南湖菱壳多酚提取物在制备用于抗HER-2过表达型乳腺癌药物中的用途制造技术

本发明专利技术属于天然药物技术领域，具体涉及南湖菱壳多酚提取物中的没食子酸和五没食子酰葡萄糖组合物在制备用于抗HER‑2过表达型乳腺癌药物中的用途。该南湖菱壳多酚提取物的制备包括以下步骤：（1）南湖菱壳粉碎、过筛；（2）乙醇超声提取，减压浓缩得到粗提取物；（3）粗提取物用乙酸乙酯萃取后，上样于大孔吸附树脂柱，流分减压浓缩得到菱壳多酚提取物。本发明专利技术发现南湖菱壳多酚提取物中的没食子酸和五没食子酰葡萄糖组合物对SK‑BR‑3细胞发挥协同作用，具有显著的抑制效果。本发明专利技术为进一步解释菱壳多酚提取物的抗乳腺癌功效提供一定依据，从而为开发和制备针对不同类型乳腺癌的抗乳腺癌药物提供技术支撑。

The application of polyphenol extract from Nanhu rhombic shell in the preparation of anti HER-2 over expression breast cancer drugs

【技术实现步骤摘要】
南湖菱壳多酚提取物在制备用于抗HER-2过表达型乳腺癌药物中的用途
本专利技术属于天然药物
，具体涉及南湖菱壳多酚提取物及其制备方法和用途，更具体地，涉及南湖菱壳多酚提取物中的没食子酸和五没食子酰葡萄糖组合物在制备用于抗HER-2过表达型乳腺癌药物中的用途。
技术介绍
菱科(Trapaceae)菱属(Trapa)植物，全世界约有70余种，分布于欧、亚、非的温带至热带地区。菱属植物主要含有黄酮、多酚、甾淳、生物碱、多糖、挥发油、氨基酸等物质，具有抗癌、抗氧化、α-葡萄糖苷酶抑制活性、抗微生物、镇痛、护肝、免疫调节、抗动脉粥样硬化、降血糖等作用。南湖菱(TrapaacornisNakano.)又名无角菱、元宝菱、圆菱、团角菱、和尚菱，是我国特产的水生经济作物，因主产浙江嘉兴南湖而得名，并以其果实无角、壳薄、味美、营养丰富而闻名，已成为杭嘉湖平原水乡特有且具有较高种植效益的经济作物。菱食用时通常只选用菱肉部分，菱壳常被当作废料而丢弃，但大量研究表明，菱壳富含多酚、黄酮、生物碱等活性成分，具有广泛的生物活性。朱红薇等采用薄层层析和紫外光谱对南湖菱的各种提取物进行分析，发现南湖菱含有没食子酸和咖啡酸等主要次生代谢物，主要存在于菱壳中。陈百泉等对南湖菱壳不同提取部位采用色谱法分离，发现南湖菱壳总提取物、石油醚部位、醋酸乙酯部位等均具有α-葡萄糖苷酶抑制活性。宁颖研究发现南湖菱壳提取液取能够较高的抑制胃癌细胞增殖活性。根据已有研究，南湖菱壳提取物对胃癌细胞具有显著的体外抑制作用，发挥抗胃癌作用的活性成分主要为多酚类物质、黄酮类物质和皂苷类物质，其中，多酚类和黄酮类的效果更为显著(林秋生，菱壳生物活性成分分析及抗胃癌机制研究，浙江大学博士学位论文)。然而，当前研究并没有对其中发挥作用的有效成分进行更加深入的研究，关于南湖菱壳多酚提取物在抗乳腺癌方面的作用机制还未见详细报道，尤其对不同类型乳腺癌的作用机制未见报道。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种没食子酸和五没食子酰葡萄糖组合物的用途。本专利技术以南湖菱壳为原料，研究南湖菱壳多酚提取物对HER-2过表达型乳腺癌细胞SK-BR-3的抑制作用，对南湖菱壳多酚提取物中的功能性成分及其潜在利用价值进行研究。在一些优选方式中，南湖菱壳多酚提取物中的没食子酸和五没食子酰葡萄糖组合物具有制备用于抗HER-2过表达型乳腺癌药物的用途。为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种南湖菱壳多酚提取物的制备方法，包括如下步骤：(1)剥开南湖菱果实，留下外壳，在通风阴凉的地方晾晒至干，然后用植物粉碎机粉碎后过60目筛，收集粉末即为原料，放置阴凉干燥处备用；(2)按照料液比1:20(g/ml)加入浓度为60％的乙醇溶液，然后置于60℃的恒温水浴中提取2h，然后取出置于超声功率300KW的超声仪中超声20min，趁热过滤，收集滤液，滤渣再重复提取2次后合并滤液，滤液3000r/min离心10min，收集上清液，减压浓缩得到粗提取物。(3)粗提取物用水回溶后，用乙酸乙酯萃取三次，减压浓缩后的到菱壳提取物。将此提取物用水回溶，上样于DM130大孔吸附树脂柱，用2柱体积30％乙醇溶液洗脱，收集流分，减压浓缩得到菱壳多酚提取物。本专利技术提供了上述方法制备而得的南湖菱壳多酚提取物，该提取物中总多酚的含量为81.5％-84.9％。作为本专利技术的用途，该提取物中的多酚包括没食子酸、三没食子酰葡萄糖、四没食子酰葡萄糖和五没食子酰葡萄糖。作为本专利技术的用途，以提取物的总重量为基准，没食子酸含量为24.8-26.4％，三没食子酰葡萄糖含量为12.5-14.0％，四没食子酰葡萄糖含量为7.6-8.3％，五没食子酰葡萄糖含量为25.2-28.7％。本专利技术具有如下优点：(1)提供了一种没食子酸和五没食子酰葡萄糖组合物在制备抗HER-2过表达型乳腺癌药物中的用途，该组合物来自于南湖菱壳多酚提取物，具有来源广阔、组成明晰、安全可靠的特点。(2)本专利技术对南湖菱壳的有效成分进行了提取分离，获得了一种可有效抗HER-2过表达型乳腺癌的提取物，通过对南湖菱壳多酚提取物中发挥抗HER-2过表达型乳腺癌作用的活性成分进行进一步深入分析，明确了南湖菱壳多酚提取物中发挥抗HER-2过表达型乳腺癌作用的活性成分，以及各活性成分之间可能的作用方式。本专利技术发现没食子酸和五没食子酰葡萄糖组合物对SK-BR-3细胞发挥协同作用，显示出显著的抑制效果，而三没食子酰葡萄糖、四没食子酰葡萄糖对SK-BR-3细胞可能发挥拮抗作用，会降低没食子酸和五没食子酰葡萄糖组合物的协同效果。本专利技术为进一步解释菱壳提取物的抗乳腺癌功效提供一定依据，从而为开发和制备针对不同类型乳腺癌的抗乳腺癌药物提供技术支撑。在应用南湖菱壳多酚提取物制备抗乳腺癌药物时，应针对不同类型的乳腺癌，分离提取对不同乳腺癌细胞具有特异性抑制作用的活性成分，从而显著提高药物的抗癌活性及效果。附图说明图1是南湖菱壳多酚提取物的UPLC-MS分析图谱，其中，(A)为色谱扫描图谱，(B)为质谱扫描图谱。图2是南湖菱壳多酚类物质的紫外吸收谱图和质谱图，其中，(A)为没食子酸的紫外吸收谱和质谱，(B)为三没食子酰葡萄糖的紫外吸收谱和质谱，(C)为四没食子酰葡萄糖的紫外吸收谱和质谱，(D)为五没食子酰葡萄糖的紫外吸收谱和质谱。图3是不同浓度南湖菱壳多酚提取物3#对SK-BR-3细胞的细胞周期的影响。图4是不同浓度南湖菱壳多酚提取物3#对SK-BR-3细胞的细胞凋亡的影响。图5是不同浓度南湖菱壳多酚提取物1#对MDA-MB-468细胞的细胞周期的影响。图6是不同浓度南湖菱壳多酚提取物1#对MDA-MB-468细胞的细胞凋亡的影响。具体实施方式下面结合实施例，更具体地说明本专利技术的内容。应当理解，本专利技术的实施并不局限于下面的实施例，对本专利技术所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本专利技术保护范围。在本专利技术中，若非特指，所有的份、百分比均为重量单位，所有的设备和原料等均可从市场购得或是本行业常用的。若无特别指明，实施例采用的方法为本领域通用技术。实施例中选用的南湖菱采自浙江嘉兴。实施例1南湖菱壳多酚提取物的制备及总多酚含量测定1、南湖菱壳预处理：剥开南湖菱果实，留下外壳，在通风阴凉的地方晾晒至干，然后用植物粉碎机粉碎后过60目筛，收集粉末即为原料，放置阴凉干燥处备用。2、提取物制备：按照料液比1:20(g/ml)加入浓度为60％的乙醇溶液，然后置于60℃的恒温水浴中提取2h，然后取出置于超声功率300KW的超声仪中超声20min，趁热过滤，收集滤液，滤渣再重复提取2次后合并滤液，滤液3000r/min离心10min，收集上清液，减压浓缩得到粗提取物。粗提取物用水回溶后，用乙酸乙酯萃取三次，减压浓缩后的到菱壳多酚提取物。3、提取物总多酚含量的测定采用Folin-Ciocalteu本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.没食子酸和五没食子酰葡萄糖组合物在制备用于抗HER-2过表达型乳腺癌药物中的用途，所述没食子酸和五没食子酰葡萄糖组合物来自于南湖菱壳多酚提取物，该南湖菱壳多酚提取物的制备方法包括以下步骤：/n(1)剥开南湖菱果实，留下外壳，在通风阴凉的地方晾晒至干，然后用植物粉碎机粉碎后过60目筛，收集粉末即为原料，放置阴凉干燥处备用；/n(2)按照料液比1:20(g/ml)加入浓度为60％的乙醇溶液，然后置于60℃的恒温水浴中提取2h，然后取出置于超声功率300KW的超声仪中超声20min，趁热过滤，收集滤液，滤渣再重复提取2次后合并滤液，滤液3000r/min离心10min，收集上清液，减压浓缩得到粗提取物；/n(3)粗提取物用水回溶后，用乙酸乙酯萃取三次，减压浓缩后的到菱壳提取物；将此提取物用水回溶，上样于DM130大孔吸附树脂柱，用2柱体积30％乙醇溶液洗脱，收集流分，减压浓缩得到菱壳多酚提取物。/n

【技术特征摘要】
1.没食子酸和五没食子酰葡萄糖组合物在制备用于抗HER-2过表达型乳腺癌药物中的用途，所述没食子酸和五没食子酰葡萄糖组合物来自于南湖菱壳多酚提取物，该南湖菱壳多酚提取物的制备方法包括以下步骤：
(1)剥开南湖菱果实，留下外壳，在通风阴凉的地方晾晒至干，然后用植物粉碎机粉碎后过60目筛，收集粉末即为原料，放置阴凉干燥处备用；
(2)按照料液比1:20(g/ml)加入浓度为60％的乙醇溶液，然后置于60℃的恒温水浴中提取2h，然后取出置于超声功率300KW的超声仪中超声20min，趁热过滤，收集滤液，滤渣再重复提取2次后合并滤液，滤液3000r/min离心10min，收集上清液，减压浓缩得到粗提取物；
(3)粗提取物用水回溶后，用乙酸乙酯萃取三次，减压浓缩后...

【专利技术属性】
技术研发人员：高广春，黄越燕，蒋小红，黄嬛，朱琦峰，汪淑贞，张洁，
申请(专利权)人：嘉兴学院，
类型：发明
国别省市：浙江;33