IL-2部分与聚合物的缀合物制造技术

提供一个IL‑2部分与一种或多种非肽水溶性聚合物的缀合物。一般而言，该非肽水溶性聚合物是聚(乙二醇)或其衍生物。尤其还提供包含缀合物的组合物、制备缀合物的方法、向一名个体施用组合物的方法、核酸序列、表达系统、宿主细胞以及用于制备IL‑部分的方法。

Conjugation of IL-2 with polymer

【技术实现步骤摘要】
IL-2部分与聚合物的缀合物本申请是申请号为201180064511.4(PCT/US2011/060408)、申请日为2011年11月11日、专利技术名称为“IL-2部分与聚合物的缀合物”的中国专利申请的分案申请。相关申请的交叉引用本申请要求2010年11月12日提交的美国临时专利申请号61/413,236的优先权益，该申请的披露内容通过引用以其全文结合在此。
尤其，本专利技术的一个或多个实施例总体上涉及包含一个IL-2部分(即一个具有与人IL-2类似的至少某种活性的部分)及一种聚合物的缀合物。另外，本专利技术涉及(尤其)包含缀合物的组合物、用于合成缀合物的方法以及施用一种组合物的方法。
技术介绍
在健康人类中，免疫系统可以区分健康细胞与癌细胞。在确定一个给定细胞为癌性时，免疫系统一般将它消除。因此，当免疫系统失效或不堪重负时，由于一个受损的免疫系统不能区分并且接着消除癌细胞，故癌症可能发展。在一个罹患癌症的患者中，向该患者施用一种免疫调节蛋白可以帮助这位患者的免疫系统恢复(至少部分地)到正常，从而患者免疫系统消除癌细胞的能力恢复。以这种方式，可以减缓或甚至消除癌症。一种在治疗罹患某些癌症的患者中所用的免疫调节蛋白是白细胞介素-2。白细胞介素-2(IL-2)是一种天然存在的细胞因子，这种细胞因子具有作为天然杀伤细胞(naturalkillercell)(NK细胞)刺激剂和作为T细胞增殖诱导剂的活性。在非糖基化形式下，IL-2具有约15,300道尔顿的分子量(不过发现IL-2在体内处于可变糖基化的形式)。已批准向罹患转移性肾细胞癌和转移性黑素瘤的患者施用一种可商购的非糖基化人重组IL-2产品阿地白介素(aldesleukin)(可以商标的脱-丙氨酰基-1,丝氨酸-125人白细胞介素-2从加利福尼亚州圣地亚哥的普罗米修斯实验室公司(PrometheusLaboratoriesInc.,SanDiegoCA)获得)。也已建议在罹患或感染以下疾病的患者中施用IL-2：丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus，HCV)、人类免疫缺陷病毒(HIV)、急性髓样白血病、非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin'slymphoma)、皮肤T细胞淋巴瘤、幼年型类风湿性关节炎、特应性皮炎、乳腺癌以及膀胱癌。然而，甚至推荐剂量的阿地白介素也可能引起严重副作用，包括毛细血管渗漏综合症(capillaryleaksyndrome，CLS)和受损的嗜中性粒细胞(neutrophil)功能。考虑到这些严重副作用的可能，并且因为推荐的治疗周期涉及每八个小时经十五分钟静脉内输注十四次剂量，所以在一种临床环境(clinicalsetting)内进行阿地白介素的施用。此外，阿地白介素的商业制剂包括十二烷基硫酸钠的存在，十二烷基硫酸钠是一种似乎需要通过构象稳定性来维持最佳活性的物质。参看荒川(Arakawa)等人(1994)国际肽蛋白研究杂志(Int.J.PeptideProteinRes).43:583-587。已努力尝试解决与IL-2有关的毒性。在一种方法中，已尝试多种配制方法。参看例如美国专利号6,706,289以及国际专利申请公开WO02/00243和WO99/60128。在其他方法中，已提出IL-2的某些缀合物。参看例如美国专利号4,766,106、5,206,344、5,089,261以及4902,502。然而，尽管有这些方法，但仍对IL-2的缀合物存在需要。因此，本专利技术的一个或多个实施例尤其针对此类缀合物以及包含这些缀合物的组合物以及如在此所描述的相关方法，它们据信是新的并且完全未由现有技术提出。
技术实现思路
因此，在本专利技术的一个或多个实施例中，提供一种缀合物，该缀合物包含与一种水溶性聚合物共价连接的一个IL-2部分的一个残基。在本专利技术的一个或多个实施例中，提供一种缀合物，该缀合物包含与一种水溶性聚合物共价连接的一个IL-2部分的一个残基，其中该IL-2部分的残基通过一个可释放键与水溶性聚合物共价连接。在本专利技术的一个或多个实施例中，提供一种缀合物，该缀合物包含与一种水溶性聚合物共价连接的一个IL-2部分的一个残基，其中该IL-2部分是一个前体IL-2部分。在本专利技术的一个或多个实施例中，提供一种缀合物，该缀合物包含与一种水溶性聚合物共价连接的一个IL-2部分的一个残基，其中该IL-2部分是一个非前体IL-2部分。在本专利技术的一个或多个实施例中，提供一种用于递送一种缀合物的方法，该方法包括以下步骤：向一位患者皮下施用一种由一个IL-2的一个残基与一种水溶性聚合物的一种缀合物组成的组合物。在本专利技术的一个或多个实施例中，提供一种分离的核酸分子，该分离的核酸分子编码一个IL-2部分，其中所述核酸分子包含与SEQIDNO:5中所阐明的序列具有大量(例如至少80％)序列同一性的序列。在本专利技术的一个或多个实施例中，提供一种表达载体，该表达载体(例如一种体外表达载体)包含在此所提供的一种核酸分子。在本专利技术的一个或多个实施例中，提供一种宿主细胞，该宿主细胞(例如一种体外宿主细胞)包含如在此所提供的一种表达载体。附图说明图1提供实例1中进一步所描述的一种基因的DNA序列和所得氨基酸序列。图2.1是在遵循实例2中所阐述的程序制备的[mPEG2-C2-fmoc-20K]-[rIL-2]的阳离子交换层析之后的一个典型色谱图的一个图示。图2.2是如实例2中进一步所描述，在[mPEG2-C2-fmoc-20K]-[rIL-2]的反相HPLC分析之后的一个色谱图的一个图示。图2.3是根据实例2中所阐述的程序制备的不同缀合物的释放曲线的一个图。图3.1是在遵循实例3中所阐述的程序制备的[mPEG2-CAC-fmoc-20K]-[rIL-2]的阳离子交换层析之后的一个典型色谱图的一个图示。图3.2是如实例3中进一步所描述，在[mPEG2-CAC-fmoc-20K]-[rIL-2]的反相HPLC分析之后的一个色谱图的一个图示。图3.3是在根据实例3中所阐述的程序制备的不同缀合物M的ALDI-TOF分析之后的结果的一个图示。图4.1是在遵循实例4中所阐述的程序制备的[mPEG2-ru-20K]-[rIL-2]的阳离子交换层析之后的一个典型色谱图的一个图示。图4.2是如实例4中进一步所描述，[mPEG2-ru-20K]-[rIL-2]在反相HPLC分析之后的一个色谱图的一个图示。图5是如实例5中进一步所描述，在[mPEG2-ru-40K]-[rIL-2]的阳离子交换层析之后的一个色谱图的一个图示。图6是如实例6中进一步所描述，在[mPEG2-ru-4K]-[rIL-2]在阳离子交换层析之后的一个色谱图的一个图示。图7示出了如实例11中进一步所描述，CTLL-2细胞响应于阿地白介素和稳定[mPEG2-ru-20K]-[rIL-2]而增殖的一个图。数据点是一式三份测定的一个实验的均值本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种缀合物，包含与一种水溶性聚合物共价连接的一个IL-2部分的一个残基。/n

【技术特征摘要】
20101112 US 61/413,2361.一种缀合物，包含与一种水溶性聚合物共价连接的一个IL-2部分的一个残基。


2.如权利要求1所述的缀合物，其中与该水溶性聚合物共价连接的该IL-2部分经一个可释放键共价连接。


3.如权利要求1所述的缀合物，其中与该水溶性聚合物共价连接的该IL-2部分经一个稳定键共价连接。


4.如权利要求1、2以及3中任一项所述的缀合物，其中该水溶性聚合物是一种分枝的水溶性聚合物。


5.如权利要求1、2、3以及4中任一项所述的缀合物，其中该水溶性聚合物是一种选自下组的聚合物，该组由以下各项组成：聚(环氧烷)、聚(乙烯基吡咯烷酮)、聚(乙烯醇)、聚噁唑啉以及聚(丙烯酰基吗啉...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·J·波萨德，C·F·阿里，X·刘，D·H·卡瑞士，H·萨皮，王宇君，J·黄，
申请(专利权)人：尼克塔治疗公司，
类型：发明
国别省市：美国;US