产高活性纤溶酶的植物乳杆菌及用其发酵的果蔬汁饮料制造技术

本发明专利技术提供了一株产高活性纤溶酶的植物乳杆菌，所述产高活性纤溶酶的植物乳杆菌的分类命名为植物乳杆菌Lactobacillus plantarum，保藏于中国科学院微生物研究所的中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏号为CGMCC No.17372，保藏时间为2019年3月20日。本发明专利技术还提供了利用上述植物乳杆菌发酵制备得到的果蔬汁饮料。本发明专利技术所得的产高活性纤溶酶的植物乳杆菌发酵上清液纤溶酶的酶活性为497.72U/mL；菌株发酵上清液具有较强抑菌能力；并且菌株本身对多种抗生素均无多重耐药，对于胃肠液具有较高耐受性，还具有潜在的肠道附着能力。本发明专利技术饮料达到国家相关活菌数标准，具有良好商业化价值。

Lactobacillus plantarum producing high activity fibrinolytic enzyme and its fermented fruit and vegetable juice beverage

【技术实现步骤摘要】
产高活性纤溶酶的植物乳杆菌及用其发酵的果蔬汁饮料
本专利技术涉及生物技术和食品
，具体涉及产高活性纤溶酶的植物乳杆菌及用其发酵的果蔬汁饮料
技术介绍
植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)是乳酸杆菌中的一种，常存在于发酵的蔬菜和果汁中。植物乳杆菌作为人体胃肠道的益生菌，具有维持肠道内菌群平衡、提高机体免疫力和促进营养物质吸收等多种功能。在食品发酵过程中，植物乳杆菌可将食品原料中的糖转变为乳酸，同时产生抗菌肽、胞外多糖和其他代谢产物。植物乳杆菌在食品中的应用主要是在乳制品、肉制品、果蔬制品、豆制品、谷物和薯类制品等方面，具有广阔市场。根据《可用于食品的菌种名单》(卫办监督发〔2010〕65号)相关规定，植物乳杆菌可以直接用于食品生产。但目前鲜有植物乳杆菌产纤溶酶及相关研究报道。血栓性疾病以前多发于老年人群，但是因当代人不健康的生活习惯和饮食方式是血栓性疾病对人们健康的威胁不再仅限于老年人群。根据《中国居民营养与慢性疾病状况报告(2015年)》数据显示，2012年全国十八岁以上成年人中因属于血栓性疾病的心脑血管疾病导致的死亡率为271.8/10万，是主要的死亡原因。利用溶栓剂溶栓是血栓类疾病主要的治疗方法之一，同时利用溶栓剂实现对血栓类慢性疾病的预防也备受关注。目前治疗主要用的溶栓剂存在副作用大或者价格昂贵等缺点，不适用于血栓性疾病的预防。微生物种类繁多、代谢产物丰富多样，且微生物易培养，繁殖快，因此成为发掘新型溶栓剂的重要资源。微生物源纤溶酶如链激酶、葡激酶、纳豆激酶等都表现出良好的溶栓特性，特别是枯草芽孢杆菌分泌产生的纳豆激酶已经制备保健食品实现商业化。筛选能直接用于食品发酵生产的，同时能产高活性纤溶酶的乳酸菌用于研发具有纤溶酶活性的食品可以作为预防血栓性疾病，降低此类疾病发病率的有效措施。
技术实现思路
针对现有技术的缺点和需求，本专利技术的目的之一在于获得一种可产高活性纤溶酶、具有良好抑菌性且对多种抗生素无多重耐药的植物乳杆菌。为了实现上述目的，本专利技术提供了一株产高活性纤溶酶的植物乳杆菌，所述产高活性纤溶酶的植物乳杆菌的分类命名为植物乳杆菌Lactobacillusplantarum，保藏于中国科学院微生物研究所的中国普通微生物菌种保藏管理中心(北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所邮编100101)，保藏号为CGMCCNo.17372，保藏时间为2019年3月20日。如无特别说明，在本专利技术的说明书中，本专利技术所述的产高活性纤溶酶的植物乳杆菌简称为植物乳杆菌HQ-3。本专利技术的另一个目的在于提供一种果蔬汁饮料，所述果蔬汁饮料是以果蔬作为原料，并利用上述产高活性纤溶酶的植物乳杆菌发酵而得。作为本专利技术的一个可选实施方式，所述果蔬为猕猴桃。本专利技术还提供了制备上述果蔬汁饮料的方法，所述方法的步骤包括：将猕猴桃进行榨汁后，加水进行调配，然后利用所述产高活性纤溶酶的植物乳杆菌进行发酵，即得。作为本专利技术的一个可选的实施方案，所述方法包括如下步骤：(1)猕猴桃的选择和处理：挑选8～9分成熟度的红阳猕猴桃，除去病虫和腐烂果实，备用；将挑选出的红阳猕猴桃用螺旋榨汁机进行榨汁并果皮分离，留果浆；(2)调配：红阳猕猴桃果浆与水按体积比1:1混合均匀后，添加80mg/100g羧甲基纤维素钠、12g/100g白砂糖，并用柠檬酸钠调节pH＝5.5；(3)杀菌：调配好的红阳猕猴桃果浆在83℃加热10min以杀灭有害微生物和致病菌；(4)发酵：灭菌处理后的红阳猕猴桃浆冷却至室温，加入1％经活化后的所述产高活性纤溶酶的植物乳杆菌发酵，37℃静止发酵28h，即得。本专利技术的有益效果：本专利技术所得的产高活性纤溶酶的植物乳杆菌的纤溶酶发酵上清液酶活性为497.72U/mL；发酵上清液具有较强的抑菌能力；同时，本专利技术所得的产高活性纤溶酶的植物乳杆菌对多种抗生素均无多重耐药性；对于胃肠液具有较高耐受性，还具有潜在的肠道附着能力。本专利技术所得的饮料达到国家关于乳酸菌发酵活菌饮料活菌数标准，同时饮料中含有高活性纤溶酶，具有良好的商业化价值。附图说明图1为产纤溶酶乳酸菌的筛选的初筛结果图；图2为产纤溶酶乳酸菌的筛选的复筛结果图；图3为本专利技术植物乳杆菌HQ-3的纤溶酶活性测定时的尿激酶标准曲线；图4和图5为本专利技术植物乳杆菌HQ-3的形态学鉴定结果图；图6为本专利技术植物乳杆菌HQ-31的16SrDNA扩增电泳图；图7为本专利技术植物乳杆菌HQ-3的系统发育树；图8为本专利技术植物乳杆菌HQ-3的生长曲线图；图9为本专利技术植物乳杆菌HQ-3的特异性黏附素基因PCR电泳图；图10和图11为本专利技术植物乳杆菌HQ-3发酵上清液水解纤维蛋白方式确定的实验结果图。具体实施方式下面通过实施例对本专利技术进行具体描述，有必要在此指出的是以下实施例只是用于对本专利技术进行进一步的说明，不能理解为对本专利技术保护范围的限制，该领域的技术熟练人员根据上述
技术实现思路
所做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本专利技术的保护范围。实施例11试验方法：1.1材料与试剂1.1.1实验样品从四川各地采集的豆豉，东北发酵大豆酱、发酵虾酱等传统发酵食品59份和雅安农贸市场采购的新鲜蔬菜叶等食品原料8份。1.1.2培养基MRS培养基、E-liker培养基、蔗糖硫胺培养基、LB培养基、蛋白胨水培养基、硝酸盐培养基、MH培养基、血平板、CM培养基、脱脂乳琼脂平板。1.1.3主要试剂牛纤维蛋白原、凝血酶(生化试剂，40U/mg)、尿激酶标准品(生化试剂，50U/mg)购自上海源叶生物科技有限公司；胃蛋白酶(生化试剂，30000U/mg)、胰蛋白酶(生化试剂，250U/mg)购自上海瑞永生物科技有限公司；SDS-PAGE试剂盒，购自武汉博士德生物工程有限公司。1.1.4菌株大肠杆菌(Escherichiacoli)ATCC25922，金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)ATCC25923，沙门氏菌(salmonella)由四川农业大学食品微生物实验室提供。1.2方法1.2.1样品处理分别用MRS液体培养基、E-liker培养基、蔗糖硫胺培养基对样品进行富集培养，获得不同的富集培养液。1.2.2产纤溶酶乳酸菌的分离(1)初筛：将筛选获得乳酸菌接种于含脱脂乳平板上，37℃培养48h。在脱脂乳平板上挑取溶解圈明显的单菌落，纯化。(2)复筛：将筛获得菌株接种于CM液体培养基中，37℃培养24h。收集菌液1mL于4℃，10000r/min离心10min，取上清液20μL于纤维蛋白平板小孔中点样。37℃孵育18h，挑选能产生溶解圈的菌株。1.2.3纤溶活性的测定(1)标准曲线绘制：分别取31.25，62.5，125，250，500U/mL尿激本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株产高活性纤溶酶的植物乳杆菌，其特征在于，所述产高活性纤溶酶的植物乳杆菌的分类命名为植物乳杆菌Lactobacillus plantarum，保藏于中国科学院微生物研究所的中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏号为CGMCC No.17372，保藏时间为2019年3月20日。/n

【技术特征摘要】
1.一株产高活性纤溶酶的植物乳杆菌，其特征在于，所述产高活性纤溶酶的植物乳杆菌的分类命名为植物乳杆菌Lactobacillusplantarum，保藏于中国科学院微生物研究所的中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏号为CGMCCNo.17372，保藏时间为2019年3月20日。


2.一种果蔬汁饮料，其特征在于，所述果蔬汁饮料是以果蔬作为原料，并利用权利要求1所述的产高活性纤溶酶的植物乳杆菌发酵而得。


3.根据权利要求2所述的果蔬汁饮料，其特征在于，所述果蔬为猕猴桃。


4.制备如权利要求3所述的果蔬汁饮料的方法，其特征在于，所述方法的步骤包括：
将猕猴桃进行榨汁后，加水进行调配，然后利用所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡欣洁，朱琦琦，何维，曹阳，吴任之，余东梅，赵俊梅，刘书亮，秦文，韩国全，张志清，王彩霞，赵勤，林德容，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：四川;51