【技术实现步骤摘要】
一种拉曼显微镜测定雨生红球藻虾青素含量的方法
本专利技术涉及细胞生物活性物质无损检测
，尤其是涉及利用拉曼显微镜测定雨生红球藻虾青素的方法。
技术介绍
雨生红球藻虾青素含量的确定通常使用溶剂萃取法、超声波萃取法、微波萃取法和超临界CO2萃取法等方法提取，然后再通过分光光度法、高效气相色谱法和高效液相色谱-质谱联用进行测定。检测过程费时费力，无法满足快速检测的需求。溶剂萃取法使用的萃取剂通常具有毒性，对实验和操作人员的健康不利。高效液相色谱和气相色谱虽然测定结果精确可靠，但仪器操作复杂，并且仍需要复杂的预处理过程。此外，上述方法都需要从样本中提取大量的目标物质才可测定，不适于少量培养的雨生红球藻虾青素的测定，或者需要破坏细胞结构，并不能即时监测雨生红球藻活体细胞内部虾青素积累情况。
技术实现思路
本专利技术主要解决现有技术所存在的现有方法都需要从样本中提取大量的目标物质才可测定，不适于少量培养的雨生红球藻虾青素的测定，或者需要破坏细胞结构，并不能即时监测雨生红球藻活体细胞内部虾青素积累等的技术问题，提...
【技术保护点】
1.一种拉曼显微镜测定雨生红球藻虾青素含量的方法，其特征在于，包括下述测定步骤:/na.取不同生长阶段的含有虾青素的红色雨生红球藻活体细胞，分为两组，一组取1mL离心得浓缩藻液用于拉曼光谱的测定，一组取50mL离心后冷冻干燥制备成雨生红球藻藻粉，用于高效液相色谱测定虾青素含量；/nb.拉曼光谱样品预处理：取雨生红球藻红色阶段细胞，采集活体细胞的拉曼光谱信号，使用4%浓度的低温琼脂固定细胞，将浓缩藻液和低温琼脂液混合制成雨生红球藻样本，滴加到载玻片上，盖上盖玻片，待低温琼脂冷却凝固后，置于拉曼显微镜下观察；/nc.拉曼光谱信息采集：将制好的雨生红球藻样本固定在激光共聚焦拉曼显...
【技术特征摘要】
1.一种拉曼显微镜测定雨生红球藻虾青素含量的方法，其特征在于，包括下述测定步骤:
a.取不同生长阶段的含有虾青素的红色雨生红球藻活体细胞，分为两组，一组取1mL离心得浓缩藻液用于拉曼光谱的测定，一组取50mL离心后冷冻干燥制备成雨生红球藻藻粉，用于高效液相色谱测定虾青素含量；
b.拉曼光谱样品预处理：取雨生红球藻红色阶段细胞，采集活体细胞的拉曼光谱信号，使用4%浓度的低温琼脂固定细胞，将浓缩藻液和低温琼脂液混合制成雨生红球藻样本，滴加到载玻片上，盖上盖玻片，待低温琼脂冷却凝固后，置于拉曼显微镜下观察；
c.拉曼光谱信息采集：将制好的雨生红球藻样本固定在激光共聚焦拉曼显微镜物镜下方的载物台上，用532nm激光束通过20X的物镜聚焦到雨生红球藻单细胞样本表面，瞬时激光强度为1mW，实验过程中保持在恒温25℃条件下进行；
d.拉曼成像提取光谱信号：在雨生红球藻细胞内以步长0.6μm画网格取点，采用静态扫描方式，以1525cm-1为中心在1250~1750cm-1范围内进行扫描，曝光时间为5s，提取每个取样点的拉曼光谱；
e.拉曼光谱数据预处理：首先，对原始光谱数据进行基线校正，以消除背景值的干扰；然后，采用卷积平滑法处理基线校正后的数据，除去实验过程中仪器、样本、人为因素造成的数据噪声；
f.半定量虾青素含量：在雨生红球藻细胞的拉曼光谱中，取1520cm-1处的特征峰用于虾青素的诊断，特征峰信号的强度与物质的含量成线性正相关，可用于量化虾青素含量，取各取样点1520cm-1波段处的拉曼强度做平均值，代表整个雨生红球藻细胞内虾青素的拉曼强度；
g.虾青素含量—拉曼强度曲线：采用高效液相色谱法测定不同生长阶段的雨生红球藻虾青素含量，与拉曼强度一一对应，以拉曼强度为横坐标，以虾青素含量为纵坐标绘制虾青素含量—拉曼强度曲线，计算虾青素含量对拉曼强度的拟合方程；
h.拉曼光谱确定虾青素含量：取待测雨生红球藻红色阶段细胞，采集细胞的拉曼光谱信号，样品处理方法如步骤（b）...
【专利技术属性】
技术研发人员：李珂，李清毅，李国能，郑友取，卜钟鸣，程军，
申请(专利权)人：浙江科技学院，李珂，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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