妊娠糖尿病微小RNA标志物组合及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物医学技术领域，具体公开了一种与妊娠糖尿病相关的微小RNA标志物组合及其应用，所述微小RNA标志物组合包括miR‑132、miR‑375。所述miR‑132、miR‑375位于外周血血清或者血浆中。miR‑132、miR‑375可作为妊娠糖尿病的诊断标志物，为妊娠糖尿病的早期诊断提供基础。

Combination and application of microRNA markers in gestational diabetes mellitus

【技术实现步骤摘要】
妊娠糖尿病微小RNA标志物组合及其应用
本专利技术属于生物医学
，具体涉及提供一种妊娠糖尿病微小RNA标志物组合及其应用。
技术介绍
妊娠糖尿病是一种妊娠并发症，目前临床诊断主要是在孕中期检测孕妇血糖来判定，由于妊娠糖尿病可能导致胎儿畸形，严重者危害母婴健康，所以越早诊断出妊娠糖尿病，越对患者有利。微小RNA(microRNA)是一类分子量大小18-25个碱基的小分子非编码RNA，microRNA在进化上高度保守，参与基因转录后表达的调控，在转录后和翻译水平调节基因表达，其表达异常与妊娠糖尿病关系密切。研究报道，与妊娠糖尿病相关的microRNA有多种，比如miR-222、miR-132、miR-29a等，这些microRNA可在孕早期孕妇的外周血血清或者血浆中被检测和分析，对于及时诊断妊娠糖尿病具有重要意义。然而由于单个microRNA的检测精确度不够，易出现假阳性或者假阴性结果，目前关于妊娠糖尿病大多是不同microRNA的组合物，比如miR-222、miR-132、miR-29a的组合物，miR-375与miR-29的组合物，但是尚未见miR-132与miR-375的组合物。虽然目前已公开的组合物虽然具有一定的诊断妊娠糖尿病潜力，但是由于基因突变慢慢的发生，总要有一些检测标志物被淘汰或者检测精度下降，所以开发miR-132与miR-375的组合物作为新的妊娠糖尿病诊断标志物尤为必要，其在制备妊娠糖尿病诊断试剂盒中的应用将具有重要的临床意义。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种妊娠糖尿病微小RNA标志物组合及其应用。本专利技术提供了一种妊娠糖尿病微小RNA标志物组合，所述微小RNA标志物组合包括miR-132、miR-375。优选的，所述miR-132、miR-375位于外周血血清或者血浆中。优选的，扩增miR-132的上游引物为：5’-ACACTCCAGCTGGGTAGCAGCACGTAAATA-3’，下游引物为：5’-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGCGCCAATA-3’；扩增miR-375的上游引物为：5’-CCCTCTAGACCCCAAGGCTGATGCTGAGAAG-3’，下游引物5’-AAAGGTCCGCCGCCCGGCCCCGGGTCTTC-3’。本专利技术还提供了一种与妊娠糖尿病相关的微小RNA标志物组合在制备妊娠糖尿病诊断试剂盒中的应用。优选的，所述试剂盒中包括氯化钠-氯化钾复合试剂。优选的，所述氯化钠-氯化钾复合试剂的配方如下：氯化钠的浓度为5-10ng/μL、氯化钾的浓度为5-10ng/μL，溶剂为ddH2O。与现有的技术相比，本专利技术提供的一种妊娠糖尿病微小RNA标志物组合及其应用，具有以下有益效果：本专利技术的创新点在于：(1)妊娠期糖尿病与一般的糖尿病主要的区别是在于发病的时间限度不同，妊娠期的糖尿病主要是在妊娠期才会发生，而一般的糖尿病是由于各种原因导致的，大多数患者伴随终生。现有研究结果显示miR-222、miR-132、miR-29a的组合物可以作为妊娠糖尿病的诊断标志物；miR-375、miR-29的组合物可以作为妊娠糖尿病的诊断标志物；但是并没有文献研究miR-132、miR-375的组合物可作为妊娠糖尿病的诊断标志物。由于不同组合标志物的敏感程度不同，选择本申请的标志物组合，可提高检测敏感度，提高结果可靠性。(2)检测试剂盒所使用的试剂不同也是提高检测敏感度的重要手段，在本申请选择的miR-132、miR-375标志物条件下，配合使用一定浓度的氯化钠-氯化钾复合试剂，可提高检测灵敏度。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行详细说明，但不应理解为本专利技术的限制。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。本专利技术提供一种与妊娠糖尿病相关的微小RNA标志物组合，所述微小RNA标志物组合包括miR-132、miR-375。所述miR-132、miR-375位于外周血血清或者血浆中。为了验证上述标志物组合的效果，我们进行了如下实验：选择50例妊娠糖尿病孕妇空腹外周血作为实验组，选择50例糖耐检查正常的孕妇空腹外周血作为对照组。数据统计采用SPSS软件比较P＜0.05为差异有统计学意义。孕妇筛查标准如下：1、无遗传病史，2、无其他合并症状，仅表现为妊娠糖尿病或者正常(排除其他因素对妊娠糖尿病的影响)，3、体重指数(BMI)在理想范围内18-25kg/m2，4、孕周数16-25周，5、年龄20-35岁。分别检测统计实验组和对照组孕妇的空腹血糖、空腹胰岛素，结果如表1所示。通过孕妇空腹血糖、空腹胰岛素可以看出，妊娠糖尿病孕妇的空腹血糖高与正常组，空腹胰岛素值小于正常组。表1不同孕妇的空腹血糖、空腹胰岛素实验组对照组空腹血糖FPG(mmol/L)8.8±2.415.8±3.6空腹胰岛素FINS平均值(mIU/L)4.9±1.026.7±8.3P＜0.05＜0.05实施例1miR-132、miR-375检测在妊娠糖尿病孕妇外周血中相对表达量的检测miR-132、miR-375检测按照RNA抽提试剂盒(InvitrogenAmbion)说明书提取血清RNA，按照TaqMan反转录试剂盒(美国APPS公司)说明书进行反转录，然后以反转录产物为模板，对不同的样品进行RT-PCR反应。扩增miR-132的上游引物为：5’-ACACTCCAGCTGGGTAGCAGCACGTAAATA-3’，SEQIDNO.1所示，下游引物为：5’-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGCGCCAATA-3’，SEQIDNO.2；扩增miR-375的上游引物为：5’-CCCTCTAGACCCCAAGGCTGATGCTGAGAAG-3’，SEQIDNO.3，下游引物5’-AAAGGTCCGCCGCCCGGCCCCGGGTCTTC-3’，SEQIDNO.4。miR-132与miR-375的RT-PCR扩增条件相同，为95℃10min；95℃15s，95℃15s，60℃60s，45个循环。miR-132与miR-375的RT-PCR扩增体系如下：用博日科技公司的2×SYBRGreenMix反应试剂盒，并按试剂盒的说明书进行21μL体系的RT-PCR。以U6SnRNA作为内参，计算Ct值，相对表达量以2-ΔΔCt表示相对表达量，其中，ΔCt＝Ct样本-Ct内参，计算样品针对U6SnRNA的相对表达量。不同组的微小RNA相对表达量如表2所示，结果显示，实验组和对照组本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种与妊娠糖尿病相关的微小RNA标志物组合，其特征在于，所述微小RNA标志物组合包括miR-132、miR-375。/n

【技术特征摘要】
1.一种与妊娠糖尿病相关的微小RNA标志物组合，其特征在于，所述微小RNA标志物组合包括miR-132、miR-375。


2.根据权利要求1所述与妊娠糖尿病相关的微小RNA标志物组合，其特征在于，所述miR-132、miR-375位于外周血血清或者血浆中。


3.根据权利要求1所述与妊娠糖尿病相关的微小RNA标志物组合，其特征在于，扩增miR-132的上游引物为：5’-ACACTCCAGCTGGGTAGCAGCACGTAAATA-3’，下游引物为：5’-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGCGCCAATA-3’；
...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗茂，方丹，陈然，贺朝晖，吴剑波，
申请(专利权)人：西南医科大学，
类型：发明
国别省市：四川;51