壳聚糖硒降低F-2毒素致猪子宫内膜上皮细胞CASP3蛋白表达升高的应用制造技术

本发明专利技术公开壳聚糖硒在抑制F‑2毒素所致猪子宫内膜上皮细胞CASP3(Caspase‑3)蛋白表达升高方面的应用。实验结果显示：对于子宫内膜上皮细胞，使用1.0‑3.0μmol/L的壳聚糖硒(在培养液中的终浓度，以硒计)，在F‑2毒素浓度为20‑40μg/mL，可抑制F‑2毒素所致猪子宫内膜上皮细胞Caspase‑3蛋白表达升高，以此达到减弱F‑2毒素对体外培养的猪子宫内膜上皮细胞的毒性作用，为壳聚糖硒在预防和治疗猪F‑2毒素中毒方面的应用提供体外研究模型和理论支持。

Application of chitosan selenium in decreasing the expression of CASP3 protein in porcine endometrial epithelial cells induced by F-2 toxin

【技术实现步骤摘要】
壳聚糖硒降低F-2毒素致猪子宫内膜上皮细胞CASP3蛋白表达升高的应用
本专利技术属于生物
，涉及细胞工程技术，尤其是一种壳聚糖硒降低F-2毒素致猪子宫内膜上皮细胞CASP3(Caspase-3)蛋白表达升高的应用和方法。
技术介绍
F-2毒素，也称玉米赤霉烯酮，是由禾谷镰刀菌产生，是二羟基苯酸内酯化合物，与雌二醇结构相似，具有雌激素样活性，是世界上污染农作物范围最为广泛真菌毒素之一。国内外大量研究证明，F-2毒素具有生殖毒性、细胞毒性、免疫毒性以及致癌作用。长期饲喂F-2毒素污染的饲料会导致畜禽生长性能下降、免疫功能低下和繁殖机能障碍。研究表明，F-2毒素对猪空肠上皮细胞、鸡脾淋巴细胞、大鼠睾丸间质细胞、小鼠子宫内膜基质细胞、猪卵巢颗粒细胞、大鼠子宫内膜细胞、猪子宫内膜细胞等均具有细胞毒性，可以抑制细胞增殖，导致细胞的凋亡。细胞凋亡的过程大致可分为以下几个阶段：接受凋亡信号→凋亡调控分子间的相互作用→蛋白水解酶的活化(Caspase)→进入连续反应过程。Caspase全称为含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶，与真核细胞凋亡密本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.壳聚糖硒在抑制F-2毒素所致猪子宫内膜上皮细胞CASP3(Caspase-3)蛋白表达升高方面中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.壳聚糖硒在抑制F-2毒素所致猪子宫内膜上皮细胞CASP3(Caspase-3)蛋白表达升高方面中的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：对于猪子宫内膜上皮细胞，当F-2毒素浓度为20-40μg/mL时，使用硒在培养液中的终浓度为1.0-3.0μmol/L的壳聚糖硒，能够抑制F-2毒素所致猪子宫内膜上皮细胞Caspase-3蛋白表达升高。


3.一种壳聚糖硒在抑制F-2毒素所致猪子宫内膜上皮细胞Caspase-3蛋白表达升高的方法，其特征在于：步骤如下：
对于猪子宫内膜上皮细胞，当F-2毒素浓度为20-40μg/mL时，加入壳聚糖硒，硒在培养液中的终浓度为1.0-3.0μmol/L，培养6-24h后，培养结束，能够抑制F-2毒素所致猪子宫内膜上皮细胞Caspase-3蛋白表达升高。


4.一种壳聚糖硒在抑制F-2毒素所致猪子宫内膜上皮细胞Caspase-3蛋白表达升高的验证方法，其特征在于：步骤如下：
⑴将纯化后的猪子宫内膜上皮细胞接种于六孔板，调整细胞浓度为4×105个/孔；试验分为对照组、F-2毒素攻毒组和壳聚糖硒组；细胞接种5-7d后，待细胞汇合80-90％，更换培养液：对照组和F-2毒素攻毒组更换为普通培养液，壳聚糖硒组更换含壳聚糖硒的培养液，硒浓度为1.0-3.0μmol/L；继续培养12-24h后取出六孔板，在F-2毒素攻毒组和壳聚糖硒组加入F-2毒素，使其浓度为20-40μg/mL，继续培养6-24h后，培养结束；
⑵采用Westernbloting法测定Caspase-3蛋白表达量的改变：
提取猪子宫内膜上皮细胞总蛋白，采用BCA法测定蛋白浓度，100℃煮沸变性蛋白；通过SDS-PAGE分离蛋白，转膜至PVDF膜，常规孵育一抗二抗，通过ImageLab显影，以此体现减弱F-2毒素对体外培养的猪子宫内膜上皮细胞的毒性作用。


5.根据权利要求4所述的壳聚糖硒在抑制F-2毒素所致猪子宫内膜上皮细胞Caspase-3蛋白表达升高的验证方法，其特征在于：所述步骤⑵的具体步骤如下：
⑴蛋白提取
用预冷的PBS洗涤细胞3次，每孔加入150μL的含1mMPMSF的RIPA细胞裂解液，充分接触细胞后，刮下细胞移...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦顺义，王欢欢，李元辉，李留安，马吉飞，张建斌，金天明，
申请(专利权)人：天津农学院，
类型：发明
国别省市：天津;12