一种基于幼叶的圆叶牛樟染色体核型分析方法技术

本发明专利技术公开了一种基于幼叶的圆叶牛樟染色体核型分析方法，包括以下步骤：取材：在晴朗的上午采集牛樟幼叶；预处理:幼叶置于饱和对二甲苯溶液中预处理，固定与保存；染色体标本制备：采用酶解去壁低渗法，经固定、前低渗、酶解、后低渗、涂片获得较佳的染色体标本；染色:吉姆萨染色；镜检；该方法简单易操作，适用于原位PCR、FISH操作的圆叶牛樟染色体核型分析方法，为牛樟细胞学研究提供技术基础。本发明专利技术首次报道了圆叶牛樟的染色体核型分析方法和核型，表明圆叶牛樟有24条染色体，核型公式为2n＝2x＝24＝22m+2sm，核型不对称系数55.451％，核型对称程度较高，这表明圆叶牛樟可能进化程度低，属于比较原始的古老的物种。为牛樟的起源，演化及遗传育种提供一定理论依据。

A karyotype analysis method of camphor based on young leaves

【技术实现步骤摘要】
一种基于幼叶的圆叶牛樟染色体核型分析方法
本专利技术涉及一种基于幼叶的圆叶牛樟染色体核型分析方法，属于树木细胞学研究技术的领域。
技术介绍
牛樟(CinnamomumKanehiraeHay)隶属于樟科樟属，又名黑樟，为台湾本土特有常绿阔叶树种。牛樟具有很高的经济价值，根、茎、叶全株可提炼牛樟精油，木材是雕刻家具的上等材料。此外，牛樟是牛樟芝(Antrodiacamphorata)的唯一宿主，牛樟芝在医学上被称为“药芝之王”，常用来醒酒与缓解疲劳，具有免疫调节、保护肝脏等作用。目前，国内外学者对牛樟的研究主要集中组培快繁、扦插、引种和遗传多态性上等方面，但在细胞遗传学上的研究至今仍旧是空白的，牛樟的基础研究非常薄弱。染色体核型分析主要通过研究其染色体数目及形态特征，反映不同物种或品种之间存在的染色体细胞学差异。不同物种的染色体核型模式在进化的过程中不受外界环境因素干扰和影响，在一定程度上反馈出了其进化的基本特征。因此，植物核型的研究不仅能为种间遗传变异、系统演化以及亲缘关系提供证据，而且还可以为杂交育种选育及杂种后代鉴定等提供理论依据。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于幼叶的圆叶牛樟染色体核型分析方法，其特征在于：所述的分析方法具体步骤如下：/nS1:取材/n在晴朗的上午9：00-11:00采集牛樟幼叶；/nS2：预处理/n把刚采集的叶片迅速投入饱和对二甲苯溶液中预处理；/nS3:固定与保存/n倒掉预处理液，叶片清水冲洗后转入卡诺固定液，在黑暗4℃环境下固定24h，移弃固定液，直接用来染色体制片；/nS4:染色体标本制备/n(1)前低渗:把步骤S3固定的幼叶置于蒸馏水中进行前低渗30min；/n(2)酶解:把步骤(1)的幼叶置于盛有5％纤维素酶和4％果胶酶混合液的1ml离心管中，并置于37℃的恒温水浴锅中酶解；/n(3)后低渗:吸取酶液，缓缓地沿...

【技术特征摘要】
1.一种基于幼叶的圆叶牛樟染色体核型分析方法，其特征在于：所述的分析方法具体步骤如下：
S1:取材
在晴朗的上午9：00-11:00采集牛樟幼叶；
S2：预处理
把刚采集的叶片迅速投入饱和对二甲苯溶液中预处理；
S3:固定与保存
倒掉预处理液，叶片清水冲洗后转入卡诺固定液，在黑暗4℃环境下固定24h，移弃固定液，直接用来染色体制片；
S4:染色体标本制备
(1)前低渗:把步骤S3固定的幼叶置于蒸馏水中进行前低渗30min；
(2)酶解:把步骤(1)的幼叶置于盛有5％纤维素酶和4％果胶酶混合液的1ml离心管中，并置于37℃的恒温水浴锅中酶解；
(3)后低渗:吸取酶液，缓缓地沿着管壁加入蒸馏水，后低渗30min；
(4)后固定:吸取蒸馏水，滴加临时配制的固定液：乙醇：冰醋酸＝3：1后，固定15min；
(5)涂片：把玻片、临时配制的固定液均置于冰面上，取一张玻片，先滴3滴固定液，再夹取1片幼叶置于玻片上，用解剖针挑取边缘的分生组织，并迅速捣碎再均匀涂抹在载玻片上，再从一端滴加一滴固定液使细胞扩散，接着在火焰上迅速烘烤，自然风干；
S5:染色
将缓冲液与吉姆萨原液按比例制成工作液，再把干燥的制片置于吉姆萨染色液中染色10-20min，，清水冲洗干净，置烘箱37度烘干；
S6:镜检
用POTIKA正立显微镜观察，OptikaVisionpro拍照系统拍照，在40X物镜下对单位视野面积内处于分裂中期的细胞进行计数，选择30个染色体分散且形态较好的细胞进行染色体数目统计，选取...

【专利技术属性】
技术研发人员：官锦燕，罗青文，文明富，谭嘉娜，罗剑飘，黄海英，
申请(专利权)人：广州甘蔗糖业研究所湛江甘蔗研究中心，
类型：发明
国别省市：广东;44