高车前苷及其衍生物在作为Nrf-2激活剂中的用途制造技术

本发明专利技术涉高车前苷及其衍生物的医药用途技术领域，具体公开了高车前苷及其衍生物在作为Nrf‑2激活剂中的用途。本发明专利技术研究发现高车前苷及其衍生物能够有效的抑制氧化性低密度脂蛋白引起内皮细胞的凋亡，通过激活Nrf2，起到抗氧化保护内皮细胞的作用。本发明专利技术为研究高车前苷及其衍生物作为Nrf2的激活剂，保护内皮细胞损伤提供了理论和实验依据。

The use of plantain and its derivatives as nrf-2 activators

【技术实现步骤摘要】
高车前苷及其衍生物在作为Nrf-2激活剂中的用途
本专利技术涉高车前苷及其衍生物的医药用途
，具体涉及高车前苷及其衍生物作为Nrf-2激活剂在制备治疗与Nrf2信号通路相关疾病的药物中的应用。
技术介绍
转录因子Nrf2属于CNC-Bzip(capncollarsubfamilyofbasicleucine-zipper)，即CNC亮氨酸拉链转录激活因子家族，是调控细胞氧化应激反应的重要转录因子，同时也是维持细胞内氧化还原稳态的中枢调节者。Nrf2通过诱导调控一系列抗氧化蛋白的组成型和诱导型表达，可以减轻活性氧和亲电体引起的细胞损伤，使细胞处于稳定状态，维持机体氧化还原动态平衡，因此成为细胞抗氧化应激的重要通路。大量研究表明Nrf2与炎症、慢性肾病、糖尿病、心血管疾病、神经退行性疾病和肿瘤等多种疾病的发生有关。Nrf2信号通路的适当的激活可以增强细胞的抗氧化应激能力，维持细胞内的氧化还原平衡，减少自由基和化学致癌原对细胞的损伤，从而维持细胞正常的生理功能。因此寻找安全有效的Nrf2激活剂，已成为药物研发的新方向。高车前苷(homoplantaginin)属黄酮类化合物，主要存在于荔枝草中，其结构式如下：药理研究表明：高车前苷具有治疗肝损伤，改善内皮胰岛素耐受性和抑制肿瘤生长、抗骨质疏松，诱使癌细胞凋亡。另有实验表明，高车前苷具有降血糖，调血脂作用，能明显改善NO的生成，并能改善游离脂肪酸所致的血管内皮胰岛素抵抗。但目前还未见有关于高车前苷及其衍生物在调节Nrf2活性方面的报道。<br>
技术实现思路
本专利技术首次发现，高车前苷及其衍生物可以作为Nrf2激活剂，具有潜在的抗氧化应激活性，可用于制备与Nrf2信号通路相关疾病的健康食品或药品中。基于此，本专利技术提出了下述技术方案：本专利技术的第一方面，提供高车前苷和/或高车前苷衍生物在制备Nrf2激活剂中的应用。上述应用中，所述高车前苷衍生物为二氢高车前苷，其结构式如下：上述应用中，所述高车前苷以及高车前苷衍生物可以通过商业途径购买获得；也可从荔枝草(SalviaplebeiaR·Brown)中提取获得。其中：所述高车前苷以及高车前苷衍生物可以由如下方法制备而成：将荔枝草原料粉碎，加入体积分数为95％的乙醇进行回流提取，提取液浓缩，得浓缩液；将浓缩液采用乙酸乙酯/正丁醇-水作为两相溶剂系统进行萃取，取上层的乙酸乙酯/正丁醇相进行浓缩，得浸膏；将浸膏采用大孔树脂进行梯度洗脱，薄层监测，收集高车前苷流分，浓缩，调节浓缩后的溶液至酸性，滤出沉淀物，洗涤，干燥，得到淡黄色粉末；再利用高效液相色谱仪进行分离，得到高车前苷和高车前苷衍生物。优选的，所述体积分数为95％的乙醇的加入量为荔枝草原料重量的8-12倍。优选的，依次用体积分数为30％、50％、85％和95％的乙醇水溶液进行梯度洗脱。本专利技术的第二方面，提供高车前苷和/或高车前苷衍生物作为Nrf-2激活剂在制备抗氧化应激药物中的应用。本专利技术的第三方面，提供高车前苷和/或高车前苷衍生物作为Nrf-2激活剂在制备抑制细胞内皮细胞凋亡的药物中的应用。上述应用中，所述细胞凋亡是由氧化性低密度脂蛋白诱导的。本专利技术的第四方面，提供一种Nrf2激活剂，所述Nrf2激活剂以高车前苷和/或高车前苷衍生物为有效成分。本专利技术的有益效果：内皮细胞的凋亡、脂代谢的紊乱、炎症的发生是导致疾病发生发展的主要原因。高车前苷及其衍生物能够有效的抑制氧化性低密度脂蛋白引起内皮细胞的凋亡，通过激活Nrf2，起到抗氧化保护内皮细胞的作用，高车前苷能够有效抑制ApoE-/-小鼠中动脉硬化的发生发展、稳定斑块通过激活Nrf2，降低斑块中ROS表达，提高HO-1的表达。高车前苷以及衍生物可能通过降低作用，因此本专利技术为研究高车前苷及其衍生物作为Nrf2的激活剂，保护内皮细胞损伤提供了理论和实验依据，本专利技术涉及的高车前苷及其衍生物可以作为一种有效Nrf2激活剂的工具，用于专利技术研发有关疾病奠定了基础。附图说明：图1：高车前苷及其衍生物能够激活Nrf2。图2：高车前及其衍生物能够促进Nrf2入核。图3：高车前苷及其衍生物能够促进Nrf2下游蛋白HO-1表达。图4：高车前苷及其衍生物能够抑制内皮细胞中ROS的表达。图5：敲低Nrf2高车前苷不能保护内皮细胞炎症反应。图6：小鼠体重注射图。图7：小鼠主动脉切片中HO-1表达量。图8：小鼠主动脉切片中ROS表达量。具体实施方式应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。正如
技术介绍
部分介绍的，转录因子Nrf2属于CNC-Bzip(capncollarsubfamilyofbasicleucine-zipper)，即CNC亮氨酸拉链转录激活因子家族，是调控细胞氧化应激反应的重要转录因子，同时也是维持细胞内氧化还原稳态的中枢调节者。Nrf2通过诱导调控一系列抗氧化蛋白的组成型和诱导型表达，可以减轻活性氧和亲电体引起的细胞损伤，使细胞处于稳定状态，维持机体氧化还原动态平衡，因此成为细胞抗氧化应激的重要通路。Nrf2信号通路的适当的激活可以增强细胞的抗氧化应激能力，维持细胞内的氧化还原平衡，减少自由基和化学致癌原对细胞的损伤，从而维持细胞正常的生理功能。目前已有许多关于Nrf2激活剂的报道，例如儿茶素酸酯、菜菔硫烷、姜黄素、白藜芦醇、奥替普拉、叔丁基对苯二酚等。不同种类的Nrf2激活剂可能以不同的机制激活Nrf2，因而其作用也有所不同。高车前苷具有降血糖，调血脂作用，能明显改善NO的生成，并能改善游离脂肪酸所致的血管内皮胰岛素抵抗。但目前还未见有关于高车前苷及其衍生物在调节Nrf2活性方面的报道。为研究高车前苷(S3)及高车前苷衍生物(S1)与Nrf2的作用关系，本专利技术首先通过Luci-hela转染细胞系看高车前苷及其衍生物能否激活Nrf2，通过酶标仪在540nm处测得高车前苷(S3)及其衍生物(S1)能够激活Nrf2，由此确定高车前苷及其衍生物可以作为Nrf2的激活剂。本专利技术所采用的Luci-hela转染细胞系，它能稳定表达萤火虫荧光素酶，使用萤火虫荧光素酶报告基因试剂盒处理，是一种将Nrf2的转录调控元件或5启动子区克隆在lucifersae的上游，或把3-UTR区克隆在luciferase的下游，构成报告质粒，然后转染细胞，用S1、S3处理细胞后裂解细胞，测定荧光素酶活性，通过荧光素酶活性的高低来判断药物处理对Nrf2的转录调控能否激活Nrf2，通过酶标仪在540nm处测得高车前苷(S3)及其衍生物(S1)能够激活Nrf2。(见图1)。在正常生理状态下，Nrf2通过N端与Kelch样ECH联合蛋白1(Kelch-likeECH-associatedprotein1,本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.高车前苷和/或高车前苷衍生物在制备Nrf2激活剂中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.高车前苷和/或高车前苷衍生物在制备Nrf2激活剂中的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述高车前苷衍生物为二氢高车前苷。


3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述高车前苷、高车前苷衍生物由如下方法制备而成：
将荔枝草原料粉碎，加入体积分数为95％的乙醇进行回流提取，提取液浓缩，得浓缩液；将浓缩液采用乙酸乙酯/正丁醇-水作为两相溶剂系统进行萃取，取上层的乙酸乙酯/正丁醇相进行浓缩，得浸膏；将浸膏采用大孔树脂进行梯度洗脱，薄层监测，收集高车前苷流分，浓缩，调节浓缩后的溶液至酸性，滤出沉淀物，洗涤，干燥，得到淡黄色粉末；再利用高效液相色谱仪进行分离，得到高车前苷和高车前苷衍生物。


4.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：孟宁，王艳红，杨凤英，张华，欧阳晨曦，
申请(专利权)人：济南大学，
类型：发明
国别省市：山东;37