解液总质量的2.5％～3％，酶解温度为50℃～60℃，酶解时间为2.5h～3h，酶解pH值为7～8.5。本专利技术对所述玉米黄粉的来源没有特殊限定，采用常规市售产品即可。在本专利技术中，所述玉米黄粉的粒径优选≤180μm。在本专利技术中，所述去淀粉处理优选包括：将所述玉米黄粉与PBS缓冲液混合得到悬液，再与α-淀粉酶混合后进行酶解、灭酶和离心。在本专利技术中，所述悬液的质量浓度优选为8％～12％，更优选为10％。本专利技术对所述α-淀粉酶的来源没有特殊限定，优选酶活≥3700活力单位/克的市售α-淀粉酶。在本专利技术中，所述α-淀粉酶的质量优选占悬液的质量的0.8％～1.2％，更优选为1％。在本专利技术中，所述α-淀粉酶优选购置于北京奥博星生物技术有限责任公司，生产批号为20170206，货号为01-067。在本专利技术中，所述α-淀粉酶进行酶解的条件优选包括：酶解的温度为60℃～70℃，更优选为65℃；酶解的时间优选为1.5h～2.5h，更优选为2h。在本专利技术中，所述去淀粉处理的过程中灭酶的条件优选包括：灭酶的温度为90℃～115℃，优选为100℃；灭酶的时间为15min～25min，优选为20min。在本专利技术中，所述去淀粉处理的过程中离心的条件优选包括：离心转速为7500rpm～8500rpm，优选为8000rpm；离心时间15min～25min，优选为20min。在本专利技术中，所述复合蛋白酶、碱性蛋白酶酶解包括：将所述玉米黄粉经去淀粉处理，得到蛋白质后，再利用复合蛋白酶进行第一酶解，得到第一酶解液后，再用碱性蛋白酶进行第二酶解，得到第二酶解液。在本专利技术中，所述复合蛋白酶优选为诺维信Protamex酶，产自天津诺维信(中国)生物技术有限公司，地址天津经济技术开发区南海路150号。在本专利技术中，所述第一酶解的条件包括：复合蛋白酶的质量占底物总质量的2.5％～3％；酶解温度为50℃～65℃，优选为60℃；酶解时间为2h～3h，优选为2.5h；酶解pH值为7～8.5，优选为8。在本专利技术中，所述复合蛋白酶在低水解度的情况下也能产出没有苦味的蛋白水解液，所述复合蛋白酶本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种以玉米黄粉为原料制备免疫活性肽的方法，其特征在于，包括将玉米黄粉依次去淀粉处理、复合蛋白酶酶解、碱性蛋白酶酶解、灭酶、膜分离和离心去渣制备得到；/n所述复合蛋白酶、碱性蛋白酶酶解包括：将所述玉米黄粉经去淀粉处理，得到蛋白质后，再利用复合蛋白酶进行第一酶解，得到第一酶解液后，再用碱性蛋白酶进行第二酶解，得到第二酶解液；/n所述第一酶解的条件包括：复合蛋白酶的质量占蛋白质质量的2.5％～3％，酶解温度为50℃～65℃，酶解时间为2h～3h，酶解pH值为7～8.5；/n所述第二酶解的条件包括：碱性蛋白酶的质量占第一酶解液质量的2.5％～3％，酶解温度为50℃～60℃，酶解时间为2.5h～3h，酶解pH值为7～8.5。/n

【技术特征摘要】
1.一种以玉米黄粉为原料制备免疫活性肽的方法，其特征在于，包括将玉米黄粉依次去淀粉处理、复合蛋白酶酶解、碱性蛋白酶酶解、灭酶、膜分离和离心去渣制备得到；
所述复合蛋白酶、碱性蛋白酶酶解包括：将所述玉米黄粉经去淀粉处理，得到蛋白质后，再利用复合蛋白酶进行第一酶解，得到第一酶解液后，再用碱性蛋白酶进行第二酶解，得到第二酶解液；
所述第一酶解的条件包括：复合蛋白酶的质量占蛋白质质量的2.5％～3％，酶解温度为50℃～65℃，酶解时间为2h～3h，酶解pH值为7～8.5；
所述第二酶解的条件包括：碱性蛋白酶的质量占第一酶解液质量的2.5％～3％，酶解温度为50℃～60℃，酶解时间为2.5h～3h，酶解pH值为7～8.5。


2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述玉米黄粉的粒径≤180μm。


3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述去淀粉处理包括：将所述玉米黄粉与PBS缓冲液混合得到悬液，再与α-淀粉酶混合后进行酶解、灭酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑喜群，刘晓兰，林巍，高健，
申请(专利权)人：齐齐哈尔大学，
类型：发明
国别省市：黑龙;23