一种使用定制设备用于燕窝提取物的提取方法技术

一种燕窝提取物的提取方法，其包括：通过浸泡在蒸馏水中提取燕窝样品并去除任何异物，以形成清洁的食用燕窝样品，该样品在30℃至50℃下干燥3至6天以去除过量的水并实现干燥度和脆度而形成粉末，该粉末悬浮在蒸馏去离子水中0.2％(W/V)；然后在4℃的冷蒸馏水中洗脱，以使燕窝膨胀至最佳，使其暴露于硫酸中以完全提取；在80℃的定制装置中煮沸4小时以溶解成单一混合物，该冷却的混合物用氢氧化钡调节其pH值以形成上清液和沉淀；然后通过离心分离去除中和的硫酸钡，将该上清液冻干并保持在‑80℃以产生燕窝提取物。该方法有效地保留了燕窝提取物中的唾液和蛋白质。

A method of extracting bird's nest extract with customized equipment

【技术实现步骤摘要】
一种使用定制设备用于燕窝提取物的提取方法
使用有效地保留唾液酸和蛋白质的提取方法从培育燕窝精华中提取酸。
技术介绍
燕窝是一种传统的中国食物，自古以来就因其健康和美容属性而被人们食用和垂涎。它主要产于中国南部沿海地区、马来西亚、泰国和印度尼西亚。燕窝成分含有一种叫做燕窝酸的活性物质，其也称为唾液酸。燕窝提取唾液酸和蛋白质的主要方法之一是在30℃至60℃下使用水溶液30分钟至12小时，通过搅拌并抽真空溶液，然后加入蛋白酶进行水解、过滤、浓缩和灭菌来获得唾液酸。现有技术之一(即WO2017012088)的提取方法采用在进行蛋白酶处理之前搅拌和抽真空食用燕窝提取物的常用技术。用于这种水解的酶是单独使用或组合使用木瓜蛋白酶、胰蛋白酶或菠萝酶。停止蛋白酶反应，然后过滤、浓缩和灭菌食用燕窝水解物来得到食用燕窝提取物。该方法要求唾液酸保留1％-13％，并且以燕窝提取物的4％-15％(按重量计)获取蛋白质。MOLTI-TOF-MS(MZ)结果列出了许多检测到的化合物，但未明确表明发现了哪种化合物，也没有表明哪种MZ指的是唾液酸，以及EGF的两种生长因子(上皮生长因子)和FGF(成纤维细胞生长因子)。用高效液相色谱法分别确认唾液酸的量，其中确定的量范围为1％-13％。通过使用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分别确定在该提取物中发现的蛋白质(EGF和FGF)的分子量，其中确定的分子量范围为从100DA至300KDA。通过ELISA和商业EGF和FGF试剂盒作为标准来确定提取的食用燕窝中EGF和FGF二者是否存在。基于商业EGF和FGF试剂盒确定EGF和FGF的浓度。现有技术未提及在SDS凝胶上分离的EGF和FGF的条带是否对应于EGF和FGF。需要进行LC-MS-MS(液相色谱-质谱-质谱)分析并且有必要确认EGF和FGF的化学结构，该分析没有在现有技术中进行。此外，所报道的总蛋白质的分子量分布很大，其范围为从100DA到300KDA，并且检测到的总蛋白质含量小于6.5KDA，为0.6％-6.4％(按重量计)。鉴于分子量分布巨大以及在食用燕窝中检测到的总蛋白含量小于6.5KDA(0.6％-6.4％)，很可能无法确认SDS凝胶上分离出的条带是否与EGF和FGF具体对应。应该对这两个条带的提取进行LC-MS-MS分析，以确认EGF和FGF的化学结构。此外，现有技术在冷冻干燥过程中向食用燕窝提取物中添加高达10％的糊精(作为赋形剂)以获得粉末状食用燕窝提取物。添加糊精的目的是避免在冷冻干燥过程中产生气泡并保持反应过程的稳定性。糊精是由淀粉或糖原经由水解产生的低分子量碳水化合物。糊精是由α-(1→4)或α-(1→6)糖苷键连接的D-葡萄糖单元聚合物的混合物。它是用作增稠剂和粘合剂的食品添加剂。这可能会引起人们对食用燕窝纯度的担忧，因为糊精在制备食用燕窝提取物时充当增稠剂和粘合剂。在现有技术WO2017012088中的提取方法具有以下缺点：使用长达12小时(长时间处理)的蛋白酶处理(木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和菠萝酶)可能将所有蛋白质消化(破碎)成小肽。在该方法中报道的蛋白质量仅为食用燕窝重量的4％-15％，并且如何得出4％-15％的数字缺乏清晰度。对于所分析的总蛋白质含量，没有上述现有技术中描述的分析方法的细节。另一方面，发现的总蛋白质含量基于使用SDS-PAGE凝胶分离的分子量分布。巨大的分子量分布范围为从100DA至300KDA，仅检测到从0.6％至6.4％的蛋白质低于6.5KDA。与报道的其他研究相比，该方法报道的蛋白质含量较低。一些研究报道了40％-60％的食用燕窝粗提物。上述现有技术方法可以提取并保留相当数量的1％-13％的唾液酸(其取决于不同的燕窝样品)，唾液酸的百分比是基于高效液相色谱(HPLC)确定的，并且未通过在所述申请中使用的MALDI-TOF-MS检测到的结果进行确认。在市购EGF和FGF之间进行比较，并且EGF和FGF通过SDS-PAGE分离在食用燕窝中出现，在1克食用燕窝粉(破碎的食用燕窝)中仅发现0.09832μg的EGF和38ng-835ng至261.88ng的EGF。基于商业EGF和FGF估计该量。应提取在SDSPAGE凝胶上分离的EGF和FGF，并进行LC-MS-MS分析以确认其化学结构并决定其浓度。所述现有技术还具有基于用不同MZ的MALDI-TOF-MS分析检测的化合物列表(质量是指碎片分子的离子电荷)，但是现有技术没有具体表明所发现的化合物是什么，并且也没有表明哪个MZ指的是唾液酸，并且EGF(上皮生长因子)和FGF(成纤维细胞生长因子)的两种生长因子糊精被添加到食用燕窝中以在冷冻干燥过程中稳定提取物。这可能会改变食用燕窝提取物的颜色、味道和质地。
技术实现思路
鉴于上述问题，本专利技术是一种使用保留相当大量唾液酸的定制设备来提取燕窝提取物的方法。为了实现上述目的，根据本专利技术的用于提取燕窝的方法包括去除燕窝样品中的异物羽毛和污垢的步骤，将不洁净的燕窝浸泡在双蒸水中软化，用镊子从软化的燕窝中去除异物，然后过滤所述燕窝以去除含有较小尺寸异物的水，清洁后的燕窝形成食用燕窝样品，其中清洁过的食用燕窝样品在30℃至50℃的烘箱中干燥3至6天，以去除清洁过的燕窝样品中存在的任何过多水分达到适当的干燥度和脆度；将干燥的燕窝样品研磨成粉末状，避免样品变成凝胶，然后将粉末燕窝样品悬浮在0.2％(W/V)的蒸馏去离子水中，然后将悬浮的样品在4℃的冷蒸馏去离子水中洗脱，以确保燕窝样品的膨胀能力达到最佳水平，燕窝和燕窝样品的最大膨胀能力将使样品暴露在硫酸中进行完全提取。在一个实施例中，燕窝提取物的提取方法步骤还包括将洗脱的燕窝样品在定制的设备步骤中使用0.4M酸性硫酸在规定的最佳温度80℃下煮沸4个小时，直到燕窝样品完全溶解并形成单一混合物。在一个实施例中，其中在提取方法步骤中将沸腾的混合物步骤留下以待冷却并过滤去除任何不溶物。在一个实施例中，其中在提取方法步骤中使用氢氧化钡粉末将所述过滤的混合物步骤调节至pH7.0，以形成上清液和沉淀的混合物。在一个实施例中，其中在提取方法中将粉末状的氢氧化钡加入到酸水解的燕窝提取物中以中和酸性硫酸、中和导致形成硫酸钡沉淀，通过离心分离去除所述硫酸钡沉淀的步骤，在本专利技术中使用氢氧化钡克服了食用燕窝提取物中酸性硫酸溶液的问题，酸性硫酸的含量可以通过氢氧化钡完全去除，离心分离是更安全也更容易去除沉淀硫酸钡的方法。在一个实施例中，其中在提取方法中将混合物离心分离以从上清液中去除沉淀物。在一个实施例中，提取方法还包括冻干步骤并保持在-80℃，以产生燕窝提取物。如上所述，实施本专利技术的燕窝提取物的提取方法具有相当数量的唾液酸。本专利技术能够提取总共36种化合物，这些化合物可以分为5类；肽和氨基酸；碳水化合物；脂质；维生素；和次级代谢产物。发现的两种唾液酸是N-乙酰基-b-神经氨酸和2,7-脱水-α-N-乙酰神经氨酸。附图说明图1是用于维持调节后最佳温度的定制加热设备。图2是被分为5个类别的36本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种燕窝酸提取物的提取方法，所述提取方法包括：/n提供初步步骤，以去除燕窝样品中的异物羽毛和污垢，将不洁净的燕窝浸泡在双蒸水中软化，用镊子从所述软化的燕窝中去除异物，然后过滤所述燕窝以去除含有较小尺寸异物的水，清洁后的燕窝形成食用燕窝样品，其中所述清洁过的食用燕窝样品在30℃至50℃的烘箱中干燥3至6天，以去除清洁过的燕窝样品中存在的任何过多水分达到适当的干燥度和脆度；将所述干燥的燕窝样品研磨成粉末状，避免样品变成凝胶，然后将所述粉末燕窝样品悬浮在0.2％(W/V)的蒸馏去离子水中，然后将所述悬浮的样品在4℃的冷蒸馏去离子水中洗脱，以确保所述燕窝样品的膨胀能力达到最佳水平，所述燕窝和所述燕窝样品的最大膨胀能力将使所述样品暴露在硫酸中进行完全提取。/n

【技术特征摘要】
1.一种燕窝酸提取物的提取方法，所述提取方法包括：
提供初步步骤，以去除燕窝样品中的异物羽毛和污垢，将不洁净的燕窝浸泡在双蒸水中软化，用镊子从所述软化的燕窝中去除异物，然后过滤所述燕窝以去除含有较小尺寸异物的水，清洁后的燕窝形成食用燕窝样品，其中所述清洁过的食用燕窝样品在30℃至50℃的烘箱中干燥3至6天，以去除清洁过的燕窝样品中存在的任何过多水分达到适当的干燥度和脆度；将所述干燥的燕窝样品研磨成粉末状，避免样品变成凝胶，然后将所述粉末燕窝样品悬浮在0.2％(W/V)的蒸馏去离子水中，然后将所述悬浮的样品在4℃的冷蒸馏去离子水中洗脱，以确保所述燕窝样品的膨胀能力达到最佳水平，所述燕窝和所述燕窝样品的最大膨胀能力将使所述样品暴露在硫酸中进行完全提取。


2.如权利要求1所述的提取过程，其中将所述洗脱的燕窝样品在定制的设备步骤中使用0.4M酸性硫酸在规定的最佳温度80℃下煮沸4个小时，直到所述燕窝样品完全溶解并形成单一混合物为止。


3.如权利要求2所述的提取过程，其中将所述沸腾的混合物步骤留待冷却并过滤去除任何不溶物。


4.如权利要求3所述的提取过程，其中使用氢氧化钡粉末将所述过滤的混合物步骤调节至pH7.0，以形成上清液和沉淀的混合物。


5.如权利要求4所述的提取过程，其中所述步骤为：将粉末状的氢氧化钡加入到酸水解的...

【专利技术属性】
技术研发人员：林阳美，何语双，常松建，谭志宏，
申请(专利权)人：皇家燕窝私人有限公司，拉曼大学，
类型：发明
国别省市：马来西亚;MY