单步ATPS增强型LFA诊断设计制造技术

技术编号:23319559 阅读:95 留言:0更新日期:2020-02-11 19:24
在各种实施方式中,提供了单步基于纸的ATPS的诊断测定法,其利用ATPS组分的依次再溶解的概念来引起纸内所需的相分离行为。在一个说明性实施方式中,提供了一种芯,其用于在纸中的双水相提取系统中浓缩分析物,其中,所述芯包括被构造成接收样品的纸,其中所述纸包括第一区域和第二区域,所述第一区域包含双水相系统(ATPS)的第一组分,其中所述第一组分为干燥状态,所述第二区域包含双水相系统(ATPS)的第二组分,其中所述第二组分为干燥状态;并且将所述第一区域和第二区域布置成使得当所述吸液芯与流体样品接触时,所述ATPS的第一组分在第二组分之前水化。在某些实施方式中,第一组分和第二组分布置为使得它们基本上同时水化。

One step ATPS enhanced LFA Diagnosis Design

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】单步ATPS增强型LFA诊断设计相关申请的交叉引用
本申请要求2017年5月31日提交的USSN62/513,347的权益和优先权,将其整体上通过援引并入本文以用于所有目的。政府支持的声明本专利技术是在美国国家科学基金会政府支持下完成的,授权号1549003。政府拥有本专利技术的某些权利。
技术介绍
传染病如衣原体和HIV大大地影响了发达国家和发展中国家。衣原体感染是由沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis)细菌引起的性传播感染(STI),如果不进行治疗,可能导致妇女的盆腔炎性疾病和引起生殖系统永久损坏(Hafner(2015)Contraception,92:108-115)。自1993年以来,衣原体的患病率在美国一直稳步上升,在2014年的报告的新的衣原体感染已超过140万例(CentersforDiseaseControlandPrevention(2014)SexuallyTransmittedDiseaseSurveillance2014:1-176)。虽然衣原体相对直接地治疗,没有显示出对主要药物治疗选择产生抗性的迹象(Krupp&Madhivanan(2015)IndianJSexTransmDis36:3-8),但它仍是美国最常见的STI之一(CentersforDiseaseControlandPrevention(2014)SexuallyTransmittedDiseaseSurveillance2014:1-176)。另一方面,HIV是由人类免疫缺陷病毒引起的,该病毒攻击人体的免疫系统,特别是CD4细胞。仅在2015年,全世界大约有210万新的HIV病例,在美国大约有39,513人被诊断出患有HIV(CDC(2015)HIVSurveill.Rep.27:1-82)。解决衣原体感染和艾滋病毒发病率日益增加的一种方法是通过对危险人群进行低成本的现场(POC)筛查,这个理论模型(Huangetal.(2013)SexTransm.Infect.89:108-114.doi:10.1136/sextrans-2011-050355;Miller(1998)Sex.Transm.Infect.25:201-211)和孤立的试验研究(Mahilum-Tapayetal.(2007)BMJ,335:1190-1194;Lowetal.(2006)Lancet,368:2001-2016)已显示出令人鼓舞的结果。不幸的是,当前基于金标准实验室的诊断方法(例如ELISA测试、核酸扩增测试(NAAT)或细胞培养方法)都不适用于POC筛查。这是由于设备成本高,需要训练有素的人员以及需要较长的时间得到结果。相反,基于纸的诊断是更合适的技术,具有效进行大规模筛查所需的两个组件:同一就诊时的现场诊断和治疗,以及未经培训或受过最少培训的人员的管理。最常用的纸诊断方法是侧流测定技术(LFA),这是一种用视觉阐释的基于抗体的诊断方法,因其在妊娠试验中的广泛应用而得到认可(Wong&Tse(2009)LateralFlowImmunoassay,1sted.Springer,NewYork)。不幸的是,衣原体LFA检测目前还不够灵敏,无法有效地诊断(Landetal.(2009)Hum.Reprod.Update,16:189-204),这是大多数传基于纸的传染病诊断所遇到的局限(Gubalaetal.(2012)Anal.Chem.84:487-515)。尽管HIVLFA检测在消费者市场上比衣原体LFA检测更成熟,但仍有提高其灵敏度的余地,以进一步降低假阴性和病毒潜在传播的风险。近年来,为提高基于纸的测定的灵敏度而做出了巨大的努力。一些关键的创新包括Yager实验室使用二维纸网络的工作(Fuetal.(2010)SensorsActuators,BChem.149:325-328;Fuetal.(2010)LabChip,10:918-920.;Osbornetal.(2010)LabChip,10:2659-2565;Fuetal.(2011)MicrofluidNanofluidics,10:29-35;Kauffmanetal.(2010)LabChip,10:2614-2617;Fridleyetal.(2012)LabChip,12:4321;Fuetal.(2012)Anal.Chem.84:4574-4579;Lutzetal.(2013)LabChip,13:2840-2847)和Whitesides实验室的基于纸的微流体分析设备(Mosadeghetal.(2015)Biomaterials,52:262–271;Thuoetal.(2014)Chem.Mater.26:4230-4237;Lanetal.(2014)Anal.Chem.86:9548-9553;Badu-Tawiahetal.(2014)LabChip,15:655-659)。以前,我们的实验室开发了一种无需设备的方法,以用于在把靶标分析物施加到LFA测试之前对其进行热力学预浓缩。简而言之,这是通过利用双水相系统(ATPS)来完成的,其分为两个不同的液相,其中靶标分析物彻底地分配在两相之一,有效地浓缩了靶标。在第一种方法中,我们的三步诊断过程涉及(i)将大量靶标溶液与ATPS组分混合,(ii)等待宏观相分离,以及(iii)提取浓缩的靶标相并将其施加到LFA测试上。使用这种方法,我们证明了对大病毒(Jueetal.(2014)Biotechnol.Bioeng.111:2499-2507;Mashayekhietal.(2010)Anal.Bioanal.Chem.398:2955-2961)和小蛋白靶标(Mashayekhietal.(2012)Anal.Bioanal.Chem.404:2057-2066;Chiuetal.(2014)Ann.Biomed.Eng.42(11):2322–2332)的检出限都有所改善。最近,我们发现当ATPS流动通过纸时,相分离过程得到了加速,通过省略掉等待和提取步骤,将总诊断时间从数小时减少到数分钟。利用这种现象,我们的实验室证明了同时浓缩和检测纸中蛋白质生物标志物的能力(Chiuetal.(2014)LabChip,14:3021-3028;Pereiraetal.(2015)Anal.Chim.Acta.882:83-89)。该诊断过程仍然需要在将溶液施加到LFA测试条之前进行ATPS组分混合步骤,这可能适合于本来就需要混合到预定缓冲液中的应用(例如,基于拭子的诊断)。
技术实现思路
在各种实施方式中,本文描述了单步ATPS纸基诊断测定法,其基于依次再溶解ATPS组分的新概念,以在纸内产生所需的相分离行为。本文设想的各种实施方式可以包括但不必限于以下实施方式中的一个或多个:实施方式1:一种用于在纸的双水相提取系统中浓缩分析物的芯,所述芯包含:配置为接收样品的纸,其中所述纸包括:第一区域,其含有双水相系统(AT本文档来自技高网
...

【技术保护点】
1.一种用于在纸的双水相提取系统中浓缩分析物的芯,所述芯包括:/n配置为接收样品的纸,/n其中所述纸包括:/n第一区域,其含有双水相系统(ATPS)的第一组分,其中所述第一组分为干燥状态;和/n第二区域,其含有双水相系统(ATPS)的第二组分,其中所述第二组分为干燥状态;/n其中所述第一区域和所述第二区域布置成使得当所述芯与流体样品接触时,所述ATPS的所述第一组分在所述第二组分之前水化;或/n其中所述纸包括:含有双水相系统(ATPS)的第一组分和双水相系统的第二组分的区域,其中所述第一组分和所述第二组分为干燥状态,使得当所述芯与流体样品接触时,所述ATPS的所述第一组分和所述ATPS的所述第二组分基本上同时水化。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170531 US 62/513,3471.一种用于在纸的双水相提取系统中浓缩分析物的芯,所述芯包括:
配置为接收样品的纸,
其中所述纸包括:
第一区域,其含有双水相系统(ATPS)的第一组分,其中所述第一组分为干燥状态;和
第二区域,其含有双水相系统(ATPS)的第二组分,其中所述第二组分为干燥状态;
其中所述第一区域和所述第二区域布置成使得当所述芯与流体样品接触时,所述ATPS的所述第一组分在所述第二组分之前水化;或
其中所述纸包括:含有双水相系统(ATPS)的第一组分和双水相系统的第二组分的区域,其中所述第一组分和所述第二组分为干燥状态,使得当所述芯与流体样品接触时,所述ATPS的所述第一组分和所述ATPS的所述第二组分基本上同时水化。


2.根据权利要求1所述的芯,其中,所述纸包括:
第一区域,其含有双水相系统(ATPS)的第一组分,其中所述第一组分为干燥状态;和
第二区域,其含有双水相系统(ATPS)的第二组分,其中所述第二组分为干燥状态;和
其中所述第一区域和所述第二区域布置成使得当所述芯与流体样品接触时,所述ATPS的所述第一组分在所述第二组分之前水化。


3.根据权利要求1-2中任一项所述的芯,其中所述芯配置为使得所述ATPS的第一组分在水化时流入所述ATPS的所述第二组分中,从而使所述第二组分水化以提供混合相,当ATPS移动通过所述芯时,该混合相分离成包含所述第一组分的第一相和包含所述第二组分的第二相。


4.根据权利要求1-3中任一项所述的芯,其中所述第一组分和所述第二组分是聚合物/盐ATPS的组分,其中所述第一组分包含盐并且所述第二组分包含聚合物。


5.根据权利要求4所述的芯,其中所述盐包含一种或多种选自由下述组成的组中的盐:磷酸钾、硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵、柠檬酸钠、氯化镁、柠檬酸镁、磷酸镁、氯化钠、柠檬酸钾和碳酸钾。


6.根据权利要求5所述的芯,其中所述盐包含磷酸钾。


7.根据权利要求4-6中任一项所述的芯,其中所述盐的范围为约0.1%w/w至约40%w/w,或约1%w/w至最多约30%w/w,或约5%w/w至最多约25%w/w,或约10%w/w至最多约20%w/w。


8.根据权利要求7所述的芯,其中所述盐以约15%(w/w)存在。


9.根据权利要求4-8中任一项所述的芯,其中所述聚合物包含选自由下述组成的组中的聚合物:聚乙二醇(PEG)、乙烯/丙烯共聚物(例如UCONTM50-HB)、丙二醇(PPG)、甲氧基聚乙二醇和聚乙烯吡咯烷酮。


10.根据权利要求9所述的芯,其中所述聚合物包含聚乙二醇(PEG)。


11.根据权利要求10所述的芯,其中所述PEG的分子量为约1,000至约100,000,或约4,000至约50,000,或约5,000至最多约40,000,或至多约30,000,或至多约20,000。


12.根据权利要求11所述的芯,其中所述聚合物包含聚乙二醇(PEG)8000MW。


13.根据权利要求4-12中任一项所述的芯,其中所述聚合物包含约1%w/w至约30%w/w,或约5%w/w至最多约25%w/w,或约10%w/w至最多约25%w/w,或约10%w/w至最多约20%w/w的聚合物。


14.根据权利要求13所述的芯,其中所述聚合物包含约10%(w/w)。


15.根据权利要求1-14中任一项所述的芯,其中所述纸包含选自由下述组成的组中的材料:纤维素、玻璃纤维、硝酸纤维素、聚偏二氟乙烯、尼龙、电荷改性尼龙、聚醚砜、聚四氟乙烯(PTFE)及其组合。


16.根据权利要求15所述的芯,其中所述纸包含玻璃纤维。


17.根据权利要求1-16中任一项所述的芯,其中所述芯包含多层所述纸。


18.根据权利要求17所述的芯,其中所述芯包含至少3层,或至少4层,或至少5层,或至少6层,或至少7层,或至少8层,或至少9层,或至少10层,或至少15层或至少20层所述纸。


19.根据权利要求17所述的芯,其中所述芯包含约5层的所述纸。


20.根据权利要求1-19中任一项所述的芯,其中,无ATPS组分的区域设置在所述第一区域和所述第二区域之间。


21.根据权利要求1-19中任一项所述的芯,其中所述第一区域邻近于所述第二区域设置。


22.根据权利要求1-21中任一项所述的芯,其中所述芯包括样品施加区。


23.根据权利要求22所述的芯,其中,所述样品施加区包括样品垫。


24.根据权利要求1-23中任一项所述的芯,其中当侧流测定器(LFA)与所述芯流体连通时,所述芯在所述第二区域下游和LFA上游的区域中逐渐变细。


25.根据权利要求1-24中任一项所述的芯,其中所述芯被配置为联接至侧流测定器(LFA),并提供从所述芯到所述LFA的流体连通。


26.根据权利要求25所述的芯,其中,所述芯被配置为联接至LFA,使得芯的平面垂直于所述LFA的平面。


27.根据权利要求25所述的芯,其中,所述芯被配置为联接至LFA,使得芯的平面平行于所述LFA的平面。


28.根据权利要求25所述的芯,其中所述芯联接至侧流免疫测定。


29.根据权利要求28所述的芯,其中,所述芯联接至LFA,使得所述芯的平面平行于所述LFA的平面。


30.根据权利要求28所述的芯,其中,所述芯连接至LFA,使得所述芯的平面垂直于所述LFA的平面。


31.根据权利要求28-30中任一项所述的芯,其中所述侧流测定器包括:
LFA纸,该LFA纸包括:
缀合区,所述缀合区含有包含指示剂部分的缀合物,所述指示剂部分连接至与待检测的分析物结合的结合部分;或所述缀合区被配置为接收与待检测的分析物复合的纳米缀合物;
吸收区;和
检测区,所述检测区包含捕获分析物/纳米缀合物复合物的部分。


32.根据权利要求31所述的芯,其中所述检测区包括检测线。


33.根据权利要求31-32中任一项所述的芯,其中所述LFA包括对照区,所述对照区包含捕获分析物/纳米缀合物复合物和不存在所述分析物的所述纳米缀合物的部分。


34.根据权利要求31-33中的任一项所述的芯,其中所述对照区包括对照线。


35.根据权利要求31-34中任一项所述的芯,其中所述缀合区包括缀合垫。


36.根据权利要求31-35中任一项所述的芯,其中所述吸收区包括吸收垫。


37.根据权利要求31-36中任一项所述的芯,其中所述LFA纸的材料与包含所述芯的纸是相同的。


38.根据权利要求31-37中任一项所述的芯,其中所述LFA纸的材料与包含所述芯的纸是不同的。


39.根据权利要求31-38中任一项所述的芯,其中所述LFA纸包含选自由下述组成的组的材料:纤维素、玻璃纤维、硝酸纤维素、聚偏二氟乙烯、尼龙、电荷改性尼龙、聚醚砜、聚四氟乙烯(PTFE)、聚酯及其组合。


40.根据权利要求39所述的芯,其中所述LFA纸包含硝酸纤维素。


41.根据权利要求39所述的芯,其中所述LFA纸包含玻璃纤维。


42.根据权利要求22-23或31-41中任一项所述的芯,其中所述芯的样品施加区或所述LFA的缀合区包含纳米缀合物,所述纳米缀合物包含与分析物结合部分连接的指示剂部分,该分析物结合部分与待检测的分析物结合。


43.根据权利要求42所述的芯,其中所述分析物结合部分选自由下述组成的组:抗体、凝集素、蛋白质、糖蛋白、核酸、单体核酸、聚合核酸、适体、适体酶、小分子、聚合物、凝集素、碳水化合物、多糖、糖和脂质。


44.根据权利要求43所述的芯,其中所述分析物结合部分包含与所述分析物结合的抗体。


45.根据权利要求42-44中任一项所述的芯,其中所述指示剂包含选自由下述组成的组中的部分:比色指示剂,荧光指示剂,和能够被包含比色指示剂或荧光指示剂的构建体结合的部分。


46.根据权利要求42-45中任一项所述的芯,其中,所述指示剂包含选自由下述组成的组中的材料:合成聚合物、金属、矿物、玻璃、石英、陶瓷、生物聚合物、塑料及其组合。


47.根据权利要求42-46中任一项所述的芯,其中所述指示剂包括比色指示剂。


48.根据权利要求47所述的芯,其中所述指示剂包含金纳米颗粒。


49.一种用于检测分析物的系统,所述系统包括:
容器,其包含干燥的纳米缀合...

【专利技术属性】
技术研发人员:D·T·卡梅B·M·吴G·L·莫斯利Y·T·赵D·Y·佩雷拉C·M·吴韩玥李昭娟
申请(专利权)人:加利福尼亚大学董事会
类型:发明
国别省市:美国;US

网友询问留言 已有0条评论
  • 还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。

1