源于广西巴马具有高产维生素B能力的植物乳杆菌Bama06及其用途制造技术

源于广西巴马具有高产维生素B能力的植物乳杆菌Bama06及其用途，从广西巴马长寿老人肠道中分离得到的乳酸菌，测定不同乳酸菌在37℃下于MRS/M17培养基、牛乳培养基及豆浆培养基中发酵50 h发酵液的pH和活菌数，得到可以在不同培养基中生长产酸的乳酸菌，同时利用高效液相色谱法测定发酵液中维生素B的种类与产量，筛选出具有高产维生素B能力和较高产酸能力及活力的乳酸菌；经API试剂条及16s rDNA测序分析将筛选出的菌株Bama06鉴定为植物乳杆菌。本发明专利技术菌株的耐酸耐胆盐能力较强，可应用于制作富含维生素B的功能食品，利用本发明专利技术菌制得的产品，具有富含维生素B的特点。

Lactobacillus plantarum bama06 with high vitamin B production from Bama, Guangxi and its application

【技术实现步骤摘要】
源于广西巴马具有高产维生素B能力的植物乳杆菌Bama06及其用途
本专利技术涉及生物
，特别涉及源于广西巴马具有高产维生素B能力的植物乳杆菌Bama06及其用途。技术背景维生素B是机体必须的微量营养素之一，具有多种生理功能，常以辅酶的形式参与调节各种代谢反应，对人体健康十分重要。维生素B在人体含量很少，大部分不能由人体自身产生，很多人由于膳食营养不平衡、吸收效率低而导致维生素B缺乏进而引起疾病，须通过外源性的维生素B营养食品或者药物来补充。因此，开发科学、健康的维生素膳食补充产品成为食品行业关注的焦点。乳酸菌作为公认的安全微生物，具有合成维生素B的能力。生物合成的维生素B具有安全性、经济性及环境友好性等优点，因此，使乳酸菌发酵食品成为人们日常维生素B营养强化的补充剂可进一步为人类健康事业添砖加瓦。
技术实现思路
本专利技术第一个目的在于提供一种具有高产维生素B能力和较高产酸能力及活力的乳酸菌，以期进一步开发利用。源于广西巴马具有高产维生素B能力的植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum）Bama06，于2019年10月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCCNO.18694。经实验验证，本专利技术菌株在同一批次广西巴马长寿老人肠道中分离的63株乳酸菌中产维生素B的种类与产量最高，表明本专利技术菌株具有良好的产维生素B的能力。经测定发现在MRS、牛乳及豆浆基质中37℃发酵50h后，发酵液pH值分别为3.99、4.74和3.99，且活菌数均大于109CFU/mL，有较高的产酸能力及活力，经37℃发酵50h，在MRS发酵液中维生素B1、维生素B5及叶酸分别超过2.0mg/L、41.5mg/L及0.5mg/L；在牛乳发酵液中维生素B2、维生素B3和维生素B5分别大于8.4mg/L、5.0mg/L和11.9mg/L；在豆浆发酵液中维生素B3的生物合成量大于1.0mg/L。通过API试剂条及16SrDNA序列比对分析将该菌株鉴定为植物乳杆菌。本专利技术菌株经耐酸耐胆盐实验发现，该菌株在pH为3.0的人工胃液中存活率为98.67%，在胆盐浓度为0.10%、0.30%、0.50%的MRS培养基中培养3h存活率分别大于71.9%、43.3%及11.2%。本专利技术的第二个目的是提供高产维生素B和较高产酸能力及活力的植物乳杆菌Bama06的制备方法，即采用传统涂布平板分离法从广西巴马长寿村采集的样品中分离乳酸菌。本专利技术的第三个目的是提供高产维生素B能力和较高产酸能力及活力乳酸菌的用途。本专利技术菌株在牛乳基质中表现出良好的维生素B合成能力，可以利用其研发富含维生素B的发酵乳产品或乳酸菌饮料。也可将该乳酸菌的培养物经冷冻干燥用于生产含有维生素B的膳食功能补充剂。由于生物合成的维生素B更适合人体吸收，更安全，该乳酸菌发酵物可以用作一种食疗性产品。本专利技术从广西巴马长寿老人肠道中分离得到的乳酸菌，测定不同乳酸菌在37℃下于MRS/M17培养基、牛乳培养基及豆浆培养基中发酵50h发酵液的pH和活菌数，得到可以在不同培养基中生长产酸的乳酸菌，同时利用高效液相色谱法测定发酵液中维生素B的种类与产量，筛选出具有高产维生素B能力和较高产酸能力及活力的乳酸菌；经API试剂条及16srDNA测序分析将筛选出的菌株Bama06鉴定为植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum）。通过对植物乳杆菌Bama06耐酸耐胆盐能力的研究发现，本专利技术菌株的耐酸耐胆盐能力较强，可应用于制作富含维生素B的功能食品，利用本专利技术菌制得的产品，具有富含维生素B的特点。附图说明图1为本专利技术菌株API鉴定结果；图2为本专利技术菌株16SrDNAPCR扩增产物电泳图；图3为本专利技术实验中维生素B标准品测定图谱；图4为本专利技术菌株API试剂条鉴定图；图5为本专利技术菌株16SrDNA序列。具体实施方法本专利技术采用传统涂布平板分离法从广西巴马长寿村采集的样品中分离乳酸菌，通过测定发酵液中的pH和活菌数确定活力好、产酸高的乳酸菌菌株；通过测定乳酸菌在MRS/M17、牛乳及豆浆培养基中的产维生素B的量与种类筛选出产维生素B能力较强的乳酸菌。相关培养基及试剂配方MRS培养基：蛋白胨10.0g，三水醋酸钠3.0g，牛肉膏8.0g，柠檬酸三铵2.0g，酵母浸膏4.0g，七水硫酸镁0.2g，葡萄糖10.0g，一水硫酸锰0.04g，吐温-801.0mL，磷酸氢二钾2.0g，硫乙醇酸钠2.0g，蒸馏水1000mL。调pH至6.4，121℃灭菌15min，冷却备用。M17培养基：植物蛋白胨5g，聚蛋白胨5g，牛肉膏2.5g，酵母提取物5g，抗坏血酸钠0.5g，乳糖10g，甘油10g，磷酸氢二钠5g，七水硫酸镁0.25g，蒸馏水1000mL。121℃灭菌15min，冷却备用。牛乳培养基：称取7%的蔗糖溶于热水中，将全脂乳粉按12%的比例溶于80℃的糖水中，95℃灭菌20min，冷却备用。豆浆培养基：称取大豆100g，浸泡于1000mL水中，24℃下浸泡12h。按1：8体积比例加入蒸馏水，磨浆3min后过筛，豆浆中加入7%的蔗糖，95℃灭菌20min，冷却备用。具体步骤：1样品采集采集广西巴马长寿村中长寿人群的粪便样品，加入1mL灭菌液体石蜡油密封后，迅速置于冰盒内，分离样品中的乳酸菌。2乳酸菌的分离将采集的样品经梯度稀释后，分别接种于MRS固体培养基、M17固体培养基中，37℃厌氧培养48h，挑取平板上的典型菌落，划线分离得到纯菌落。挑取各平板上的纯菌落于MRS液体培养基中，37℃厌氧培养24h后，4℃冰箱冷藏备用或冻干保藏。3乳酸菌的发酵特性将分离得到的乳酸菌活化后按3%的比例分别接种到MRS/M17液体培养基、牛乳培养基及豆浆培养基中，于37℃下培养50h后测定发酵液pH和活菌数。结果发现，Bama06在MRS、牛乳及豆浆基质中经过50h的发酵后发酵液pH值分别为3.99、4.74和3.99，且活菌数均大于109CFU/mL，表明该菌株在不同的基质中有较高的产酸能力及活力。4筛选具有高产维生素B能力的乳酸菌4.1发酵液制备：将乳酸菌培养液在5000×g下离心5min收集菌体，用盐水溶液（0.85%m/vNaCl）洗涤3次，将菌体重悬于盐水溶液中制成供试菌液备用。将供试菌液按3%的体积比加入到20mL的MRS/M17、牛乳及豆浆培养基中。在37℃的恒温培养箱中培养50h后，取1mL发酵液加入等体积超纯水稀释，于3000rmp离心5min后取上清。4.2发酵液中维生素B的测定4.2.1液相色谱分析条件：色谱柱：ZORBAXSB-C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；柱温：30℃；流动相：B磷酸二氢钾缓冲液(磷酸调节pH=2.5本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.源于广西巴马具有高产维生素B能力的植物乳杆菌（

【技术特征摘要】
1.源于广西巴马具有高产维生素B能力的植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum）Bama06，保藏编号为CGMCCNO.18694，具有高产维生素B的能力，同时具有较强的耐酸耐胆盐能力。


2.如权利要求1所述源于广西巴马具有高产维生素B能力的植物乳杆菌Bama06，其特征是，经37℃发酵50h，在MRS发酵液中维生素B1、维生素B5及叶酸分别超过2.0mg/L、41.5mg/L及0.5mg/L；在牛乳发酵液中维生素B2、维生素B3和维生素B5分别大于8.4mg/L、5.0mg/L和11.9mg/L；在豆浆发酵液中维生素B3的生物合成量大于1.0mg/L。


3.如权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾瑞霞，胡雅倩，陈大卫，张臣臣，黄玉军，陈霞，关成冉，
申请(专利权)人：扬州大学，江苏宇航食品科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32