孔雀石绿检测方法、检测装置及探针制作方法制造方法及图纸

一种孔雀石绿检测方法、检测装置及探针制作方法，该检测方法包括以下步骤：S1、制备印记有孔雀石绿模板分子的聚合物材料；S2、将所述聚合物材料研磨成聚合物粉末；S3、洗脱所述聚合物粉末上的所述模板分子；S4、将洗脱了所述模板分子的所述聚合物粉末胶粘于萃取基底的表面，形成固相微萃取探针；S5、将待测样品施加到所述固相微萃取探针上；S6、将所述固相微萃取探针与质谱仪联用，以对所述待测样品进行关于孔雀石绿的检测。本发明专利技术能够有效提高探针制作过程中模板分子洗脱效率，降低了模板分子对待测目标物的干扰，并有效提高探针与检测时洗脱液的结合效率，提高待测目标物在质谱检测时的洗脱效率和检测的效率。

Malachite green detection method, detection device and probe manufacturing method

【技术实现步骤摘要】
孔雀石绿检测方法、检测装置及探针制作方法
本专利技术涉及物质检测技术，特别是涉及一种孔雀石绿检测方法和检测装置以及检测探针的制作方法。
技术介绍
孔雀石绿是一种呈绿色金属光泽的三苯甲烷类工业染料，化学式为C23H25C1N2，由于其成本低廉，对预防水霉病，鳃霉病和小瓜虫病具有良好的效果而被广泛地应用于水产业。然而多项研究证明孔雀石绿对鱼类和人体都是一种潜在的致癌、致畸、致突变的毒素，因而被加拿大、欧盟和美国食品药品监管局列为违禁药品。因而研发一种针对水产品的快速样品前处理流程对食品安全的监管很有必要。传统的样品处理通常较为复杂繁琐，包括多步的溶剂萃取、离心、旋蒸、固相萃取和洗脱，这些过程需要在实验室条件下进行，制约了在样品初始状态下现场快速检测的实现。固相微萃取是一种理想的快速样品处理方法，制备简单、成本低、操作简便、溶剂用量小，可集萃取富集分离等多步操作于一步，速度快，已成功地通过原位电离方法实现与质谱仪联用直接分析复杂样品，。考虑到水产品本身的复杂性，在利用固相微萃取技术进行前处理时，其选择性(为排除基质干扰并达到富集目标物的目的)和稳定性(重复检测的结果一致)是较为关键的考虑因素。分子印迹由于具有对模板分子有记忆特性的选择位点克服了传统样品预处理材料的缺点，且具有良好的选择吸附性、低成本、高度的热和化学稳定性，已成为分离和富集各种在复杂基质中的化学污染物的有力工具。为了达到样品前处理中对特定目标物富集分离的目的。一种方法是将分子印迹做在牙签上作为固相微萃取的涂层对孔雀石绿富集并用质谱原位电离检测，该方法对固相基底表面处理后利用化学键合的方法原位合成分子印迹涂层。此法制备的涂层厚度较粗糙，且内部涂层中的模板分子或吸附的目标物较难洗脱，达到萃取或脱附的平衡态所需时间延长。以上
技术介绍
内容的公开仅用于辅助理解本专利技术的专利技术构思及技术方案，其并不必然属于本专利申请的现有技术，在没有明确的证据表明上述内容在本专利申请的申请日已经公开的情况下，上述
技术介绍
不应当用于评价本申请的新颖性和创造性。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于克服现有技术的不足，提供一种孔雀石绿检测方法和检测装置以及检测探针的制作方法，实现一种可用于现场孔雀石绿快速高效检测的分子印迹前处理和质谱联用检测体系。为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：一种孔雀石绿检测方法，包括以下步骤：S1、制备印记有孔雀石绿模板分子的聚合物材料；S2、将所述聚合物材料研磨成聚合物粉末；S3、洗脱所述聚合物粉末上的所述模板分子；S4、将洗脱了所述模板分子的所述聚合物粉末胶粘于萃取基底的表面，形成固相微萃取探针；S5、将待测样品施加到所述固相微萃取探针上；S6、将所述固相微萃取探针与质谱仪联用，以对所述待测样品进行关于孔雀石绿的检测。进一步地：所述固相微萃取探针为包括多根探针丝的探针束的形式。所述萃取基底为不锈钢纤维基底，优选地,所述不锈钢纤维基底为包括捆扎成束的多根不锈钢纤维的不锈钢纤维束，优选地，所述不锈钢纤维的直径为100-200μm。所述胶粘为使用硅酮胶进行胶粘，优选地，所述硅酮胶是按配比将0.5g中性硅酮密封胶用1mL甲苯稀释得到。步骤S1中，用热引发聚合方法合成印记了孔雀石绿模板分子的所述聚合物材料；优选地，步骤S1包括以下步骤：(1)按配比将0.625mmol孔雀石绿(MG)、2.5mmol甲基丙烯酸(MAA)溶于2.5mL乙腈，超声30min；(2)按配比将50mg的偶氮二异丁腈(AIBN)加入步骤(1)得到的预聚溶液中，通入10min氮气以除去溶解氧，水浴50℃下反应24h；(3)将步骤(2)得到的聚合物块压碎，用甲醇离心清洗2-3次除去游离的模板分子，室温下干燥。步骤S3中，将所述聚合物粉末包裹在滤纸中，用9：1v/v的甲醇-乙酸在索氏提取器中萃取洗脱所述模板分子，直至上层浸泡液在质谱中检测不到目标物为止。步骤S4中，在所述萃取基底上浸蘸硅酮胶液，形成一层硅酮胶薄膜，将粘有硅酮胶的所述萃取基底在所述聚合物粉末中转圈以胶粘所述聚合物粉末，并用烘箱7在150℃下老化15min；重复该过程直至得到理想的涂层厚度。步骤S5包括：(1)按配比取4g搅碎的鱼肉加入8mL乙腈和5g无水硫酸钠斡旋15min，提取上清液；(2)将所述上清液用0.22μm的滤膜过滤后，转移到离心管中，插入所述固相微萃取探针，使其带有分子印迹的涂层部分完全浸蘸在所述上清液中，手动搅拌1-2min。(3)取出所述固相微萃取探针束，用超纯水润洗探针表面以除去不溶性颗粒；步骤S6包括：将所述固相微萃取探针固定在三维定位器上，在接近质谱仪进样口处与其呈90°角水平放置，在所述固相微萃取探针上滴加含有1％乙酸的乙腈洗脱溶液，同时在所述固相微萃取探针上施加4.5kV电压，样品分子在吸附相表面洗脱的同时形成带电液滴，进而被电离并导入便携质谱仪进样口，实现现场原位电离分析。一种用于孔雀石绿检测的固相微萃取探针的制作方法，包括所述的孔雀石绿检测方法中的步骤S1-S4。一种孔雀石绿检测装置，包括固相微萃取探针和便携式质谱仪两部分组合，所述的固相微萃取探针采用所述的制作方法制作，用于现场孔雀石绿的快速分离、富集、解吸和喷雾电离，所述的便携式质谱仪用于所述孔雀石绿离子的检测分析。本专利技术具有如下有益效果：本专利技术提供了一种孔雀石绿检测方法、检测装置及其检测探针的制作方法。本专利技术的检测方案中，先合成块状印记了孔雀石绿模板分子的聚合物材料，随后将聚合物材料研磨成粉末再进行洗脱，使模板分子较易洗脱，有效降低模板分子对待测目标物的干扰；采用胶粘连的方法将洗脱分子模板后的聚合物粉末固定在萃取基底表面，使得分子印迹材料涂层厚度变得更可控，便于平衡目标物的萃取量与萃取时间之间的关系，以充分发挥分子印迹材料在富集孔雀石绿目标物上的能力，并可与便携式质谱仪联用实现现场快速检测。本专利技术能够将分子印迹的耐用性、低成本和制备简单与便携质谱的高灵敏、高效性结合起来，用原位电离的方法快速处理水产品等具有复杂基质的样品。在优选的方案中，本专利技术还能够获得进一步的优点，例如，所述萃取基底采用纤维丝束形式，优选不锈钢纤维，涂层厚度可控性更佳，进一步优选地，将多根不锈钢萃取纤维捆绑在一起制作成固相微萃取探针束，大大增大萃取相和样品接触的面积，在不增加涂层厚度的情况下显著增大对目标物的萃取总量和质谱检测时对目标物的洗脱效率。从便携质谱角度考虑，采用纤维基底的固相微萃取探针，可采用原位电离的方法直接对探针上富集的分析物电离，无需洗脱或借助其他辅助电离装置，简化了操作步骤，利于小型质谱仪实现快速现场分析。相对于传统技术，本专利技术实施例的优势至少体现在如下方面：(1)常规分子印迹涂层通常以原位聚合的方法固定在固相基底上，涂层厚度的增大增加了萃取量的同时也阻碍了模板分子的完全洗脱。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种孔雀石绿检测方法，其特征在于,包括以下步骤：/nS1、制备印记有孔雀石绿模板分子的聚合物材料；/nS2、将所述聚合物材料研磨成聚合物粉末；/nS3、洗脱所述聚合物粉末上的所述模板分子；/nS4、将洗脱了所述模板分子的所述聚合物粉末胶粘于萃取基底的表面，形成固相微萃取探针；/nS5、将待测样品施加到所述固相微萃取探针上；/nS6、将所述固相微萃取探针与质谱仪联用，以对所述待测样品进行关于孔雀石绿的检测。/n

【技术特征摘要】
1.一种孔雀石绿检测方法，其特征在于,包括以下步骤：
S1、制备印记有孔雀石绿模板分子的聚合物材料；
S2、将所述聚合物材料研磨成聚合物粉末；
S3、洗脱所述聚合物粉末上的所述模板分子；
S4、将洗脱了所述模板分子的所述聚合物粉末胶粘于萃取基底的表面，形成固相微萃取探针；
S5、将待测样品施加到所述固相微萃取探针上；
S6、将所述固相微萃取探针与质谱仪联用，以对所述待测样品进行关于孔雀石绿的检测。


2.如权利要求1所述的孔雀石绿检测方法，其特征在于,所述固相微萃取探针为包括多根探针丝的探针束的形式。


3.如权利要求1所述的孔雀石绿检测方法，其特征在于,所述萃取基底为不锈钢纤维基底，优选地,所述不锈钢纤维基底为包括捆扎成束的多根不锈钢纤维的不锈钢纤维束，优选地，所述不锈钢纤维的直径为100-200μm。


4.如权利要求1至3任一项所述的孔雀石绿检测方法，其特征在于,所述胶粘为使用硅酮胶进行胶粘，优选地，所述硅酮胶是按配比将0.5g中性硅酮密封胶用1mL甲苯稀释得到。


5.如权利要求1至4任一项所述的孔雀石绿检测方法，其特征在于,步骤S1中，用热引发聚合方法合成印记了孔雀石绿模板分子的所述聚合物材料；
优选地，步骤S1包括以下步骤：
(1)按配比将0.625mmol孔雀石绿(MG)、2.5mmol甲基丙烯酸(MAA)溶于2.5mL乙腈，超声30min；
(2)按配比将50mg的偶氮二异丁腈(AIBN)加入步骤(1)得到的预聚溶液中，通入10min氮气以除去溶解氧，水浴50℃下反应24h；
(3)将步骤(2)得到的聚合物块压碎，用甲醇离心清洗2-3次除去游离的模板分子，室温下干燥。

【专利技术属性】
技术研发人员：张兵，郭成安，钟仕花，瞿翠兰，
申请(专利权)人：深圳至秦仪器有限公司，深圳市农产品质量安全检验检测中心深圳市动物疾病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：广东;44