DRD5及其激动剂在制备治疗炎症性疾病的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种DRD5蛋白及其激动剂在制备治疗炎症性疾病治疗的药物或试剂盒中的应用。本发明专利技术还公开了DRD5蛋白作为治疗TRAF6相关炎症性疾病药物的靶点的应用。本发明专利技术通过蛋白激动剂在抑制TRAF6介导的NFκB的炎症信号通路的激活中的用途，确定抗炎靶点的确定，可以为多种TRAF6相关的炎症性疾病提供治疗思路和理论依据，更可以为筛选和制备治疗炎症性疾病的药物提供分子靶点和制备思路。

Application of DRD5 and its agonists in the preparation of drugs for the treatment of inflammatory diseases

【技术实现步骤摘要】
DRD5及其激动剂在制备治疗炎症性疾病的药物中的应用
本专利技术涉及DRD5及其激动剂在制备治疗炎症性疾病的药物中的应用。
技术介绍
炎症是机体免疫系统抵抗病原感染的关键生物学效应，促进损伤组织修复，清除损伤及肿瘤细胞(Medzhitovetal,2008,Nature)。近年来的研究表明在正常情况下炎症反应发挥有益的作用，然而，当机体处于病理状态时，异常的炎症反应则会加重机体的病理状况，甚至会产生诸如败血症、动脉粥样硬化以及炎症性肠病等疾病。因此，探究炎症反应在不同病理状态下的调控机制则尤为重要。TNF受体相关因子6(TRAF6)在生物过程是必不可少的，包括髓系分化初级应答基因88(MyD88)信号网络、先天性免疫系统RANK配体(RANKL)依赖性信号传导、破骨细胞形成、淋巴结器官发生，以及毛囊，汗腺和皮脂腺的发育。TRAF6的异常活化会促进多种人类重大疾病的发生发展，包括成骨样细胞炎、肝炎、心肌炎、胰腺炎、肠炎、动脉粥样硬化或相关肿瘤等。尽管关于TRAF6的机制研究已经进行了很多但是，迄今为止，还没有有效的针对TRAF6的抗炎药物问世。近年来，多项研究表明神经和免疫系统之间存在重要联系，迷走神经可以通过抑制全身性炎症，抑制致命性败血症的产生。已有研究报道在巨噬细胞，树突细胞以及T细胞等免疫细胞的表面也可以表达产生乙酰胆碱、去甲肾上腺素、多巴胺等神经递质的受体。另外，研究证实胆碱能和儿茶酚胺类信号通路在调控炎症性疾病过程中发挥重要作用。因此，神经递质作为治疗炎症的药物开发具有很大的前景。多巴胺(DA)是儿茶酚胺能神经递质的重要成员，主要通过其受体发挥作用，多巴胺受体共有五个亚型，分别是Drd1，Drd2，Drd3，Drd4和Drd5，其中，Drd1和Drd5被称为D1样多巴胺受体，而Drd2,，Drd3和Drd4被称为D2样多巴胺受体。近年来，多项研究表明DA可以作为一个重要的调节子，通过作用于其受体参与免疫系统中免疫细胞的活化和趋化。
技术实现思路
专利技术目的：本专利技术提供了DRD5在调控炎症反应中的用途，本专利技术还提供DRD5蛋白作为制备治疗TRAF6相关的炎症性疾病治疗的药物应用。技术方案：本专利技术的第一个方面提供了DRD5蛋白(核苷酸序列参见SEQIDNO.1)在筛选或制备治疗炎症性疾病治疗的药物或试剂盒中的应用。在一个优选的实施方案中，所述炎症性疾病为TRAF6相关的炎症性疾病。本专利技术第二方面提供了DRD5蛋白在筛选或制备治疗TRAF6相关炎症性疾病药物或试剂盒中的用途。本专利技术第三方面提供了了DRD5蛋白用作治疗TRAF6相关炎症性疾病的药物的靶点的用途。在一个优选的实施方案中，所述炎症性疾病为成骨样细胞炎、风湿性关节炎、心肌炎、胰腺炎、肠炎、脑膜炎、脓毒血症或神经退行性疾病。在一个优选的实施方案中，所述炎症包括中枢系统炎症和外周系统炎症，优选为中枢脑膜炎和外周脓毒血症。本专利技术的第四方面提供DRD5蛋白的激动剂用于制备治疗炎症性疾病的药物或试剂盒的用途。在一个优选的实施方案中，所述激动剂通过DRD5蛋白发挥治疗作用。在一个优选的实施方案中，所述炎症性疾病为TRAF6相关的炎症性疾病。在一个优选的实施方案中，所述炎症性疾病为成骨样细胞炎、风湿性关节炎、心肌炎、胰腺炎、肠炎、脑膜炎、脓毒血症或神经退行性疾病在一个优选的实施方案中，所述炎症包括中枢系统炎症和外周系统炎症，优选为中枢脑膜炎和外周脓毒血症。在一个优选的实施方案中，所述DRD5蛋白的激动剂选自多巴胺和A-68930。本专利技术第六方面提供了DRD5蛋白的激动剂在制备NFκB信号通路抑制剂中的用途。在一个优选的实施方案中，所述NFκB信号通路是由TRAF6介导的。在一个优选的实施方案中，所述DRD5蛋白的激动剂抑制NFκB信号通路的激活，是通过其膜上受体DRD5招募TRAF6负调节子ARRB2，进而抑制TRAF6的活化，最终抑制NFκB信号通路的激活，从而实现治疗炎症性疾病，尤其是TRAF6相关的炎症性疾病。有益效果：(1)本专利技术通过蛋白激动剂在抑制TRAF6介导的NFκB的炎症信号通路的激活中的用途，确定抗炎靶点的确定，可以为多种TRAF6相关的炎症性疾病提供治疗思路和理论依据，更可以为筛选和制备治疗炎症性疾病的药物提供分子靶点和制备思路；(2)本专利技术发现了DA可以通过作用于DRD5抑制TLR2诱导的NFκB的激活来发挥抑炎作用。附图说明图1显示多巴胺可以抑制Pam3csk4引起的IL6的基因表达(A)和蛋白表达(B),并且呈现浓度依赖性；图2显示多巴胺抑制p-IKK和p-IκBα的激活；图3显示多巴胺不依赖多巴胺受体1(Drd1)和多巴胺受体2(Drd2)抑制Pam3csk4引起的IL6的基因表达；图4显示多巴胺受体5(Drd5)缺失后，多巴胺的抑炎效果消失；图5显示多巴胺发挥抑炎作用依赖β-arrestin2；图6显示多巴胺发挥抑炎作用依赖PP2A；图7显示多巴胺依赖DRD5、β-arrestin2和PP2A提高脓毒血症小鼠存活率；图8显示多巴胺依赖DRD5、β-arrestin2和PP2A降低脓毒血症小鼠血清中IL6和TNFα的表达；图9显示多巴胺受体5的激动剂依赖DRD5、β-arrestin2和PP2A抑制脑膜炎小鼠小胶质细胞的激活和外周巨噬细胞的浸润；图10脑组织免疫荧光结果显示多巴胺受体5的激动剂依赖DRD5、β-arrestin2和PP2A降低脑膜炎小鼠小胶质细胞和巨噬细胞IBA1的表达。具体实施方式以下的实例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。一、实验试剂及材料BMDM(骨髓来源的巨噬细胞)：制备方法见文献(Shenetal.,2019，Thejournalofexperimentalmedicine)；DA(多巴胺)：Sigma，H8502；Pam3csk4：Invivogen，Tlrl-pms；SKF-38393hydrobromide：TOCRIS，092；抗phosphorylatedIKKα/β抗体：CellSignaling，2697；抗phosphorylatedIκBα抗体：CellSignaling，9246；抗phosphorylatedJNK抗体：CellSignaling，9251抗phosphorylatedp38抗体：CellSignaling，9211抗phosphorylatedIKKα/β抗体：CellSignaling；抗JNK抗体：CellSignaling，9252；抗IKKβ抗体：CellSignaling，2370；本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.DRD5蛋白在筛选或制备治疗炎症性疾病治疗的药物或试剂盒中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.DRD5蛋白在筛选或制备治疗炎症性疾病治疗的药物或试剂盒中的应用。


2.DRD5蛋白在筛选或制备治疗TRAF6相关炎症性疾病药物或试剂盒中的用途。


3.DRD5蛋白用作治疗TRAF6相关炎症性疾病的药物的靶点的用途。


4.如权利要求1-3任一所述的用途，所述炎症性疾病为成骨样细胞炎、风湿性关节炎、心肌炎、胰腺炎、肠炎、脑膜炎、脓毒血症或神经退行性疾病。


5.如权利要求1-3任一所述的用途，所述炎症性疾病包...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨硕，王冰薇，刘雪，吴昱青，胡颖超，
申请(专利权)人：南京医科大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32