一种放线菌抗菌次生代谢产物的制备方法技术

本发明专利技术提供一种放线菌抗菌次生代谢产物的制备方法，涉及微生物技术领域，所述方法首先将产抗菌次生代谢产物的放线菌接种于液体培养基中培养，得到菌体发酵液；所述液体培养基的原料包括酵母提取物、葡萄糖和麦芽提取物和水；所得菌体发酵液接种于固体培养基发酵，得到活性发酵产物；所述固体培养基的原料包括介质支持物、酵母膏和蛋白胨和水；以乙酸乙酯浸提所述活性发酵产物，固液分离得到乙酸乙酯提取物，去除乙酸乙酯，得到放线菌抗菌次生代谢产物。本发明专利技术提供的制备方法能够明显增加放线菌抗菌次生代谢产物的积累，提高代谢产量；相对于单纯的液态发酵放线菌而言能耗低，发酵过程无需持续通入氧气。

A preparation method of antimicrobial secondary metabolites of Actinomycetes

【技术实现步骤摘要】
一种放线菌抗菌次生代谢产物的制备方法
本专利技术涉及微生物
，尤其涉及一种放线菌抗菌次生代谢产物的制备方法。
技术介绍
放线菌抗菌活性次生代谢物的发酵通常是用一定的液体培养基进行液态发酵，实验室里一般用三角瓶在摇床里进行发酵，抗菌活性产物在发酵液中积累，通过一定的提纯手段将活性产物提取出来。一般情况下，发酵液中所能积累的活性产物的量非常少，由于发酵液中活性成分的浓度非常低，由于后续的提纯过程对活性成分损失比较大，有些含量低的活性成分无法被分离出来。因此，目前缺乏一种能够快速大量提取放线菌所产抗菌活性次生代谢产物的方法。
技术实现思路
本专利技术为了克服现有放线菌抗菌活性次生代谢产物的方法产量低、分离难度大、能耗高的缺陷，提供了一种放线菌抗菌次生代谢产物的制备方法，所得抗菌次生代谢产物量可提高10倍以上，并且能耗低、产率高。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种放线菌抗菌次生代谢产物的制备方法，包括以下步骤：(1)将产抗菌次生代谢产物的放线菌接种于液体培养基中培养65～80h，得到菌体发酵液；按重量份计，所述液体培养基的原料包括酵母提取物2～8份、葡萄糖2～8份和麦芽提取物8～20份和水800～1000份；(2)以所述菌体发酵液接种于固体培养基进行发酵，得到活性发酵产物；按重量份计，所述固体培养基的原料包括介质支持物70～150份、酵母膏1～6份和蛋白胨7～20份和水80～120份；所述介质支持物选自大米、高粱、小麦、米糠或稻壳中的一种或多种；(3)以乙酸乙酯浸提所述活性发酵产物，固液分离得到乙酸乙酯提取物，去除乙酸乙酯，得到放线菌抗菌次生代谢产物。优选的，所述步骤(1)中的培养时还伴随搅拌。优选的，所述步骤(1)中的液体培养基pH为7.0～7.4。优选的，所述步骤(2)中菌体发酵液的接种量为0.12～0.5ml/kg。优选的，所述步骤(2)中的固体培养基制备方法包括以下步骤：S1、将酵母膏、蛋白胨和水混合，调节pH值为7.5，得到预混合液；S2、将预混合液与介质支持物混合，静置6～10h，得到混合物；S3、将混合物灭菌，振荡至介质支持物的任意两个颗粒之间不粘连，得到固体培养基。优选的，所述步骤(3)中，乙酸乙酯的浸提次数为2～4次。优选的，步骤(3)中，所述乙酸乙酯浸提时，乙酸乙酯与固态发酵物的体积比为1:1。优选的，步骤(3)中，所述浸提的时间优选为30～60min。与现有技术相比，本专利技术的有益效果：本专利技术提供了一种放线菌抗菌次生代谢产物的制备方法，将产抗菌次生代谢产物的放线菌接种于液体培养基中培养65～80h，得到菌体发酵液；所述液体培养基的原料包括酵母提取物、葡萄糖和麦芽提取物和水；以所述菌体发酵液接种于固体培养基进行发酵，得到活性发酵产物；所述固体培养基的原料包括介质支持物、酵母膏和蛋白胨和水；所述介质支持物选自大米、高粱、小麦、米糠或稻壳中的一种或多种；以乙酸乙酯浸提所述活性发酵产物，固液分离得到乙酸乙酯提取物，去除乙酸乙酯，得到放线菌抗菌次生代谢产物。本专利技术提供的制备方法能够明显增加放线菌抗菌次生代谢产物的积累，提高代谢产量；同时，本专利技术所述方法中的固体培养基采用大米、高粱等作为介质支持物，除了起到支持介质作用外，还能为放线菌提供碳源和营养物质，为放线菌提供大量的生长空间，有利于放线菌菌丝的生长以及次级代谢产物的积累。本专利技术所述制备方法相对于单纯的液态发酵放线菌而言能耗低，发酵过程无需持续通入氧气。具体实施方式本专利技术提供了一种放线菌抗菌次生代谢产物的制备方法，包括以下步骤：(1)将产抗菌次生代谢产物的放线菌接种于液体培养基中培养65～80h，得到菌体发酵液；按重量份计，所述液体培养基的原料包括酵母提取物2～8份、葡萄糖2～8份和麦芽提取物8～20份和水800～1000份；(2)以所述菌体发酵液接种于固体培养基进行发酵，得到活性发酵产物；按重量份计，所述固体培养基的原料包括介质支持物70～150份、酵母膏1～6份和蛋白胨7～20份和水80～120份；所述介质支持物选自大米、高粱、小麦、米糠或稻壳中的一种或多种；(3)以乙酸乙酯浸提所述活性发酵产物，固液分离得到乙酸乙酯提取物，去除乙酸乙酯，得到放线菌抗菌次生代谢产物。本专利技术为了得到放线菌抗菌次生代谢产物，首先以液体培养基对产抗菌次生代谢产物的放线菌进行培养，一方面能够扩大放线菌数量，另一方面先进行液体培养再接种固体培养基更有利于刺激抗菌次级代谢产物的生成。将经过液体培养后得到的菌体发酵液接种在固体培养基中进行发酵，本专利技术采用的固体培养基中利用大米、高粱、麦麸等天然物质作为介质支持物，一方面作为碳源能够提供放线菌抗菌次级代谢产物产生的营养物质，另一方面所述介质支持物还能够起到支撑介质的作用，为放线菌菌丝提供更大的生存、延展空间，却又避免了如液体培养时容易出现菌丝团的问题，因而采用本专利技术提供的固体培养基进行固体发酵可以得到积累了大量抗菌次生代谢产物的活性发酵产物。本专利技术对所得活性发酵产物以乙酸乙酯进行浸提，分离得到含有放线菌抗菌次生代谢产物的混合物。如本专利技术的具体实施例所示，按照本专利技术所述方法制备得到的放线菌抗菌次生代谢产物产量是传统液态发酵方式的11.3倍，显著提高了产量，能耗较低。具体来说，本专利技术首先将产抗菌次生代谢产物的放线菌接种于液体培养基中培养65～80h，得到菌体发酵液；按重量份计，所述液体培养基的原料包括酵母提取物2～8份、葡萄糖2～8份和麦芽提取物8～20份和水800～1000份。本专利技术得到的菌体发酵液中包括放线菌菌体及其部分次生代谢产物和液体培养基。在本专利技术中，所述产抗菌次生代谢产物的放线菌包括但不限于抗金黄色葡萄球菌的放线菌、抗枯草芽孢杆菌的放线菌。在本专利技术中，按重量份计，所述液体培养基优选的包括酵母提取物3～5份、葡萄糖3～6份和麦芽提取物9～12份和水950～980份。在本专利技术中，所述液体培养基的pH值优选为7.0～7.4，更优选为7.2。在本专利技术中，所述酵母提取物和麦芽提取物均为市售商品，本专利技术对此不做限定。在本专利技术中，所述液体培养基中培养的时间优选为70～75h，更优选为72h；所述培养的温度优选为25～32℃，更优选为28℃。在本专利技术中，所述液体培养基中的培养时还伴随搅拌；更优选的，所述搅拌速率优选为得到菌体发酵液后，本专利技术将所述菌体发酵液接种于固体培养基进行发酵，得到活性发酵产物；按重量份计，所述固体培养基的原料包括介质支持物70～150份、酵母膏1～6份和蛋白胨7～20份和水80～120份；在本专利技术中，所述菌体发酵液在固体培养基的接种量优选为0.12～0.5ml/kg，更优选为1.0ml/L。在本专利技术中，所述发酵的温度优选为25～32℃，更优选为28℃。在本专利技术中，所述发酵的时间优选为10～15d，更优选为12～14d。在本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种放线菌抗菌次生代谢产物的制备方法，包括以下步骤：/n(1)将产抗菌次生代谢产物的放线菌接种于液体培养基中培养65～80h，得到菌体发酵液；/n按重量份计，所述液体培养基的原料包括酵母提取物2～8份、葡萄糖2～8份和麦芽提取物8～20份和水800～1000份；/n(2)将所述菌体发酵液接种于固体培养基进行发酵，得到活性发酵产物；/n按重量份计，所述固体培养基的原料包括介质支持物70～150份、酵母膏1～6份和蛋白胨7～20份和水80～120份；/n所述介质支持物选自大米、高粱或小麦中的一种或多种；/n(3)以乙酸乙酯浸提所述活性发酵产物，固液分离得到乙酸乙酯提取物，去除乙酸乙酯，得到放线菌抗菌次生代谢产物。/n

【技术特征摘要】
1.一种放线菌抗菌次生代谢产物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将产抗菌次生代谢产物的放线菌接种于液体培养基中培养65～80h，得到菌体发酵液；
按重量份计，所述液体培养基的原料包括酵母提取物2～8份、葡萄糖2～8份和麦芽提取物8～20份和水800～1000份；
(2)将所述菌体发酵液接种于固体培养基进行发酵，得到活性发酵产物；
按重量份计，所述固体培养基的原料包括介质支持物70～150份、酵母膏1～6份和蛋白胨7～20份和水80～120份；
所述介质支持物选自大米、高粱或小麦中的一种或多种；
(3)以乙酸乙酯浸提所述活性发酵产物，固液分离得到乙酸乙酯提取物，去除乙酸乙酯，得到放线菌抗菌次生代谢产物。


2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中的培养时还伴随搅拌。


3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中的液体培养基pH值为7.0～7.4。...

【专利技术属性】
技术研发人员：张新军，曹舰艇，
申请(专利权)人：西藏农牧学院，
类型：发明
国别省市：西藏;54