一种过表达胆盐水解酶的重组菌及其构建方法技术

一种过表达胆盐水解酶的重组菌及其构建方法，属于基因工程技术领域。为了解决目前缺乏有效的非药物途径限制饮食过程中胆固醇的摄入量，本发明专利技术提供了一种过表达胆盐水解酶的重组菌及其构建方法。本发明专利技术所述的降血脂的重组菌是在乳酸乳球菌感受态细胞中过表达胆盐水解酶基因，所述胆盐水解酶基因为来源于嗜酸乳杆菌NCFM。对本发明专利技术所获得的重组菌进行诱导表达试验，通过SDS‑PAGE电泳验证，能够获得重组胆盐水解酶蛋白的成功表达。

A recombinant strain overexpression of bile salt hydrolytic enzyme and its construction method

【技术实现步骤摘要】
一种过表达胆盐水解酶的重组菌及其构建方法
本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种过表达胆盐水解酶的重组菌及其构建方法。
技术介绍
近年来，不合理的膳食结构逐步导致了人们体内胆固醇含量过量堆积，胆固醇过量堆积将导致冠心病、高血脂症、动脉粥样硬化以及其它心血管疾病。流行病研究表明，我国人群中心脑血管病的患病率、发病率呈不断上升趋势，1992年心脑血管病死亡率占世界人口死亡总数的25％，居各种死因之首。1996年为29％，1999年已达33％。目前，我国这一比例已高达40％，全国每年心脑血管及相关疾病死亡的人数已达200万人，可以说心脑血管病已成为人类第一杀手，而高血脂正是诱发心脑血管病的重要因素之一。对高胆固醇的人来说，降低胆固醇水平意味着减少心脏疾病发生的风险。人体内血清胆固醇的70％为内源合成，其余30％为膳食胆固醇。目前研究认为人体内胆固醇的合成速度受膳食胆固醇的影响很大。因此，人们尤其希望通过非药物途径限制饮食过程中胆固醇的含量。国内外大量临床实验证实，服用乳酸菌及其相关制品具有减少人体血清胆固醇含量，降低心血管疾病发病率的功本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种过表达胆盐水解酶的重组菌，其特征在于，所述重组菌过表达胆盐水解酶基因，宿主菌为乳酸乳球菌。/n

【技术特征摘要】
1.一种过表达胆盐水解酶的重组菌，其特征在于，所述重组菌过表达胆盐水解酶基因，宿主菌为乳酸乳球菌。


2.根据权利要求1所述的过表达胆盐水解酶的重组菌，其特征在于，所述胆盐水解酶基因为来源于嗜酸乳杆菌NCFM，序列如SEQIDNO.1或SEQIDNO.2所示。


3.一种权利要求1所述的过表达胆盐水解酶的重组菌的构建方法，其特征在于，步骤如下：
(1)根据胆盐水解酶基因序列设计引物对；
(2)对嗜酸乳杆菌NCFM进行基因组DNA的提取；
(3)以步骤(2)提取的DNA为模板，步骤(1)所述引物对进行PCR扩增，获得PCR产物；
(4)将步骤(3)获得的PCR产物与克隆载体进行连接，筛选获得含有胆盐水解酶基因的克隆载体；
(5)使用限制性内切酶对步骤(4)的克隆载体进行酶切，获得含有胆盐水解酶基因的DNA酶切片段，然后与经具有相同酶切位点的限制性内切酶双酶切的表达载体pNZ8148进行连接，获得含有胆盐水解酶基因的表达载体；...

【专利技术属性】
技术研发人员：张微，姜毓君，满朝新，何洋，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙;23