细胞培养用培养基组合物的制备方法技术

本发明专利技术涉及细胞培养用培养基组合物的制备方法。本发明专利技术的特征在于，当提取干细胞的有效成分时，在低温、低压、储存的三低环境下进行干细胞的破碎，因此具有可防止干细胞的有效成分损伤的优点。作为本发明专利技术再一实施例的利用干细胞大量培养用培养基组成法和干细胞有效成分三低提取法的干细胞破碎提取物的制备方法的特征在于，包括：第一步骤，提取干细胞；第二步骤，在培养基组合物的培养基中对所提取的上述干细胞进行培养；第三步骤，对上述干细胞进行传代培养；第四步骤，从经培养的上述干细胞中获得细胞；第五步骤，对所获得的上述细胞进行破碎；以及第六步骤，对已破碎的上述物质进行过滤。

Preparation method of culture medium composition for cell culture

【技术实现步骤摘要】
细胞培养用培养基组合物的制备方法
本专利技术涉及细胞培养用培养基组合物的制备方法，更详细地涉及通过大量培养干细胞，可提高收率且可提高干细胞内的有效成分收率的细胞培养用培养基组合物的制备方法及利用细胞培养用培养基组合物的制备方法和干细胞有效成分三低提取法的干细胞破碎提取物的制备方法、利用其的抗炎症治疗用组合物及细胞再生治疗用组合物。
技术介绍
干细胞(stemcell)作为具有可以分化成各种身体组织的能力的微分化细胞，因具有可分化为各种组织细胞的能力，所以进行很多利用其的研究。在干细胞中，成体干细胞容易从脂肪、骨骼、脐带血或胎盘等部位获得，与胚胎干细胞相比，伦理问题少，若使用使用者本人的细胞，则免疫排斥反应也少，因此多进行利用其的研究。直接注入成体干细胞的治疗因免疫排斥反应等的理由仅限于自我治疗。为了跨越上述自我治疗的局限，通过破碎干细胞来，去除附有发生免疫排斥反应的免疫原性的细胞膜的方法可成为一种方法。本申请的专利技术人第一次确定了上述干细胞破碎提取物的概念，且申请过其开创性专利技术专利。其开创性专利的优点在于，通过去除附有发生免疫排斥反应的免疫原性的细胞膜，从而具有任何人均可使用的通用性，因此进行大量培养的理由成立，其结果可实现干细胞的大众化和产业化。因此，为了实现干细胞的大众化和产业化，需要有利于干细胞的大量培养的方法、对其有效成分进行提取的方法的持续研究及开发。
技术实现思路
要解决的技术问题本专利技术用于解决上述的问题，目的在于，提供利用通过大量培养干细胞来提高细胞的获取的干细胞大量培养用培养基组成法和可提高干细胞有效成分收集率的干细胞有效成分三低提取法的干细胞破碎提取物的制备方法。解决技术问题的手段作为用于实现上述目的，本专利技术人的细胞培养用培养基组成物的制备方法的特征在于，包含基本培养基、透明质酸及添加剂组合物。上述添加剂组合物的特征在于，包含甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、羟基脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮细胞生长因子(EGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、角质细胞生长因子(KGF)、肝细胞生长因子(HGF)、转化生长因子(TGF)、维生素C、维生素B1、维生素B12、维生素E、硒及运铁蛋白。上述基本培养基为达尔伯克氏改良伊格尔氏培养基(DMEM，Dulbecco’sModifiedEagle’sMedium)、最小必需培养基(MEM，MinimalEssentialMedium)、基础伊格培养基(BME，BasalMediumEagle)、RPMI1640、F-10、F12、达尔伯克氏改良伊格尔氏培养基-F12(DMEM-F12)、α-最小必需培养基(α-MinimalEssentialMedium，α-MEM)、格拉斯哥最小必需培养基(Glasgow’sMinimalEssentialMedium，G-MEM)、伊思考夫改良达尔伯克培养基(IMDM，Iscove’sModifiedDulbecco’sMedium)、MacCoy’s5A培养基、AmnioMax、AminoMaxⅡ完全培养基(AminoMaxⅡcompleteMedium)、Chang中型MesemCult-XF培养基(Chang’sMediumMesemCult-XFMedium)中的一种。本专利技术的特征在于，相对于上述培养基组合物，上述添加剂组合物以10μg/ml的浓度包含透明质酸，以1ng/ml的浓度包含上述甘氨酸，以1ng/ml的浓度包含上述组氨酸，以1ng/ml的浓度包含上述异亮氨酸，以1ng/ml的浓度包含上述蛋氨酸，以1ng/ml的浓度包含上述苯丙氨酸，以10ng/ml的浓度包含上述脯氨酸，以5ng/ml的浓度包含上述羟基脯氨酸，以1ng/ml的浓度包含上述丝氨酸，以1ng/ml的浓度包含上述苏氨酸，以1ng/ml的浓度包含上述色氨酸，以1ng/ml的浓度包含上述酪氨酸，以2ng/ml的浓度包含上述缬氨酸，以9μg/ml的浓度包含上述碱性成纤维细胞生长因子，以1.5μg/ml的浓度包含上述表皮细胞生长因子，以1μg/ml的浓度包含上述血管内皮生长因子，以1.2μg/ml的浓度包含上述角质细胞生长因子，以0.5μg/ml的浓度包含上述肝细胞生长因子，以0.5μg/ml的浓度包含上述转化生长因子，以2μg/ml的浓度包含上述维生素C，以0.5μg/ml的浓度包含上述维生素B1，以3μg/ml的浓度包含上述维生素B12，以500μg/ml的浓度包含上述维生素E，以1.8μg/ml的浓度包含上述硒，以12μg/ml的浓度包含上述运铁蛋白。并且，利用干细胞大量培养用培养基组成法和干细胞有效成分三低提取法的干细胞破碎提取物的制备方法的特征在于，包括：第一步骤，提取干细胞；第二步骤，在上述的培养基组合物的培养基中对所提取的上述干细胞进行培养；第三步骤，对上述干细胞进行传代培养；第四步骤，从经培养的上述干细胞中获得细胞；第五步骤，对所获得的上述细胞进行破碎；第六步骤，对已破碎的上述物质进行过滤；以及第七步骤，对第六步骤的经过滤的物质进行冷冻干燥来保存或利用。利用干细胞大量培养用培养基组成法和干细胞有效成分三低提取法的干细胞破碎提取物的制备方法的特征在于，在上述第五步骤中，利用干细胞有效成分提取装置，上述干细胞有效成分提取装置包括：本体部10，在内部形成空间且阻隔外部和内部；第一容器部12，设置于上述本体部10的内部且使上方开口，第二容器部14，相对于上述第一容器部12形成相对小的尺寸，设置于上述第一容器部12内，通过使上方开口来向第二容器部14内部投入干细胞；破碎部16，对上述第二容器部14内部的干细胞进行破碎；阀18，用于向上述本体部10内部约束空气的流动；以及泵20，在上述本体部10内部吸入空气，将上述干细胞投入于储存性溶液后，投入于上述第二容器部。抗炎症治疗用组合物的特征在于，利用作为本专利技术再一实施例的干细胞破碎提取物。细胞再生治疗用组合物的特征在于，利用作为本专利技术另一实施例的干细胞破碎提取物。抗关节炎治疗用组合物的特征在于，利用作为本专利技术还一实施例的干细胞破碎提取物。专利技术的效果本专利技术的细胞培养用培养基组合物的制备方法及利用细胞培养用培养基组合物的制备方法和干细胞有效成分三低提取法的干细胞破碎提取物的制备方法的效果如下。由于不使用血清，因而稳定，并且通过使用支架来培养增大，从而具有干细胞的有效因子的收率提高的优点。当提取干细胞的有效成分时，在低温、低压及储存的三低环境下进行干细胞的破碎，因此，具有可防止干细胞的有效成分受到损伤的优点。并且，并且利用上述两种方法的干细胞破碎提取物中完全去除附有免疫原性的细胞膜，从而具有任何人可使用的通用性，从而具有可实现干细胞的大众化和产业化的优点。附图说明图1为示出本专利技术的干细胞有效成分三低提取装置的图。图2为为了确认基于本专利技术的干细胞破碎提取物的抗关节炎效果，利用作为软骨细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种细胞培养用培养基组合物的制备方法，其特征在于，包含如下而制备：/n基本培养基；/n透明质酸；以及/n添加剂组合物。/n

【技术特征摘要】
20180627 KR 10-2018-00742431.一种细胞培养用培养基组合物的制备方法，其特征在于，包含如下而制备：
基本培养基；
透明质酸；以及
添加剂组合物。


2.根据权利要求1所述的细胞培养用培养基组合物的制备方法，其特征在于，上述添加剂组合物包含甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、羟基脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、碱性成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、血管内皮生长因子、角质细胞生长因子、肝细胞生长因子、转化生长因子、维生素C、维生素B1、维生素B12、维生素E、硒及运铁蛋白。


3.根据权利要求1所述的细胞培养用培养基组合物的制备方法，其特征在于，上述基本培养基为达尔伯克氏改良伊格尔氏培养基、最小必需培养基、基础伊格培养基、RPMI1640、F-10、F12、达尔伯克氏改良伊格尔氏培养基-F12、α-最小必需培养基、格拉斯哥最小必需培养基、伊思考夫改良达尔伯克培养基、MacCoy’s5A培养基、AmnioMax、AminoMaxⅡ完全培养基及Chang中型MesemCult-XF培养基中的一种。


4.根据权利要求2所述的细胞培养用培养基组合物的制备方法，其特征在于，相对于上述培养基组合物，上述添加剂组合物以10μg/ml的浓度包含透明质酸，
以1ng/ml的浓度包含上述甘氨酸，
以1ng/ml的浓度包含上述组氨酸，
以1ng/ml的浓度包含上述异亮氨酸，
以1ng/ml的浓度包含上述蛋氨酸，
以1ng/ml的浓度包含上述苯丙氨酸，
以10ng/ml的浓度包含上述脯氨酸，
以5ng/ml的浓度包含上述羟基脯氨酸，
以1ng/ml的浓度包含上述丝氨酸，
以1ng/ml的浓度包含上述苏氨酸
以1ng/ml的浓度包含上述色氨酸，
以1ng/ml的浓度包含上述酪氨酸，
以2ng/ml的浓度包含上述缬氨酸，
以9μg/ml的浓度包含上述碱性成纤维细胞生长因子，
以1.5μg/ml的浓度包含上述表皮细胞生长因子，
以1μg/ml的浓度包含上述血管内皮生长因子，
以1.2μg/ml的浓度包含上述角质细...

【专利技术属性】
技术研发人员：金英实，朴贞垠，李惠镇，
申请(专利权)人：提艾勒干细胞研究所，
类型：发明
国别省市：韩国;KR