同时测定水样中五类抗生素残留量的方法技术

本发明专利技术公开了一种同时测定水样中五类抗生素残留量的方法。所述方法包括如下步骤：待测水样预处理、对预处理水样进行富集和净化处理、将经富集处理待测水样进行浓缩处理、将浓缩待测样品配制成抗生素待测液和将抗生素待测液进行上机检测等步骤。本发明专利技术同时测定水样中五类抗生素残留量的方法能够一次对五类抗生素残留量进行定量分析，其检测效率高，检出限和定量限较低，灵敏度高，可以检出水样中残留的痕量抗生素种类及其含量。另外，本发明专利技术方法的回收率高，且重复性好，有很好的应用前景。

Simultaneous determination of five antibiotic residues in water samples

【技术实现步骤摘要】
同时测定水样中五类抗生素残留量的方法
本专利技术属于分析
，具体涉及一种同时测定水样中五类抗生素残留量的方法。
技术介绍
抗生素被广泛应用于人、畜疾病治疗及日常防治中。在中国近代的快速集约化发展过程中，人用和兽用抗生素滥用情况均非常严重，其引起的负面影响已不容忽视。研究表明，抗生素的生物利用率仅为10％-60％，致使大量抗生素以母体及其代谢产物的形式进入到非生物环境中。此外，居民区、药厂、医院和养殖场等固、液废弃物的大量排放，使得抗生素持续大量地进入地表环境，最终导致抗生素成为了环境中新型假持久性有机污染物。随着分析化学检测技术的快速深入发展，从各类自然水体到城市饮用水均被检出了抗生素。因此建立一个高效地同时检测水样如河水中多种抗生素的分析方法是研究抗生素在环境中转归并对其进行风险评估的重要基础。目前，抗生素的检测方法主要有微生物和生物分析方法、酶联免疫法、电化学传感器法、液相色谱法和液相色谱-串联质谱法等。其中，微生物和生物分析方法、酶联免疫法特异性不高，灵敏度较差；电化学传感器法无法实现多种抗生素同时检测，且检测程序较难摸索；液相色谱法存在检测抗生素种类受限制、检出限高等缺点；超高效液相色谱-串联质谱法虽然成为抗生素残留检测分析的一个重要趋势，成为对水样如河水中抗生素残留的检测方法主要的检测分析方法，并可以达到同时检测多种抗生素的目标，但现有方法耗时较长，灵敏度不够。而且由于不同种类抗生素物理化学性质的差异，以及提取和净化过程的特异性、基质复杂性等，以往的研究报道多数是关于单一类别抗生素或少数几个抗生素的检测方法，不能适用于样品快速筛查分析，有一定的局限性。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种同时测定水样中五类抗生素残留量的方法，以克服现有高效液相色谱-串联质谱法检测抗生素残留量存在的耗时较长、灵敏度不够和种类受限的技术问题。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了一种同时测定水样中五类抗生素残留量的方法。所述同时测定水样中五类抗生素残留量的方法包括如下步骤：将待测水样进行过滤处理，再将pH调至3.8-4.0，然后添加络合剂，配制成预处理水样；将所述预处理水样进行固相萃取处理，再对所述固相萃取处理的固相进行洗脱处理，得到含抗生素的洗脱液；将所述洗脱液进行浓缩处理，得到含抗生素的浓缩待测样品；将所述浓缩待测样品采用初始流动相进行定容处理，得到定容样品溶液，再对所述定容样品溶液进行过滤处理，接着添加同位素内标物，得到抗生素待测液；利用超高效液相色谱串联质谱对所述抗生素待测液进行抗生素的检测分析处理。与现有检测技术相比，本专利技术同时测定水样中五类抗生素残留量的方法能够一次对五类抗生素残留量进行定量分析，其检测效率高，检出限和定量限较低，灵敏度高，可以检出水样中残留的痕量抗生素种类及其含量。另外，本专利技术方法的回收率高(60.34％-119.67％)，且重复性好，有很好的应用前景。附图说明图1为本专利技术实施例快速检测同时测定水样中五类抗生素残留量方法的工艺流程示意图；图2为100μg/L浓度条件下24种抗生素混合标准品的总离子流图；图3为100μg/L浓度条件下24种抗生素混合标准品中所有抗生素的MRM图；图4为加标浓度为100ng/L河水中各抗生素的回收率。具体实施方式为了使本专利技术要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。除非另外定义，否则本文使用的所有技术术语和科学术语具有与本专利技术实施例所属
普通技术人员通常理解相同的含义。如果此部分中陈述的定义与通过引用纳入本文的所述专利、专利申请、公布的专利申请和其他出版物中陈述的定义相反或其他方面不一致，此部分中列出的定义优先于通过引用纳入本文中的定义。本专利技术实施例提供一种同时测定水样中五类抗生素残留量的方法。所述同时测定水样中五类抗生素残留量的方法包括如下步骤：S01.待测水样预处理：将待测水样进行过滤处理，再将pH调至3.8-4.0，然后添加络合剂，配制成预处理水样；S02.对预处理水样进行富集和净化处理：将所述预处理水样进行固相萃取处理，再对所述固相萃取处理的固相进行净化处理和洗脱处理，得到含抗生素的洗脱液；S03.将经富集处理的测水样进行浓缩处理：将所述洗脱液进行浓缩处理，得到含抗生素的浓缩待测样品；S04.将浓缩待测样品配制成抗生素待测液：将所述浓缩待测样品采用初始流动相进行定容处理，得到定容样品溶液，再对所述定容样品溶液进行过滤处理，接着添加同位素内标物，得到抗生素待测液；S05.将抗生素待测液进行上机检测：利用超高效液相色谱串联质谱对所述抗生素待测液进行抗生素的检测分析处理。其中，所述步骤S01中，对待测水样进行过滤处理是为了除去水样中如颗粒型杂质，因此，在一实施例中，将所述待测水样进行过滤处理的方法是将所述待测水样过0.45μm玻璃纤维滤膜过滤处理。在步骤S01中向经过滤处理后的待测水样的pH调至3.8-4.0后添加络合剂，以使得络合剂与所述待测水样中的可能存在的金属阳离子进行络合处理，从而防止因所述待测水样中可能存在的金属阳离子与所述待测水样中可能存在的抗生素发生络合反应而降低了目标抗生素的检出率。另外，所述待测水样的pH调可以根据所测抗生素的pKa而定，且经专利技术人实验得知，固相萃取处理中的固相如HLB柱在pH为4左右吸附效果最好。因此，在一实施例中，所述络合剂是按照所述络合剂饱和溶液与所述待测水样的体积比为10:(500-1000)具体的如0.5：500的比例进行添加。其中，络合剂可以是以络合剂溶液的方式加入，具体的如但不仅仅为5％v/v。在另一实施例中，所述络合剂可以是Na2-EDTA络合剂。所述步骤S02中，将步骤S01中配制成预处理水样进行固相萃取处理，实现对所述预处理水样中的抗生素进行富集处理。在一实施例中，所述固相萃取处理是将所述预处理水样通过经活化处理的HLB固相萃取柱。这样，所述预处理水样中可能含的抗生素会被有效富集在固相如HLB固相萃取柱中。在一具体实施例中，所述HLB固相萃取柱的所述活化处理包括如下步骤：先用甲醇通过HLB固相萃取柱，再用超纯水两次通过HLB固相萃取柱，之后抽真空干燥处理；具体如采用5mL甲醇自然过HLB固相萃取柱，再用10mL超纯水自然过HLB固相萃取柱。其中，在具体实施例中，所述HLB固相萃取柱可以选用WatersOasisHLB固相萃取小柱，规格为6mL/500mg。在另一实施例中，在将所述预处理水样进行固相萃取处理过程中，控制所述预处理水样通过固相的流速为2-3mL/min。具体的如控制所述预处理水样通过所述HLB固相萃取柱的流速为2-3mL/min。另一实施例中，所述净化处理是使用0％v/v-25％v/v具体如5％v/v甲醇溶液对经所述固相萃取处本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种同时测定水样中五类抗生素残留量的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n将待测水样进行过滤处理，再将pH调至3.8-4.0，然后添加络合剂，配制成预处理水样；/n将所述预处理水样进行固相萃取处理，再对所述固相萃取处理的固相进行净化处理和洗脱处理，得到含抗生素的洗脱液；/n将所述洗脱液进行浓缩处理，得到含抗生素的浓缩待测样品；/n将所述浓缩待测样品采用初始流动相进行定容处理，得到定容样品溶液，再对所述定容样品溶液进行过滤处理，接着添加确定含量的同位素内标物，得到抗生素待测液；/n利用超高效液相色谱串联质谱对所述抗生素待测液进行抗生素的检测分析处理。/n

【技术特征摘要】
1.一种同时测定水样中五类抗生素残留量的方法，其特征在于，包括如下步骤：
将待测水样进行过滤处理，再将pH调至3.8-4.0，然后添加络合剂，配制成预处理水样；
将所述预处理水样进行固相萃取处理，再对所述固相萃取处理的固相进行净化处理和洗脱处理，得到含抗生素的洗脱液；
将所述洗脱液进行浓缩处理，得到含抗生素的浓缩待测样品；
将所述浓缩待测样品采用初始流动相进行定容处理，得到定容样品溶液，再对所述定容样品溶液进行过滤处理，接着添加确定含量的同位素内标物，得到抗生素待测液；
利用超高效液相色谱串联质谱对所述抗生素待测液进行抗生素的检测分析处理。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述五类抗生素为四环素类抗生素、磺胺类抗生素、氟喹诺酮类抗生素、大环内酯类抗生素和β-内酰胺类抗生素。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述四环素类抗生素包括盐酸四环素、盐酸金霉素、盐酸土霉素中的至少一种；
所述磺胺类抗生素包括磺胺甲噁唑、磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺噻唑、磺胺二甲异噁唑、磺胺甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪中的至少一种；
所述氟喹诺酮类抗生素包括诺氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星中的至少一种；
所述大环内酯类抗生素包括泰乐菌素；
所述β-内酰胺类抗生素包括阿莫西林、氨苄西林、头孢氨苄、头孢匹林、头孢唑啉、头孢噻呋、哌拉西林、青霉素G钾、青霉素V钾、双氯西林中的至少一种。


4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于：将所述待测水样进行过滤处理是将所述待测水样过0.45μm玻璃纤维滤膜过滤处理；和/或
所述络合剂为Na2-EDTA络合剂；
所述络合剂是按照所述络合剂饱和溶液与所述待测水样的体积比为10：(500-1000)的比例进行添加；和/或
所述将pH调至3.8-4.0的溶液为稀磷酸溶液。


5.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于：所述固相萃取处理是将所述预处理水样通过经活化处理的HLB固相萃取柱；
所述净化处理...

【专利技术属性】
技术研发人员：章程，刘崇炫，张丽丽，连柯汀，
申请(专利权)人：南方科技大学，
类型：发明
国别省市：广东;44