本发明专利技术属于农业微生物领域，具体涉及一种提高豌豆耐冷耐湿性的微生物菌剂及其应用，其活性成分为植物乳杆菌YuN21和根瘤菌，所述植物乳杆菌YuN21的分类名为Lactobacillus plantarum，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，该微生物菌剂应用在提高豌豆耐冷耐湿性方面，既能够提高秋播豌豆的耐冷性，有利于冻害后的复苏，同时又能够降低春播豌豆遭受湿冷天气时的烂种、出苗不整齐、弱苗多和成苗率低等问题的发生率，应用的操作方法简单、实用，对环境友好，适合于农业领域大规模使用及推广。
Microbial agents for improving cold and humidity resistance of pea and their application
【技术实现步骤摘要】
提高豌豆耐冷耐湿性的微生物菌剂及其应用
本专利技术属于农业微生物领域，具体涉及一种提高豌豆耐冷耐湿性的微生物菌剂及其应用。
技术介绍
豌豆，又名寒豆、麦豆，耐贫瘠干旱，但不喜湿冷，是世界第四大豆类作物。我国是世界第一大豌豆生产国，在世界豌豆生产中占有举足轻重的地位。近年来，我国广大农户、农场和农业公司对豌豆栽培的积极性日益提高，栽培面积逐年扩大。但是，随着全球气候出现异常，传统的耕作模式受到冲击，作物在遭受冻害后，叶片脯氨酸含量、叶绿素含量和过氧化物酶活性均呈下降趋势，丙二醛含量则呈上升趋势，冻害加剧时，作物的根会被冻伤而逐渐腐烂，最终导致植株死亡。豌豆产量受气温影响明显，即使在豌豆品种和栽培技术变化不大的情况下，产量波动仍然较大，这表明气温对豌豆产量的影响是明显的。秋播豌豆一般在10月中、下旬播种，幼苗在1月份里常遭受雨雪等冻害天气，这表现为茎蔓冻伤，或豌豆的地上部分受到大面积的冻伤，同时豌豆田外沟渠不通畅则可能发生渍害，这将影响豌豆的产量和品质。而春播豌豆往往由于遇到早春的低温阴雨而烂种、出苗不整齐、弱苗多和成苗率低。豌豆幼苗能耐寒，发芽最低温度-2℃。但幼苗在-6～-8℃、开花期在-2～-3℃、结荚期在-3～-4℃时将受冻害，生长期内以13～18℃时为最适宜。低温冻害天气出现时，传统秋播和春播豌豆会受到冻害，这造成豌豆存在一个如何安全越过冻害和产量不下降的问题。通过筛选抗冻材料进行豌豆抗冻性育种，可以减少豌豆种植过程中的冻害损失。但耐冷品种的选育需要花费几年甚至十几年的时间，是一个相对较慢的过程，当前迫切需要有一个相对较快的解决方法。有研究指出，当豌豆种子在水中吸涨时，细胞死亡的原因是由于吸涨的最初几分钟快速吸收水分造成的；另有研究证明，在吸涨前使胚轴缓慢地吸水至35％～50％的含水量，便能减少吸涨时溶质的渗漏和增加对吸涨冷害的抗性。现有资料证明，用30％聚乙二醇预先浸种可以减轻低温吸涨时的冷害，聚乙烯醇溶液预处理大豆种子同样能够达到上述目的。目前，通过化控技术调节作物的理化性质来提高其抗冷性，已成为缓解低温冷害的重要途径之一，如专利CN2018115527754公布了芸苔素内酯、磷酸二氢钾、赤霉素组成的混合物对水稻具有较好的抗寒生理调节功效，但是化控技术不可避免的会应用到化学试剂等，对环境以及作物都存在污染的问题，因此急需一种有效、环保的解决方法。微生物在我国农业中的重要作用日益凸显，农业中面临的许多重大问题都离不开微生物的应用。除了最早应用于生物固氮之外，农业微生物还在增强土壤肥力，提高化肥利用率，抑制农作物对硝态氮重金属和农业的吸收，净化修复水质土壤，降低作物病虫害发生，保护环境以及提高农产品品质和食品安全等方面表现出不可替代的作用。因此，针对如何应用微生物菌剂来提高豌豆耐冷温耐湿涝的研究，在理论和实践上都有意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决现有技术无法有效解决豌豆耐冷耐湿性的问题，提出了一种提高豌豆耐冷耐湿性的微生物菌剂及其应用，该微生物菌剂能够提高秋播豌豆的耐冷性，有利于冻害后的复苏；也能够降低春播豌豆遭受湿冷天气时的烂种、出苗不整齐、弱苗多和成苗率低等问题的发生率。本专利技术的技术方案是：提高豌豆耐冷耐湿性的微生物菌剂，所述微生物菌剂的活性成分为植物乳杆菌YuN21和根瘤菌，所述植物乳杆菌YuN21在genbank上的序列号为MG832381，其分类为Lactobacillusplantarum，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2018年02月06日，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNO.15346。进一步的，所述植物乳杆菌YuN21和根瘤菌的集落形成单位(cfu)数目比为1:2。进一步的，提高豌豆耐冷耐湿性的微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：(1)菌株的活化：取出-20℃条件下保存的植物乳杆菌YuN21，用接种环蘸取少许菌液于MRS固体培养基上划线，温度37℃的条件下培养10～12小时，用接种环挑取MRS固体培养基上的单菌落，接种于装有40mLMRS液体培养基的100mL三角瓶中，在温度37℃的条件下培养8～10小时得到活化的乳杆菌；此时，每毫升MRS液体培养基中至少含有1×107cfu乳杆菌，为乳杆菌的一级培养菌；(2)微生物菌剂的制备：将活化培养好的植物乳杆菌YuN21和市售的根瘤菌按cfu比1:2进行混合，按10％的接种量把混合菌液放入MRS液体培养基中进行发酵培养，温度30℃的条件下培养18-22小时，得到发酵的微生物菌剂。进一步的，所述MRS液体培养基每升的组成及含量为：豌豆粉30g/L、乳糖15g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、L-光胱胺酸盐酸盐0.05g/L、血红素0.5g/L、碳酸钙10g/L、K2HPO42g/L、MgSO4·7H2O0.58g/L、MnSO4·H2O0.25g/L、Tween-801ml/L，pH值为6.4，121℃灭菌15分钟；所述MRS固体培养基每升的组成及含量为：上述MRS液体培养基中加入质量百分比1.5％的琼脂粉，调pH值为6.4，121℃灭菌15分钟。进一步的，每l升微生物菌剂中至少含有1×1010cfu活菌。所述微生物菌剂在提高豌豆耐冷耐湿性中的应用。进一步的，所述应用包括如下步骤：秋播和春播豌豆在播种前的2-3天，选取籽粒饱满、无虫蛀粒的豌豆为种子，将种子装入网袋内，浸没入微生物菌剂的发酵液体培养基中，30-35min后取出网袋，放在通风处挂起晾干；晾干后将菌液处理后的豌豆种子播入田间。本专利技术的有益效果：本专利技术提供的提高豌豆耐冷耐湿性的微生物菌剂，既能够提高秋播豌豆的耐冷性，有利于冻害后的复苏，同时又能够降低春播豌豆遭受湿冷天气时的烂种、出苗不整齐、弱苗多和成苗率低等问题的发生率，提高了农作物的经济效益；该微生物菌剂应用的操作方法简单、实用，对环境友好，适合于农业领域大规模使用及推广。具体实施方式下面将结合具体实施例对本专利技术的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下，所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。为了进一步理解本专利技术，下面结合实施例对本专利技术进行详细说明。实施例1一种提高豌豆耐冷耐湿性的微生物菌剂，其活性成分为植物乳杆菌YuN21和根瘤菌，植物乳杆菌YuN21和根瘤菌的的cfu比为1:2。植物乳杆菌YuN21的分类名为Lactobacillusplantarum，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2018年02月06日，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNO.15346；根瘤菌为市售的根瘤菌。MRS液体培养基每升的组成及含量为：豌豆粉30g/L、乳糖15g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、L-光胱胺酸盐酸盐0.05g/L、血红素0.5g本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.提高豌豆耐冷耐湿性的微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂的活性成分为植物乳杆菌YuN21和根瘤菌，所述植物乳杆菌YuN21的分类名为Lactobacillus plantarum，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2018年02月06日，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC NO.15346。/n
【技术特征摘要】
1.提高豌豆耐冷耐湿性的微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂的活性成分为植物乳杆菌YuN21和根瘤菌，所述植物乳杆菌YuN21的分类名为Lactobacillusplantarum，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2018年02月06日，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNO.15346。
2.根据权利要求1所述的提高豌豆耐冷耐湿性的微生物菌剂，其特征在于，所述植物乳杆菌YuN21和根瘤菌的集落形成单位数目比为1:2。
3.权利要求1-2中任一项所述的提高豌豆耐冷耐湿性的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)菌株的活化：取-20℃条件下保存的植物乳杆菌YuN21，于MRS固体培养基上划线，温度37℃的条件下培养10～12小时，将培养的单菌落挑出，接种于MRS液体培养基中，在温度37℃的条件下培养8～10小时，得到活化的乳杆菌；此时，每毫升MRS液体培养基中至少含有1×107cfu乳杆菌，为乳杆菌的一级培养菌；
(2)微生物菌剂的制备：将活化培养好的植物乳杆菌YuN21和根瘤菌按cfu比1:2进行混合，按10％的接种量把混合菌液放入MRS...
【专利技术属性】
技术研发人员：郝俊杰，张晓艳，刘全兰，宋凤景，崔潇，王文娇，张涛，李红卫，李磊，仇世佐，
申请(专利权)人：青岛市农业科学研究院，
类型：发明
国别省市：山东;37
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