莴苣花叶病毒纳米酶免疫层析试纸条的制备方法和检测方法技术

本发明专利技术公开莴苣花叶病毒纳米酶免疫层析试纸条的制备方法，在PVC底板上依次贴上吸水垫、硝酸纤维素膜和玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜在吸水垫和玻璃纤维膜之间；利用XYZ三维划膜喷金仪在空白试纸条的硝酸纤维素膜表面分别喷上C线和T线，并在37℃烘箱中烘干；C线为羊抗兔IgG抗体线；T线为兔抗莴苣花叶病毒LMV的IgG抗体线；将PVC盖板放置到PCV底板上，PVC盖板上设有显色窗孔和加样孔；C线和T线在所述显色窗孔内，T线与所述加样孔的距离小于所述C线与所述加样孔的距离。该方法有相对较高的灵敏度、良好的特异性、价格低廉、检测时间短、操作简单等优点，适合莴苣花叶病毒的口岸现场快速检测。该方法的建立为LMV的快速检测提供了一种新的方法。

Preparation and detection of immunochromatographic test strip of Lettuce mosaic virus

【技术实现步骤摘要】
莴苣花叶病毒纳米酶免疫层析试纸条的制备方法和检测方法
本专利技术涉及纳米酶免疫层析
具体地说是莴苣花叶病毒纳米酶免疫层析试纸条的制备方法和检测方法。
技术介绍
莴苣(Lactucasativa)又称生菜、鹅仔菜等，为菊科莴苣属1年或2年生草本植物，是生活中常见的一种蔬菜。莴苣易受病毒危害，侵染莴苣的病毒主要有莴苣花叶病毒(Lettucemosaicvirus,LMV)、蒲公英黄花叶病毒(Dandelionyellowmosaicvirus,DaYMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumbermosaicvirus,CMV)和番茄不孕病毒(Tomatoaspermyvirus,TAV)等病毒。这些病毒可单独侵染危害，也可两种或两种以上复合侵染。莴苣特别容易受到LMV侵染，侵染初期，叶片边缘出现不规则及皱缩症状，继而出现淡绿色或淡黄色斑驳或者花叶症状；最终可导致莴苣矮化、结籽率下降，严重降低莴苣的产量及营养价值。LMV可由桃蚜进行传毒，也可通过种子进行远距离传播，导致LMV在世界各地均有分布，包括欧洲、南美、西印度群岛、中东、亚洲、和大洋洲的各个国本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.莴苣花叶病毒纳米酶免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1-1)在PVC底板(1)上依次贴上吸水垫(2)、硝酸纤维素膜(3)和玻璃纤维膜(4)，硝酸纤维素膜(3)在吸水垫(2)和玻璃纤维膜(4)之间，且硝酸纤维素膜(3)的两端分别与吸水垫(2)和玻璃纤维膜(4)搭接，制成空白试纸条；/n(1-2)利用XYZ三维划膜喷金仪在空白试纸条的硝酸纤维素膜(3)表面分别喷上C线和T线，并在37℃烘箱中烘干；所述C线为羊抗兔IgG抗体线；所述T线为兔抗莴苣花叶病毒LMV的IgG抗体线；/n(1-3)将PVC盖板(5)放置到步骤(1-2)中的PCV底板上，所述PVC盖板(5)上设有显...

【技术特征摘要】
20190703 CN 20191059399641.莴苣花叶病毒纳米酶免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1-1)在PVC底板(1)上依次贴上吸水垫(2)、硝酸纤维素膜(3)和玻璃纤维膜(4)，硝酸纤维素膜(3)在吸水垫(2)和玻璃纤维膜(4)之间，且硝酸纤维素膜(3)的两端分别与吸水垫(2)和玻璃纤维膜(4)搭接，制成空白试纸条；
(1-2)利用XYZ三维划膜喷金仪在空白试纸条的硝酸纤维素膜(3)表面分别喷上C线和T线，并在37℃烘箱中烘干；所述C线为羊抗兔IgG抗体线；所述T线为兔抗莴苣花叶病毒LMV的IgG抗体线；
(1-3)将PVC盖板(5)放置到步骤(1-2)中的PCV底板上，所述PVC盖板(5)上设有显色窗孔(5-1)和加样孔(5-2)；所述显色窗孔(5-1)正对着硝酸纤维素膜(3)，所述C线和T线在所述显色窗孔(5-1)内，所述T线与所述加样孔(5-2)的距离小于所述C线与所述加样孔(5-2)的距离。


2.根据权利要求1所述的莴苣花叶病毒纳米酶免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，
在步骤(1-1)中：在长度为6cm的PVC底板(1)上依次贴上长度为2cm的吸水垫(2)、长度为2.5cm的硝酸纤维素膜(3)和长度为1.5cm的玻璃纤维膜(4)，制成空白试纸条；
在步骤(1-2)中：所述C线和T线的宽度均为1mm；
在步骤(1-3)中：所述加样孔(5-2)正对玻璃纤维膜(4)。


3.利用莴苣花叶病毒纳米酶免疫层析试纸条检测莴苣花叶病毒的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(2-1)待测样品的制备；
(2-2)兔抗莴苣花叶病毒LMV的IgG抗体与纳米酶颗粒的偶联；
(2-3)利用权利要求1-2任一所制备的莴苣花叶病毒纳米酶免疫层析试纸条对待测样品进行检测。


4.根据权利要求3所述的利用莴苣花叶病毒纳米酶免疫层析试纸条检测莴苣花叶病毒的方法，其特征在于，在步骤(2-1)中：向0.1g待测样品中加入5mL的1％BSA-PBS溶液并充分研磨；5500r/min离心20min，取上清；再次离心20min，取上清，-20℃冷冻保存备用；所述1％BSA-PBS的溶液制备方法为：将质量为1g的牛血清蛋白BSA，溶于100mL磷酸缓冲溶液PBS，所述磷酸缓冲溶液的pH为7.4，所述磷酸缓冲溶液的摩尔浓度为10mmol/L。


5.根据权利要求3所述的利用莴苣花叶病毒纳米酶免疫层析试纸条检测莴苣花叶病毒的方法，其特征在于，在步骤(2-2)中，包括如下步骤：
(2-2-1)配制1mL活化剂，所述活化剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺EDC和N-羟基琥珀酰亚胺NHS的混合物，且所述EDC和NHS的物质的量之比为1:1；
(2-2-2)向步骤(2-2-1)的活化剂中加入纳米酶5mg，涡旋振荡，放置在静音混合器中充分反应30min；
(2-2-3)将100μg的兔抗莴苣花叶病毒LMV的IgG抗体与450μL醋酸钠溶液混合后加入至步骤(2-2-2)的活化后的纳米酶溶液中，振荡混匀，置于4℃旋转混匀仪孵育过夜；所述醋酸钠溶液的pH为6.0，所述醋酸钠溶液的摩尔浓度为5...

【专利技术属性】
技术研发人员：张永江，符娜，刘键，魏梅生，段德民，向均，
申请(专利权)人：中国检验检疫科学研究院，
类型：发明
国别省市：北京;11