处理液组合物、试剂盒和生物器官透明化同时进行免疫标记的方法技术

本发明专利技术涉及处理液组合物、处理液试剂盒以及生物器官透明化同时进行免疫标记的方法。本发明专利技术的处理液组合物包含透明化处理液和与所述透明化处理液的体积比为1:10至1:500的荧光标记抗体，其中透明化处理液包含：糖类、尿素和非离子表面活性剂。本发明专利技术允许抗体等生物大分子在对整体器官(脑，脊髓，关节软骨，(荷瘤)脏器等)进行透明化的同时进入器官内，实现整体器官尺度上的直接或间接免疫标记。

Method of simultaneous immunolabeling by transparent treatment solution composition, kit and biological organ

【技术实现步骤摘要】
处理液组合物、试剂盒和生物器官透明化同时进行免疫标记的方法
本专利技术涉及生物组织整体器官透明化和免疫标记的方法，特别是涉及用于将脑、脊髓、关节软骨、脏器等整体器官在透明化的同时直接或间接免疫荧光标记的处理液和方法。
技术介绍
组织透明方法可以实现组织无损情况下的大尺度高分辨检测与组织形态的三维结构重建。相对于传统的组织切片与染色方法具有显著性的进步。目前开发的所有组织透明方法中，只有部分组织透明方案允许整体器官免疫标记，如iDisco、Clarity、Cubic、ACT-presto等。Clarity和Cubic均去除了细胞膜，允许大分子进入，但是过程繁琐，需时近1-2周；iDisco使用的是有机溶剂，荧光兼容性较差，组织变硬变脆，且刺激性气味对人体有害；ACT-presto借助压力，需要专门设备，且免疫标记前需要繁杂的前处理过程。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种操作简单、高效的整体器官或组织透明化同时免疫标记的技术方案。为了实现上述目的，作为本专利技术的一个方面，本专利技术提供了一种处理液组合物，包本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种处理液组合物，包含：/n透明化处理液；和/n荧光标记抗体，所述荧光标记抗体与所述透明化处理液的体积比为1:10至1:500，/n其中，所述透明化处理液包含：/n糖类；/n尿素；/n非离子表及面活性剂，所述非离子表面活性剂包括体积比为5:3至1:5的曲拉通和吐温混合物。/n

【技术特征摘要】
1.一种处理液组合物，包含：
透明化处理液；和
荧光标记抗体，所述荧光标记抗体与所述透明化处理液的体积比为1:10至1:500，
其中，所述透明化处理液包含：
糖类；
尿素；
非离子表及面活性剂，所述非离子表面活性剂包括体积比为5:3至1:5的曲拉通和吐温混合物。


2.根据权利要求1所述的处理液组合物，其中所述糖类为果糖或蔗糖中的至少一种；和/或，所述曲拉通包括曲拉通X-100和曲拉通X-114；和/或，所述吐温包括吐温20，吐温40和吐温60。


3.根据权利要求1所述的处理液组合物，其中每100ml所述透明化处理液包含：20-30g的尿素，10-15ml的非离子表面活性剂，40-60g的糖类，0-20ml的氨类，0-2ml的抗氧化剂，余量为水；优选地，随着糖类含量的增加，尿素含量也增加，或者随着糖类含量的减少，尿素含量也减少。


4.根据权利要求1所述的处理液组合物，其中抗体包括以下抗体中的至少一种：
抗甲胎蛋白抗体(anti-AFP)，分子量约65kD，优选使用浓度范围为5-25μg/ml；
抗生存素抗体(anti-Survivin)，分子量约16kD，优选使用浓度范围为5-25μg/ml；和
抗绿色荧光蛋白抗体(anti-GFP)，分子量约27kD，优选使用浓度范围为10-100ug/ml。


5.一种处理液试剂盒，包含：
第一部分，包括：透明化处理液和按1:10至1:500体积比与透明化处理液混合的一抗；和
第二部分，包括：透明化处理液和按1:10至1:500...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟凯，徐金勇，汪增荣，
申请(专利权)人：中国科学院合肥物质科学研究院，
类型：发明
国别省市：安徽;34