鞭毛蛋白抗体在制备防治泌尿系结石及肾损伤的药物中的应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，公开了鞭毛蛋白抗体及其衍生物在制备防治泌尿系结石及晶体引起的肾损伤的药物中的应用。本发明专利技术首次研究证明了鞭毛蛋白抗体具有抑制晶体的聚集及其对肾小管上皮细胞的粘附的作用，具备治疗泌尿系结石的潜力。本发明专利技术提供了鞭毛蛋白抗体的一种新用途，即其在制备防治泌尿系结石药物中的应用，也为泌尿系结石疾病的治疗提供了新的选择方案，具有很好的应用前景。

The application of flagellin antibody in the preparation of drugs for the prevention and treatment of urinary calculi and renal injury

【技术实现步骤摘要】
鞭毛蛋白抗体在制备防治泌尿系结石及肾损伤的药物中的应用
本专利技术属于生物医药
更具体地，涉及鞭毛蛋白抗体及其衍生物在制备防治泌尿系结石及晶体引起的肾损伤的药物中的应用。
技术介绍
泌尿系结石是一种全球性的常见疾病，也是我国最常见的泌尿外科疾病，结石在尿液中形成的一个先决条件是晶体的聚集成核。泌尿系结石的成分研究发现，草酸钙是泌尿系结石最常见的化学成分。草酸钙结石的形成大致包括晶核形成、结晶生长、结晶聚集、结晶粘附滞留直至结石形成等过程，目前已存在的草酸钙结石形成的假说包括钙斑学说、基质学说、过饱和和结晶学说、抑制物学说等。现有研究显示尿路致病性大肠埃希菌不仅是单纯尿路感染合并的最主要的致病菌，而且也是泌尿系结石患者尿路感染中常见的病原菌。草酸钙结石核心内不但沉积有蛋白、脂质等被认为是导致代谢性结石形成的物质，更沉积有大量细菌，特别是大肠埃希菌，提示尿路致病性大肠埃希菌可能在草酸钙结石的发生发展中也具有重要作用。此外，草酸钙结石的形成还与晶体生长所处环境条件有关，目前的研究认为草酸钙晶体在尿液中的聚集成核以及肾小管上皮细胞损伤之后草酸钙晶体粘附聚集是草酸钙结石形成的最主要原因之一。泌尿系结石患者和正常人的尿液中均含有大量的晶体，正常人尿液中的晶体能够被肾小管液冲走，但尿石症患者的肾小管上皮细胞膜存在损伤，可导致草酸钙等晶体的滞留和粘附，这些晶体在粘附到肾小管上皮细胞上变为固定的颗粒后，长大并形成结石。因此，减少肾小管上皮细胞膜的损伤，以及减少肾小管上皮细胞膜与晶体的粘附是防治结石形成的关键靶点之一。<br>目前对于结石的治疗以手术为主，临床上运用枸橼酸氢钾钠对胱氨酸结石进行治疗，此外还未见其它药物用于结石的治疗上。因此，迫切需要寻找新的且能有效防治合并尿路致病性大肠埃希菌感染引起的泌尿系结石的药物。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服现有泌尿系结石疾病的防治技术的不足，提供了一种新的防治泌尿系结石疾病的药物选择，即鞭毛蛋白抗体及其衍生物在防治泌尿系结石及晶体引起的肾损伤中的应用。本专利技术的目的是提供鞭毛蛋白抗体及其衍生物在制备防治泌尿系结石的药物中的应用。本专利技术另一目的是提供鞭毛蛋白抗体及其衍生物在制备防治晶体引起的肾损伤的药物中的应用。本专利技术的再一目的是提供一种防治合并尿路致病性大肠埃希菌感染引起的泌尿系结石的药物。本专利技术的上述目的是通过以下技术方案实现的：本专利技术以一水草酸钙晶体作为实验对象，研究证明了鞭毛蛋白抗体能够抑制晶体的聚集及其对肾小管上皮细胞的粘附，抑制IκB、p-NFκB、p-P38等信号分子的表达，具备治疗泌尿系结石的潜力。因此，以下应用均应在本专利技术的保护范围之内：本专利技术请求保护鞭毛蛋白抗体及其衍生物在制备防治泌尿系结石的药物中的应用。具体地，所述泌尿系结石为合并尿路致病性大肠埃希菌感染引起的泌尿系结石。更具体地，所述防治泌尿系结石是抑制晶体对肾小管细胞的粘附、降低晶体在肾脏中的沉积和/或抑制晶体引起的细胞毒性。本专利技术还请求保护鞭毛蛋白抗体及其衍生物在制备防治晶体引起的肾损伤的药物中的应用。具体地，所述晶体是草酸钙晶体。具体地，所述肾损伤是指肾细胞损伤。优选地，所述肾细胞为肾小管上皮细胞。优选地，所述鞭毛蛋白抗体的衍生物包括以鞭毛蛋白抗体为母核的分子、类似物或其药物可接受的盐。另外，一种含有鞭毛蛋白抗体和/或其类似物的防治合并尿路致病性大肠埃希菌感染引起的泌尿系结石的药物也在本专利技术的保护范围之内。鞭毛蛋白抗体是针对大肠埃希菌的鞭毛蛋白这一抗原而产生的蛋白分子。它具有抑制草酸钙晶体聚集等多种生物学功能。在本专利技术之前，鞭毛蛋白抗体在防治泌尿系结石疾病方面还未见有报道，本专利技术首次研究并公开了鞭毛蛋白抗体在防治泌尿系结石疾病方面的应用。本专利技术证明了鞭毛蛋白抗体及其衍生物在草酸钙晶体刺激引起的肾小管上皮细胞损伤中具有保护作用；还证明了鞭毛蛋白抗体及其衍生物对于肾小管上皮细胞损伤后的晶体粘附具有抑制作用。由于鞭毛蛋白抗体性质不稳定，因此在本专利技术的方案中，鞭毛蛋白抗体及其衍生物可以通过一种药学可接受的盐或药物复合物的形式对病人给药，与适当载体或赋形剂混合形成药物组合物从而保证达到有效治疗，所述剂型包括固体剂型、半固体剂型、液体制剂和气雾制剂。本专利技术具有以下有益效果：1、本专利技术首次研究发现鞭毛蛋白抗体具有抑制晶体聚集及其对肾小管上皮细胞的粘附的作用，可用于开发泌尿系结石抑制剂。2、本专利技术提供了鞭毛蛋白抗体及其衍生物的一种新用途，即其在防治泌尿系结石及晶体引起的肾损伤中的应用，为泌尿系结石疾病的治疗提供了新的选择方案。附图说明图1是△PPK-CFT073菌株构建的PCR验证图；图2是△PPK-CFT073及其培养液对COM的聚集能力的影响结果；图3是不同孵育时间下△PPK-CFT073及其培养液对COM的聚集能力的影响结果；图4是SDS-PAGE蛋白凝胶电泳检测COM晶体粘附细菌蛋白的结果；图5是差异蛋白的蛋白质谱图；图6是鞭毛蛋白抗体抑制WT-CFT073培养液对COM的聚集作用图；图7是PCR、Westernblot验证△Flic-CFT073菌株成功构建的结果；图8是△Flic-CFT073及其培养液对COM的聚集能力的影响结果；图9是WT-CFT073、△PPK-CFT073、△Flic-CFT073细菌对肾小管上皮细胞-COM粘附作用图；图10是不同浓度鞭毛蛋白对肾小管上皮细胞晶体粘附能力的影响结果；图11是WT-CFT073、△PPK-CFT073、△Flic-CFT073细菌对肾小管上皮细胞蛋白IκB/NF-κB/P38-MAPK信号分子表达的影响结果。具体实施方式以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本专利技术，但实施例并不对本专利技术做任何形式的限定。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。1、主要试剂：TerrificBroth培养基购自Invitrogen(Carlsbad，CA，USA)；野生型尿路致病性大肠埃希菌CFT073(ATCC700928)菌株从美国模式菌种收集中心ATCC购买；磷酸缓冲盐溶液(PBS)从博士德生物工程有限公司购买；0.22um除菌过滤器购自Millipore(Tullagreen，Carrigtwohil，Co.Cork，IRL)；TaqDNA聚合酶、琼脂糖凝胶DNA纯化试剂盒、质粒提取试剂盒及DNAMarker均购自宝生物工程(大连)有限公司；考马斯亮蓝染色液购自碧云天生物技术公司(Beyotime，上海)；鞭毛蛋白抗体从艾博抗(上海)贸易有限公司(Abcam)购买；草酸钠、氯化钙均购自Sigma-Aldrich(St.Louis，MO，USA)；其它常用的实验室试剂均为国产分析纯级。2、仪器及设备超净工作台(Th本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.鞭毛蛋白抗体及其衍生物在制备防治泌尿系结石的药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.鞭毛蛋白抗体及其衍生物在制备防治泌尿系结石的药物中的应用。


2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述泌尿系结石为合并尿路致病性大肠埃希菌感染引起的泌尿系结石。


3.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述防治泌尿系结石是抑制晶体对肾小管细胞的粘附、降低晶体在肾脏中的沉积和/或抑制晶体引起的细胞毒性。


4.鞭毛蛋白抗体及其衍生物在制备防治晶体引起的肾损伤的药物中的应用。


5.根据权利要求3或4所述应用，其特征在于，所述晶体是草酸钙晶体。


6.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴文起，赖永长，吴伟宙，陈东，梁雄发，钟芳灵，黄健，黄亚鹏，张世科，何枝灿，
申请(专利权)人：广州医科大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：广东;44