一种简易高效的葛根多倍体诱导方法技术

本发明专利技术涉及植物育种技术领域，具体涉及一种简易高效的葛根多倍体诱导方法。一种简易高效的葛根多倍体诱导方法，其包括外植体处理、无菌苗培养、丛生芽诱导、茎节伸长培养、多倍体诱导、嵌合体分离和纯系筛选等步骤。本发明专利技术先利用幼嫩的藤蔓进行培养获得无菌苗，然后诱导无菌苗获得丛生芽，再利用培养基对获得的丛生芽继续培养，得到茎节较长的组培苗；通过该方法可以获得茎节较长的单芽茎段，使单芽茎段也可以作为诱导的材料，丰富了现有的葛根多倍体诱导材料，提高了诱导的工作效率；另外利用葛根单芽茎段作为诱导材料的诱导率高于茎尖。

A simple and efficient method for polyploid induction of Pueraria lobata

The invention relates to the technical field of plant breeding, in particular to a simple and efficient polyploid induction method of Pueraria lobata. A simple and efficient polyploid induction method of Pueraria lobata includes explant treatment, aseptic seedling culture, cluster bud induction, stem node elongation culture, polyploid induction, chimera separation and pure line selection. In the invention, the young vine is used for culturing to obtain the aseptic seedling, then the aseptic seedling is induced to obtain the cluster bud, and then the culture medium is used to continue culturing the cluster bud to obtain the tissue culture seedling with a longer stem node; by this method, the single bud stem segment can be obtained, which can also be used as the induction material, enriching the existing polyploid induction material of pueraria root and improving In addition, the induction rate of using single bud stem segment of Pueraria lobata as induction material was higher than that of shoot tip.

【技术实现步骤摘要】
一种简易高效的葛根多倍体诱导方法
本专利技术涉及植物育种
，具体涉及一种简易高效的葛根多倍体诱导方法。
技术介绍
葛根又叫葛藤、葛麻藤、粉葛，为豆科葛属藤本植物，富含淀粉，是中国卫生部首批批准的药食同源两用植物，素有“北参南葛”、“亚洲人参”之美誉。葛根由于含有丰富的异黄酮类物质而在食品、医药等行业应用广泛。但是，经过大量的检测发现目前市场上的葛根产品的葛根素含量偏低或很低，未能达到药典的相关标准。实践证明，很多药用植物诱导的多倍体材料其次生代谢产物的含量都有所增加。因此，开展葛根多倍体诱导技术研究，从中选育高葛根素材料，可为功能型葛根产业的发展提供品种保障。葛根多倍体的诱导研究中仅见以葛根茎尖作为诱导材料的报道，周堂英的《粉葛组织培养体系的建立及同源四倍体新种质的培育》中就公开对丛生芽茎尖和成苗茎尖进行秋水仙素诱导首次获得了粉葛多倍体。但是茎尖是顶芽只有一个，其材料来源有限，诱导材料的基数小，导致诱导工作效率较低，限制了葛根育种的发展。目前关于葛根离体快繁技术的研究都是通过诱导愈伤组织再分化丛生芽，未见有葛根通过单芽茎段产生不定本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种简易高效的葛根多倍体诱导方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1.外植体处理：选取生长健壮、无病虫害的幼嫩藤蔓，先用0.1％升汞浸泡消毒6-10min，然后用无菌水冲洗4-5次，最后用无菌滤纸吸干茎段表面水分备用；/nS2.无菌苗培养：在无菌条件下，将经过S1处理的藤蔓切成单芽茎段，将生物学下端垂直竖插于初代培养基中培养28-30d，获得无菌苗；/nS3.丛生芽诱导：在无菌条件下，将无菌苗转接到丛生芽诱导培养基中培养20-25d，获得丛生芽；/nS4.茎节培养：在无菌条件下，将丛生芽转接到茎节伸长培养基中培养25-30d，获得茎节较长的葛根组培苗；/nS5.多倍体诱导：在无菌条件下，将...

【技术特征摘要】
1.一种简易高效的葛根多倍体诱导方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.外植体处理：选取生长健壮、无病虫害的幼嫩藤蔓，先用0.1％升汞浸泡消毒6-10min，然后用无菌水冲洗4-5次，最后用无菌滤纸吸干茎段表面水分备用；
S2.无菌苗培养：在无菌条件下，将经过S1处理的藤蔓切成单芽茎段，将生物学下端垂直竖插于初代培养基中培养28-30d，获得无菌苗；
S3.丛生芽诱导：在无菌条件下，将无菌苗转接到丛生芽诱导培养基中培养20-25d，获得丛生芽；
S4.茎节培养：在无菌条件下，将丛生芽转接到茎节伸长培养基中培养25-30d，获得茎节较长的葛根组培苗；
S5.多倍体诱导：在无菌条件下，将茎节较长的葛根组培苗先切成单芽茎段转接到诱导剂液体培养基中进行震荡培养48h-72h；
S6.嵌合体分离：在无菌条件下，将经过S5处理的单芽茎段用无菌水冲洗干净，然后转接到嵌合体分离培养基上培养，然后挑选变异植株将其单芽茎段用茎节伸长培养基连续进行4-6次的继代培养；
S7.纯系筛选：取经过S6培养的整株叶片，进行倍性鉴定，筛选出多倍体纯系材料。


2.根据权利要求1所述的葛根多倍体诱导方法，其特征在于，S2中所述初代培养基为：MS基本培养基+0.3mg/L6-BA+0.05mg/LNAA+30.0g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，初始培养基pH为5.8；
培养条件为：温度25±1℃，光照1500-2000lx，光照时间16h/d。


3.根据权利要求1所述的葛根多倍体诱导方法，其特征在于，S3中所述丛生芽诱导培养基为...

【专利技术属性】
技术研发人员：严华兵，曾文丹，尚小红，肖亮，曹升，陆柳英，谢向誉，
申请(专利权)人：广西壮族自治区农业科学院，
类型：发明
国别省市：广西;45