不需要人工能量再生系统的新型无真核细胞表达系统技术方案

本公开内容涉及在利用含有质体、线粒体和/或叶绿体的细胞裂解产物的反应中，用于体外合成生物大分子的系统、方法和试剂盒，其中磷酸肌酸和肌酸激酶不加入反应中以提供人工能量再生。

A new eukaryotic free expression system without artificial energy regeneration system

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】不需要人工能量再生系统的新型无真核细胞表达系统优先权声明本专利申请要求于2017年2月9日提交的美国临时专利申请序列号62/457,073的优先权，所述美国临时专利申请的公开内容在此以引用的方式整体并入本文。
本公开内容涉及生物聚合物的体外生产。一些实施例涉及在无真核细胞系统中产生例如多肽、多核苷酸和/或多糖。特定实施例利用细胞器(例如，质体、线粒体或叶绿体)以对于无细胞系统中的生物聚合物的连续生产提供能量，这消除了对于系统中某些不期望有的储能分子例如磷酸肌酸的需要。
技术介绍
对于新治疗性蛋白、技术酶、蛋白质工程和功能基因组学的不断增长的需求，需要快速有效的蛋白质生产和筛选平台。Leader等人(2008)Nat.Rev.DrugDiscov.7(1):21-39；Swartz(2012)AicheJ.58(1):5-13。无细胞蛋白质合成(CFPS)的新兴技术可以帮助满足这种需求。Carlson等人(2012)Biotechnol.Adv.30(5):1185-94。与基于细胞的表达相比，CFPS提供诸如更短的处理时间以及反本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于合成生物聚合物的系统，所述系统包括：/n包含质体、叶绿体、线粒体或叶绿体和线粒体的水性细胞裂解产物；/n聚合物模板；和/n聚合物的单体单元，其中所述系统不包含添加的磷酸肌酸和肌酸激酶，其对所述细胞裂解产物、质体、叶绿体、线粒体或叶绿体和线粒体是外源的。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170209 US 62/457,0731.一种用于合成生物聚合物的系统，所述系统包括：
包含质体、叶绿体、线粒体或叶绿体和线粒体的水性细胞裂解产物；
聚合物模板；和
聚合物的单体单元，其中所述系统不包含添加的磷酸肌酸和肌酸激酶，其对所述细胞裂解产物、质体、叶绿体、线粒体或叶绿体和线粒体是外源的。


2.根据权利要求1所述的系统，其还包括以下中的至少一个：
pH缓冲液；
镁，优选Mg(C5H8NO4)2；
钾，优选KC5H8NO4；
三磷酸核苷；
酶，优选RNA聚合酶；和
氯霉素。


3.根据权利要求1所述的系统，其基本上由来自植物细胞的水性细胞裂解产物组成，包含线粒体；DNA模板；HEPES-KOH，pH7.8；Mg(C5H8NO4)2；KC5H8NO4；三磷酸核苷；RNA聚合酶；和氯霉素。


4.一种用于合成至少一种生物聚合物的方法，所述方法包括将反应组分以反应体积组合，其中所述反应组分包含：
包含质体、叶绿体和/或线粒体的细胞裂解产物；
聚合物模板；和
所述聚合物的单体单元，
其中所述反应组分不包含磷酸肌酸和肌酸激酶。


5.根据权利要求4所述的方法，其中满足下述条件的任何组合：
通过所述方法生产的生物聚合物是多...

【专利技术属性】
技术研发人员：K·马杜里，J·阿姆斯特朗，A·埃特，M·本特鲁，S·沃格尔，S·席勒伯格，R·菲舍尔，
申请(专利权)人：美国陶氏益农公司，弗劳恩霍夫应用研究促进协会，
类型：发明
国别省市：美国;US