【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于使NK细胞活化的组合物和方法相关申请的交叉引用本申请要求2017年2月15日提交的美国临时专利申请序列号62/459,397的优先权权益，所述美国临时专利申请以引用的方式整体并入本文。专利技术背景天然杀伤(NK)细胞使具有较低表达的I类MHC、CD54和B7H1以及较高表达的CD44的癌干细胞/未分化肿瘤溶解和分化。外周血液淋巴细胞的中等和高度细胞毒性活性与癌症风险降低相关联，并且NK细胞对肿瘤的高度浸润与较好预后相关联，而低活性与癌症风险增加相关联。对NK细胞的抑制由肿瘤微环境中NK受体的下调介导。先前显示在肿瘤患者中，NK细胞的功能显著降低。已开发若干体外NK扩增技术以允许达成较高治疗性细胞剂量。用饲养细胞诸如表达白介素(IL)-15和41BB配体的K562细胞、EBV-TM-LCL、韦尔姆斯氏肿瘤(Wilm’stumor)或经照射PBMC刺激外周血液单核细胞(PBMC)或纯化NK细胞群体已产生较大数目的具有足够功能的NK细胞。所产生的NK细胞表达较高水平的NKG2D、天然细胞毒性受体、DNAM-1和ICAM-1。因此，已建立用以获得经离体扩增、经活化和CD3+T细胞经消减NK细胞的各种方法来供临床使用。此外，已确定用HLA单倍同一性NK细胞在患有晚期癌症的患者中进行继承性细胞转移具有安全性和功效。另外，临床试验已显示同种异体NK细胞在实体肿瘤的情况下起治疗作用，并且就向患者中转移来说是安全的。用NK细胞进行的免疫疗法已由于不能获得足够数目的高度功能性NK细胞而受限。此外，不同于来自健康个体的NK细胞，...
【技术保护点】
1.一种在体外或离体使NK细胞活化的方法，其包括在培养基中连同破骨细胞(OC)一起培养所述NK细胞。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170215 US 62/459,3971.一种在体外或离体使NK细胞活化的方法，其包括在培养基中连同破骨细胞(OC)一起培养所述NK细胞。
2.一种方法，其包括：
i)提供包含NK细胞和破骨细胞的细胞培养物；和
ii)培养所述细胞培养物中的所述NK细胞和所述破骨细胞，
由此使所述NK细胞活化。
3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述NK细胞是原代NK细胞，任选地，其中所述原代NK细胞尚未被转化。
4.如任何先前权利要求所述的方法，其中经活化NK细胞扩增以在4周内达到至少约10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25次或更多次群体倍增。
5.如任何先前权利要求所述的方法，其中所述培养物包含多个破骨细胞(OC)和多个NK细胞，并且所述细胞培养物中OC:NK细胞的比率是至少1:2。
6.如任何先前权利要求所述的方法，其中所述破骨细胞使NK细胞细胞毒性增强，任选地，其中所述NK细胞细胞毒性通过由所述NK细胞对口腔鳞状癌干细胞样细胞(OSCSC)的溶解来度量。
7.如权利要求6所述的方法，其中所述NK细胞细胞毒性通过51Cr释放细胞毒性测定来测量。
8.如任何先前权利要求所述的方法，其中所述破骨细胞使由所述NK细胞对IFN-γ的分泌增强，任选地，其中所述破骨细胞使由所述NK细胞对IL-12的分泌增强。
9.如任何先前权利要求所述的方法，其中所述破骨细胞使由所述NK细胞对NKG2D、NKp46、NKp44、NKp30、CD94、KIR2和KIR3中的一者或多者的表达增强。
10.如任何先前权利要求所述的方法，其中所述NK细胞从癌症样品纯化。
11.如权利要求10所述的方法，其中所述癌症样品来自患有癌症的受试者。
12.如权利要求11所述的方法，其中所述受试者是人。
13.如权利要求10-12中任一项所述的方法，其中所述细胞培养物进一步包含也来源于所述癌症样品的T细胞。
14.如权利要求13所述的方法，借此相对于所述T细胞，所述NK细胞得以优先扩增。
15.如权利要求14所述的方法，其进一步包括持续至少一个月来优先扩增所述NK细胞。
16.如权利要求15所述的方法，其进一步包括用至少一个破骨细胞对培养基进行补充以继续优先扩增所述NK细胞。
17.如权利要求14所述的方法，其中所述T细胞分泌IFN-γ，但不介导细胞毒性，任选地，其中所述细胞毒性通过优选在51Cr释放细胞毒性测定中由所述T细胞对OSCSC的溶解来度量。
18.如权利要求13-17中任一项所述的方法，其中经扩增NK细胞能够使CD8+T细胞扩增。
19.如权利要求18所述的方法，其中相对于CD4+T细胞，由所述OC扩增的所述NK细胞能够优先扩增CD8+T细胞。
20.如任何先前权利要求所述的方法，其进一步包括将抗CD3抗体添加至所述细胞培养物中。
21.如权利要求20所述的方法，其中所述抗CD3抗体使由所述NK细胞对IFN-γ的分泌进一步增强。
22.如任何先前权利要求所述的方法，其中经活化NK细胞是分割无反应化的。
23.如任何先前权利要求所述的方法，其进一步包括向所述细胞培养物中添加包含至少一种选自以下的细菌菌株的组合物：嗜热链球菌、长双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、嗜酸乳酸杆菌、植物乳酸杆菌、副干酪乳酸杆菌、KE99和保加利亚乳酸杆菌，任选地，其中所述至少一种细菌菌株是活的或经声波处理的。
24.如权利要求23所述的方法，其中所述组合物包含嗜热链球菌、长双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、嗜酸乳酸杆菌、植物乳酸杆菌、副干酪乳酸杆菌、KE99和保加利亚乳酸杆菌。
25.如权利要求23所述的方法，其中所述组合物包含sAJ2细菌。
26.如权利要求25所述的方法，其中所述细胞培养物中所述sAJ2细菌浓度与所述NK细胞和/或所述OC浓度的比率
i)对于NK细胞:sAJ2是至少1:2；
ii)对于OC:sAJ2是至少1:4；和/或
iii)对于OC:NK细胞:sAJ2是至少1:2:4。
27.如任何先前权利要求所述的方法，其进一步包括向所述细胞培养物中添加能够使NK细胞活化的另一药剂。
28.如任何先前权利要求所述的方法，其中所述破骨细胞使由所述NK细胞产生的至少一种细胞因子或趋化因子的产生、分泌和/或功能增强。
29.一种方法，其包括：
i)提供包含破骨细胞(OC)、NK细胞和T细胞的细胞培养物；和
ii)培养所述细胞培养物中的所述NK细胞、所述T细胞和所述破骨细胞，
由此相对于所述T细胞，优先活化所述NK细胞。
30.一种方法，其包括：
i)提供包含树突细胞(DC)、NK细胞和T细胞的细胞培养物；和
ii)培养所述细胞培养物中的所述NK细胞、所述T细胞和所述树突细胞，
由此相对于所述NK细胞，优先活化所述T细胞。
31.如权利要求29或30所述的方法，其中所述NK细胞是原代NK细胞，任选地，其中所述原代NK细胞尚未被转化。
32.如权利要求29或31所述的方法，其中所述培养物包含多个破骨细胞(OC)和多个NK细胞，并且所述细胞培养物中OC:NK细胞的浓度比率是至少1:2。
33.如权利要求29、31或32中任一项所述的方法，其中所述破骨细胞使NK细胞扩增增强，任选地，其中所述破骨细胞使由所述NK细胞对IL-15的分泌增强。
34.如权利要求33所述的方法，其中经活化NK细胞扩增以在4周内达到至少约10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25次或更多次群体倍增。
35.如权利要求29和31-34中任一项所述的方法，其中所述破骨细胞使NK细胞细胞毒性增强，任选地，其中所述NK细胞细胞毒性通过由所述NK细胞对口腔鳞状癌干细胞样细胞(OSCSC)的溶解来度量。
36.如权利要求35所述的方法，其中所述细胞细胞毒性通过51Cr释放细胞毒性测定来测量。
37.如权利要求29和31-36中任一项所述的方法，其中所述破骨细胞使由所述NK细胞对IFN-γ的分泌增强，任选地，其中所述破骨细胞使由所述NK细胞对IL-12的分泌增强。
38.如权利要求29和31-37中任一项所述的方法，其中所述破骨细胞使由所述NK细胞对NKG2D、NKp46、NKp44、NKp30、CD94、KIR2和KIR3中的一者或多者的表达增强。
39.如权利要求29-38中任一项所述的方法，其中所述NK细胞和/或所述T细胞从癌症样品纯化。
40.如权利要求39所述的方法，其中所述癌症样品来自患有癌症的受试者。
41.如权利要求40所述的方法，其中所述受试者是人。
42.如权利要求29和31-41中任一项所述的方法，其中对所述NK细胞的所述优先活化持续至少一个月。
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【专利技术属性】
技术研发人员：A·朱厄特，
申请(专利权)人：加利福尼亚大学董事会，
类型：发明
国别省市：美国;US
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