一种大规模培养CHO细胞以制备乙型肝炎疫苗的方法技术

本发明专利技术公开了一种大规模培养CHO细胞以制备乙型肝炎疫苗的方法。该方法包括细胞重组、细胞增殖、灌流培养、对收获的培养液进行浓缩富集、纯化、纯化液加入甲醛处理、半成品配制以及半成品经分装后获得成品。其中灌流培养具体是：当细胞密度增殖到2×10

A method of preparing hepatitis B vaccine by culturing CHO cells in large scale

【技术实现步骤摘要】
一种大规模培养CHO细胞以制备乙型肝炎疫苗的方法
本专利技术涉及了疫苗制作领域，具体的是一种大规模培养CHO细胞以制备乙型肝炎疫苗的方法。
技术介绍
现有乙肝疫苗有酵母乙肝疫苗和CHO细胞乙肝疫苗两种。两种疫苗都是利用现代生物技术进行的基因重组生物制品。酵母重组乙肝疫苗是一种包含有HBsAg亚单位疫苗，是利用现代生物学技术将HBsAg基因克隆至酵母中，通过培养重组酵母来表达乙肝表面抗原。酵母系统虽然有表达量高成本低的优势，但是存在表达系统产生的HBsAg无糖基化的缺点，同时不能外分泌，产物的分离纯化比较困难。CHO细胞乙肝疫苗是将HBsAg基因克隆至CHO细胞中，通过培养重组CHO细胞来表达乙肝表面抗原。其表达产生的HBsAg更接近天然的HBsAg，产物的分离纯化也比较简单。但哺乳动物细胞对培养条件的要求都很高，现有的生产工艺是利用转瓶进行的培养工艺，存在效率低、成本高、容易污染的风险。
技术实现思路
为了克服现有技术中的缺陷，本专利技术实施例提供了一种大规模培养CHO细胞以制备乙型肝炎疫苗的方法，所述方法包本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种大规模培养CHO细胞以制备乙型肝炎疫苗的方法，所述方法包括以下步骤,/nS1.细胞重组：提供带有HBsAg抗原序列的重组CHO细胞，并在培养环境温度为35℃～38℃的情况下对所述重组CHO细胞进行传代递增，培养时间为2天-6天，培养方式为贴壁培养或者悬浮培养；/nS2.细胞增殖：将所述重组CHO细胞按1×10

【技术特征摘要】
1.一种大规模培养CHO细胞以制备乙型肝炎疫苗的方法，所述方法包括以下步骤,
S1.细胞重组：提供带有HBsAg抗原序列的重组CHO细胞，并在培养环境温度为35℃～38℃的情况下对所述重组CHO细胞进行传代递增，培养时间为2天-6天，培养方式为贴壁培养或者悬浮培养；
S2.细胞增殖：将所述重组CHO细胞按1×105～1×106cells/ml的浓度转入生物反应器继续进行培养，重组CHO细胞生物反应器继续增殖，培养条件为温度35℃～38℃，溶氧量30％～90％，pH值6.8～7.4；
S3.灌流培养：当细胞密度增殖到2×106cells/ml以上时，更换维持液进行灌流培养，培养条件为温度30℃～38℃，溶氧量30％～90％，pH值7.0～7.6，灌流培养时，不断补充新的维持液，同时收集细胞培养液；
S4.培养液浓缩：对收获的培养液进行浓缩富集，获得收获液；
S5.收获液纯化：对收获液进行纯化，获得纯化液；
S6.纯化液加入甲醛处理：将甲醛加入至纯化液中并充分混合，保持温度为2℃～37℃，处理时间为72-120小时，再经超滤、浓缩、除菌过滤获得HBsAg抗原液；
S7.半成品配制：首先将HBsAg抗原原液液经适当稀释，然后加入氢氧化铝获得半成品；
S8.半成品经分装后，获得成品，每次人用剂量为0.5ml或1.0ml，含HBsAg10μg或20μg。


2.根据权利要求1所述的大规模...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵永强，
申请(专利权)人：苏州百奥思达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32