一种具有光老化改善作用的胶原蛋白肽及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种具有光老化改善作用的胶原蛋白肽及其制备方法。其是将鳗鱼皮切碎、清洗后，先后用NaOH溶液和丁醇溶液浸泡去除非胶原蛋白及脂肪，再采用酸法+酶法共同萃取得到胶原蛋白，最后经体外模拟消化胶原蛋白，得到胶原蛋白肽粉末。本发明专利技术采用酸法+酶法复合的方法提取鱼皮中的胶原蛋白，其提取率达到80%以上，纯度达到85%以上，最终水解得到的胶原蛋白肽可改善由光老化引起的皮肤胶原蛋白流失等症状，有良好的美容护肤、延缓衰老的功效。

A kind of collagen peptide with photoaging effect and its preparation method

【技术实现步骤摘要】
一种具有光老化改善作用的胶原蛋白肽及其制备方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种具有光老化改善作用的鱼皮胶原蛋白肽及其制备方法。
技术介绍
光老化是由于紫外线反复照射所引起的一系列功能退化性变化。光老化对皮肤的影响主要表现在皮肤松弛、暗黄、皱纹、色素沉着等，严重者甚至可导致皮肤的恶性肿瘤。自然界存在许多可以抵御紫外线伤害的生物活性物质，如维生素及其衍生物、抗氧化酶、植物提取物如芦荟、燕麦和葡萄籽萃取物等，其主要通过清除或减少自由基及其中间产物，阻断或减缓组织损伤。因此，摄入生物活性物质能够从生理上阻止皮肤老化，且不会对机体造成损伤。胶原蛋白作为一种生物活性物质，因其低抗原性、高生物相容性以及高营养价值等特性，受到了生物医学方面的广泛关注。但胶原蛋白作为一种大分子蛋白质，不易被人体直接吸收，因此需要将其水解为更小的多肽和氨基酸。水解后的胶原蛋白能够被机体很好的吸收利用，吸收率可达100%，并可促进食物中其他蛋白质的吸收。有研究证明，Ⅰ型胶原蛋白水解产物经口服吸收后，可以特异性地富集于皮肤并被利用，食用胶原蛋白能够抑制紫外线辐射造成的皮肤水分含量降低、表皮细胞增生、胶原蛋白含量下降等有害变化。近年来，海洋水产来源的胶原蛋白由于其具有低抗原性、低过敏性等优良特性，且不受禽流感等畜禽疾病和宗教的影响，逐渐取代传统猪牛羊作为提取胶原蛋白的良好原料。鳗鱼广泛分布于我国沿海区域，具有较高的食用和药用价值。虽然我国的鳗鱼养殖业十分繁茂，但鳗鱼加工技术却很薄弱，加工率低，产品单一，实际生产加工过程中产生的鱼骨、鱼皮、鱼头、内脏等废弃物造成了大量的资源浪费。其中，鳗鱼皮可作为提取胶原蛋白的良好来源，同时可提升鳗鱼的附加价值。目前胶原蛋白的提取方法主要有酸法、酶法、碱法、热水法和盐法，各有其优缺点。单一的胶原蛋白提取方法无法满足生产需要，且得到的胶原蛋白肽的安全性及生物活性有待考证。因此，本专利技术提供了一种酸+酶法共同萃取的鳗鱼皮胶原蛋白的提取方法，所得胶原蛋白产物纯度高，胶原蛋白结构保持完整，利用体外消化模型水解得到的胶原蛋白肽不仅安全性高，而且对于皮肤光老化损伤具有良好的修复和改善作用，同时为鳗鱼皮的开发利用提供了新的思路。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术的不足，提供了一种酸法+酶法复合提取胶原蛋白的方法，并通过体外消化模型对鳗鱼皮胶原蛋白进行消化，得到对光老化具有皮肤改善作用的胶原蛋白肽。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种具有光老化改善作用的胶原蛋白肽，其制备方法包括以下步骤：（1）原料处理：将鳗鱼皮切割成大小约1cm2的碎片，加入冰水中，用磁力搅拌器清洗至溶液澄清；（2）去除非胶原蛋白：按料液比1:10g/mL将切碎后的鳗鱼皮用0.1mol/L的NaOH溶液浸泡48h，浸泡过程中每4~12h更换一次NaOH溶液；再用蒸馏水清洗鳗鱼皮至清洗液呈中性；（3）脱脂：按料液比1:10g/mL用体积浓度为10%的丁醇溶液再次浸泡鳗鱼皮48h，浸泡过程中每4~12h更换一次丁醇溶液；浸泡完成后，再次用蒸馏水清洗鳗鱼皮，直至清洗液无醇味且静置后无分层；（4）萃取：按料液比1:10-30g/mL将步骤（3）处理完的鳗鱼皮于0.5mol/L的醋酸溶液中浸泡18-30h期间用磁力搅拌器持续搅拌，浸泡完成后，离心取上清液保存于4℃冰箱，所得沉淀再按料液比1:10-30g/mL用0.5mol/L的醋酸溶液浸泡18-30h，浸泡完成后，离心取上清液，合并两次所得上清液并调pH至中性；再将剩余沉淀物按料液比1:10-30g/mL浸入0.5mol/L的醋酸溶液中并按20U/g的量加入胃蛋白酶，持续搅拌浸泡18-30h后，离心取上清液，调pH至中性；（5）盐析：将萃取得到的上清液合并，缓慢加入NaCl并不断搅拌，至NaCl终浓度达到2.6mol/L后离心，取沉淀物；（6）透析：离心所得沉淀物复溶于0.5mol/L的醋酸溶液中，先于0.1mol/L的醋酸溶液中透析24~48h，再用蒸馏水透析24~48h；透析时，每4~12h更换一次透析液；（7）冻干：透析完成后，将透析袋内溶液冷冻干燥，得到鳗鱼皮胶原蛋白；（8）消化：模拟人体胃肠道消化环境建立体外消化模型消化鳗鱼皮胶原蛋白，然后将混合液于90℃下加热10min终止消化，再于4℃、12000g条件下离心20min，得到胶原蛋白肽混合液，用截留分子量为3000Da的超滤膜进行超滤后，将其冷冻干燥，得到小分子量的胶原蛋白肽。步骤（4）所述离心是以15000g处理15min。步骤（5）所述离心是以15000g处理15~30min。步骤（1）~（6）均在4℃下完成。步骤（8）所述消化具体是按照食物在人体口腔、胃、小肠的消化过程，在37±2℃下，分别以人工唾液、人工胃液及人工肠液为消化液对鳗鱼皮胶原蛋白进行处理；其中，每3g鳗鱼皮胶原蛋白使用50mL人工唾液、100mL人工胃液及150mL人工肠液。本专利技术的优点和积极效果在于：1.本专利技术将酸法与酶法结合进行胶原蛋白的提取，可极大限度地将胶原蛋白从鳗鱼皮中提取出来，其提取率达到80%以上，纯度达到85%以上；2.本专利技术通过模拟人体完整消化过程，消化胶原蛋白得到胶原蛋白肽，所得产物更加安全3.根据本专利技术方法生产的胶原蛋白肽，抗氧化效果显著，对于由光老化造成的皮肤胶原蛋白及水分流失等损伤具有优良的改善作用，有利于延缓衰老，有极大的商业生产价值。附图说明图1为实施例1所得胶原蛋白的SDS-PAGE凝胶电泳图；图2为实施例1所得胶原蛋白的紫外吸收光谱图；图3为实施例1所得胶原蛋白的傅立叶变换红外吸收光谱图；图4为不同处理对小鼠脏器指数的影响；图5为不同处理对光老化小鼠皮肤含水量的影响；图6为不同处理对光老化小鼠皮肤中羟脯氨酸含量的影响；图7为不同处理对小鼠皮肤中抗氧化酶活力的影响；图8为不同处理对小鼠皮肤中MDA含量的影响；图9为不同处理后小鼠背部皮肤组织的形态学变化。具体实施方式为了使本专利技术所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本专利技术所述的技术方案做进一步的说明，但是本专利技术不仅限于此。实施例1一种具有光老化改善作用的胶原蛋白肽，其制备方法包括以下步骤：（1）原料处理：将鳗鱼皮上残余的鱼肉刮去，切割成大小约1cm2的碎片，加入冰水中，用磁力搅拌器反复搅拌清洗，并更换冰水，至溶液变澄清；（2）去除非胶原蛋白：按料液比1:10g/mL将切碎后的鳗鱼皮用0.1mol/L的NaOH溶液浸泡48h，浸泡过程中每12h更换一次NaOH溶液（在第一次浸泡鳗鱼皮溶胀后，将鳗鱼皮再次切碎，以提高浸泡效果）；再用蒸馏水清洗鳗鱼皮至清洗液呈中性；（3）脱脂：按料液比1:10g/mL用体积浓度为10%的丁醇溶液再次浸泡鳗鱼皮48h，浸泡过程中每12h更换一次丁醇溶液；浸泡完成后本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有光老化改善作用的胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/n（1）原料处理：将鳗鱼皮切割成大小为1cm

【技术特征摘要】
1.一种具有光老化改善作用的胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）原料处理：将鳗鱼皮切割成大小为1cm2的碎片，加入冰水中，用磁力搅拌器清洗至溶液澄清；
（2）去除非胶原蛋白：将切碎后的鳗鱼皮用NaOH溶液浸泡48h，再用蒸馏水清洗鳗鱼皮至清洗液呈中性；
（3）脱脂：用丁醇溶液再次浸泡鳗鱼皮48h；浸泡完成后，再次用蒸馏水清洗鳗鱼皮，直至清洗液无醇味且静置后无分层；
（4）萃取：将步骤（3）处理完的鳗鱼皮浸入醋酸溶液中，期间用磁力搅拌器持续搅拌，浸泡完成后，离心取上清液，所得沉淀再次于醋酸溶液中进行浸泡，离心后合并两次所得上清液，并调pH至中性；所得剩余沉淀物浸入醋酸溶液中并加入胃蛋白酶，持续搅拌后，离心取上清液，调pH至中性；
（5）盐析：将萃取得到的上清液合并，缓慢加入NaCl并不断搅拌，至NaCl终浓度达到2.6mol/L后离心，取沉淀物；
（6）透析：离心所得沉淀物复溶于0.5mol/L的醋酸溶液中，先于0.1mol/L的醋酸溶液中透析，再用蒸馏水透析；
（7）冻干：透析完成后，将透析袋内溶液冷冻干燥，得到鳗鱼皮胶原蛋白；
（8）消化：模拟人体胃肠道消化环境建立体外消化模型消化鳗鱼皮胶原蛋白，然后将混合液于90℃下加热10min终止消化，再于4℃、12000g条件下离心20min，得到胶原蛋白肽混合液，利用超滤膜进行分级分离后，冷冻干燥，得到小分子量的胶原蛋白肽。


2.根据权利要求1所述的一种具有光老化改善作用的胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所用NaOH溶液的浓度为0.1mol/L，鳗鱼皮与NaOH溶液的料液比为1:10g/mL，浸泡过程中每4~12h更换一次NaOH溶液。

【专利技术属性】
技术研发人员：张宁宁，郑雨婷，毛极仁，王睿，陈静，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：福建;35