【技术实现步骤摘要】
一种用于构建体外肿瘤模型的3D支架及其制备方法和应用
本专利技术涉及生物医学材料
，具体地说，是一种用于构建体外肿瘤模型的3D支架及其制备方法和应用。
技术介绍
细胞培养工作现已广泛应用于生物学、医学、毒理学、新药研发、生物工程等各个领域，研究和观察细胞的形态结构和生命活动的技术手段已成为生命研究的一种必要的筛选和预实验手段。目前，常规的细胞培养模式包括二维细胞培养，是在细胞培养板如2、4、6、12、24、48、96孔细胞培养板或细胞培养瓶、生物反应器等中进行，细胞在培养基中以一种二维方式单层贴壁生长。然而，多项研究发现在体外二维培养的细胞的基因表达、信号转导和形态学都可能与在生物体内三维生长的细胞有差异。现有技术存在以下缺陷：1、利用现有的2D细胞培养板，细胞形态发生改变，极性发生改变，骨架发生重构，随之而来的是细胞的生物学行为的改变；2、利用细胞培养皿或细胞培养板培养细胞存在细胞微环境过于简单的弊端，查阅文献得知，体内结直肠癌细胞微环境存在物理、化学和生物信号等复杂的信号刺激...
【技术保护点】
1.一种用于构建体外肿瘤模型的3D支架，其特征在于，所述3D支架包括以下重量份配比的原材料：SF：Cs：Alg＝1:1:1，所述3D支架还包括原材料EDC和NHS；/n所述3D支架采用冷冻干燥法制成，所述3D支架的制备方法包括如下步骤：/n步骤一：制备丝素蛋白溶液：/n(1)取干净蚕茧壳剪成0.5-1cm
【技术特征摘要】
1.一种用于构建体外肿瘤模型的3D支架，其特征在于，所述3D支架包括以下重量份配比的原材料：SF：Cs：Alg＝1:1:1，所述3D支架还包括原材料EDC和NHS；
所述3D支架采用冷冻干燥法制成，所述3D支架的制备方法包括如下步骤：
步骤一：制备丝素蛋白溶液：
(1)取干净蚕茧壳剪成0.5-1cm2的碎片，称重，真空袋中保存备用，准备0.5％的碳酸钠溶液1000ml，并置于水浴锅中加热至沸腾，将5g蚕茧壳加入0.5％的碳酸钠溶液浸没，用搅拌棒搅拌，蚕茧壳煮沸3遍，每遍1个小时；
(2)用自然水洗蚕茧3次，再用去离子水洗3次，然后60℃烘箱10小时；
(3)将(2)干燥后的蚕茧溶解于溴化锂溶液中，配置9M溴化锂溶液，磁力搅拌器60℃搅拌加热，将烘干的丝素加入，使丝素充分溶解；冷却至室温，用布氏漏斗过滤；
(4)透析：滤液装入透析袋中用去离子水4℃冰箱里透析5天，每隔3小时换水一次，以去除丝素溶液中的小分子物质，制得丝素蛋白溶液；
(5)浓缩提纯：将制得的丝素蛋白液体仍由透析袋盛放，放入聚乙二醇6000粉剂中，干燥浓缩，收集液体，将其以3500r/min离心15min，将不溶物去除，留取上清液，置于4℃冰箱中保存，可保存一周；
(6)浓度测定：取3个称量瓶编号洗净后放入60℃恒温烘箱中烘干，充分冷却，称量三者重量，记为M1；各取10ml丝素蛋白液放入称量瓶，称重为M2；放入60摄氏度烘箱中12h取出，冷却后称重记为M3，按公式丝素蛋白溶液浓度％＝(M3-Ml)/(M2-M1)*100％，取三者平均值，得出丝素蛋白浓度为1.5％；
步骤二：壳聚糖溶液的配制：
称取1.5gCS粉末，加入去离子水定容至100ml，再加入2ml冰乙酸溶液，得到浓度为1.5％的淡黄色粘稠度较高的CS溶液；
步骤三：海藻酸盐溶液的制备：
称取1.5g海藻酸钠，用蒸馏水配制成100ml溶液，在50℃恒温水浴下搅拌1.5h，配制浓度为1.5％的海藻酸钠溶液，于10℃环境静置脱泡24h，备用；
步骤四：丝素蛋白壳聚糖三维支架构建：
(1)交联支架
1)步骤一制得的丝素蛋白溶液、步骤二制得的壳聚糖溶液、步骤三制得的海藻酸盐溶液三者按照重量份配比为1:1:1进行混合并搅拌均匀；
2)继续浸入含50mmol/L的EDC、18mmol/LNHS的95％乙醇水溶液中；
3)于24孔培养板每孔加入1ml混合溶液，96孔培养板每孔加入200μl混合溶液，去除气泡，将培养板依次置于4℃冰箱交联24h，-20℃冰箱冷冻12h，-80℃冰箱冷冻12h，冷冻干燥机冷冻干燥72h，即可得到SF/CS三维多孔支架，Co60辐照灭菌，备用。
2.权利要求1所述的3D支架的制备方法，其特征在于，采用冷冻干燥法制成，所述3D支架的制备方法包括如下步骤：
步骤一：制备丝素蛋白溶液：
(1)取干净蚕茧壳剪成0.5-1cm2的碎片...
【专利技术属性】
技术研发人员：柯重伟，陈亮，苏献豪，韩善亮，洪亮，
申请(专利权)人：上海市第五人民医院，
类型：发明
国别省市：上海;31
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