一种同时定量测定饲料中喹乙醇、乙酰甲喹和卡巴氧的方法技术

本发明专利技术公开了一种同时定量测定饲料中喹乙醇、乙酰甲喹和卡巴氧的方法，抽取具有代表性的饲料样品，用四分法浓缩取样，制备样品，粉碎后过0.45μm孔径的分子筛，混匀，装入磨口瓶中备用；取步骤1)所获得的样品2g于塑料离心管中，加10mL体积份数的甲酸乙腈溶液振摇混匀，超声提取15min，8000r/min离心5min，所得残渣再加入5mL体积份数的甲酸乙腈溶液重复提取1次；合并提取液，过膜上机待测；本发明专利技术采用甲酸乙腈作为提取液，乙腈本身就有很好的蛋白沉淀的作用，同时还可以除去磷脂等杂质，很适合兽药残留的提取。本实验采用甲醇作为流动相一方面可以获得很好的分离效果，另一方面也可以获得很好的峰形。

A method for the simultaneous and quantitative determination of olaquindox, acetomequine and carbamox in feeds

【技术实现步骤摘要】
一种同时定量测定饲料中喹乙醇、乙酰甲喹和卡巴氧的方法
本专利技术涉及本专利技术属于分析化学领域，具体设计一种同时定量测定饲料中喹乙醇、乙酰甲喹和卡巴氧的方法。
技术介绍
乙酰甲喹(mequindox)又名痢菌浄，是我国最早合成的一种喹噁啉类药物，它对革兰氏阳性菌如大肠埃希氏菌、巴氏杆菌等的作用比较强，对革兰氏阳性菌如金黄色葡萄球菌亦有抑制作用。因此在家禽及水产养殖中具有广泛应用。但因乙酰甲喹及其代谢物具有致畸、致癌致突变的副作用，对水生生态环境具有潜在的危害，并且严重危害人体健康，农业部已经禁止其使用。卡巴氧也是一种兽药，可以抗击猪中的细菌感染，特别是猪痢疾。卡巴氧抗菌谱较广，对革兰氏阻性菌(例如大肠杆菌、沙门氏杆菌、志贺氏菌及变形杆菌)特别敏感；对革兰氏阳性菌(例如葡萄球菌、链球菌)的最小抑菌浓度也优于金霉素，因而卡巴得能有效控制猪赤痢脏乱细菌性下痢。喹乙醇(olaquindox)又名倍育诺、快育灵等,作用类似于乙酰甲喹，具有抗菌作用。对革兰阴性菌特别敏感，对革兰氏阳性菌的最小抑菌浓度为50～100μg/ml,优于金毒素等。对螺旋体也有抑制作用，另外对其它抗生素有耐药性的细菌,对喹乙醇仍很敏感。喹乙醇是生长促进剂，具有促进蛋白质同化的作用，可以提高饲料的转化率，使猪体重加快。据报道其对鸡鸭敏感，易引起中毒，同时在体内容易积聚，对多数动物有制畸作用，对人体也有制畸、致癌和致突变的作用。农业部在2001年168号公告就做了严格规定：只能用于体重低于35千克的猪，添加量为50-100ppm的饲料，禁止用于家禽及水产养殖。尽管国家相关规定乙酰甲喹和喹乙醇的限量使用，但是一些不法商家依然泯灭自己的良心为了高额的利润。近年来乙酰甲喹和喹乙醇在饲料中常出现质量问题，检出浓度极高，有的甚至达到近百个mg/L，尽管国家定期对一些饲料厂进行抽样检查，但是一些商家依然钻法律的空子，仍有大批量不合格的饲料流入市场，这可能导致服药经济动物中毒或者感染不愈，甚至感染人体，造成重大损失。乙酰甲喹和喹乙醇出厂前都需要进行出厂检验，参考方法有《中国兽药规范》(1992年版)、GB/T8681.7-2009、农业部2086号公告-5-2014等。这些方法不仅耗时、耗力、而且还耗试剂，同时也会产生一些废液，对环境造成污染。由于现在人力成本比较高，企业很难安排较多的检测人员专门对这两种兽药进行大比例的检验；同样市场监督管理局也难以加大抽检的力度。因此一种快速、无损的检测方法是急需的。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种方法简单、便捷、污染小、消耗小，可以实现大规模检验的同时定量测定饲料中喹乙醇、乙酰甲喹和卡巴氧的方法。为解决上述问题，本专利技术采用如下技术方案：一种同时定量测定饲料中喹乙醇、乙酰甲喹和卡巴氧的方法，包括以下步骤：1)根据GNB/T14699.1的规定抽取具有代表性的饲料样品，用四分法浓缩取样，按照GB/T20195的方法制备样品，粉碎后过0.45μm孔径的分子筛，混匀，装入磨口瓶中备用；2)取步骤1)所获得的样品2g于塑料离心管中，加10mL体积份数的甲酸乙腈溶液振摇混匀，超声提取15min，8000r/min离心5min，所得残渣再加入5mL体积份数的甲酸乙腈溶液重复提取1次；合并提取液，过膜上机待测。优选地，所述饲料样品为配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混饲料和精料补充料中的一种或多种。优选地，所述甲酸乙腈溶液的体积分数为0.1％。优选地，10mL体积份数的甲酸乙腈避光超声提取40min。优选地，所述液相色谱的条件为：色谱柱：InfinityLabPoroshell120EC-C18色谱柱，50mm×3.0mmid，粒径2.7μm；流动相：A-0.1％甲酸水,B-甲醇,梯度洗脱：洗脱程序为：0-1min，甲醇10％-30％，1-3min，甲醇体积由30％-95％，3-5min，甲醇体积保持在95％，5-5.1min，甲醇体积由95％降至30％，后运行3min；流速0.4mL/min；柱温：35℃；进样体积：1μL；多重反应监测；离子模式：正离子；GasTemp：350℃；GasFlow：13l/min；Nebulizer：40psi；Capillary:positive4000VNegative3500V。本专利技术的有益效果是：本专利技术采用甲酸乙腈作为提取液，乙腈本身就有很好的蛋白沉淀的作用，同时还可以除去磷脂等杂质，很适合兽药残留的提取。溶液中甲酸的酸性环境更有利于乙酰甲喹和喹乙醇代谢物的提取。本实验采用甲醇作为流动相一方面可以获得很好的分离效果，另一方面也可以获得很好的峰形。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为两种标准品的标准工作溶液的液相色谱质谱图；图2为乙酰甲喹的工作曲线；图3为喹乙醇的工作曲线；图4为浓缩饲料经过处理后的质谱图；图5为配合饲料经过处理后的质谱图；图6为精料补充料经过处理后的质谱图；图7为添加剂预混合饲料经过处理后的质谱图。具体实施方式本说明书中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥的特征和/或步骤以外，均可以以任何方式组合。本说明书(包括任何附加权利要求、摘要和附图)中公开的任一特征，除非特别叙述，均可被其他等效或具有类似目的的替代特征加以替换。即，除非特别叙述，每个特征只是一系列等效或类似特征中的一个例子而已。实施例1实验准备，分别精确称取乙酰甲喹和喹乙醇标准品(纯度≥99.0％)(精确至0.000001g)，用甲醇溶解并定容至50mL，配置成100μg/mL的标准贮备液。取一定浓度的标准品通过液质分析根据乙酰甲喹和喹乙醇的一个母离子和两个特征离子，在相同的试验条件下，样品中待测物的保留时间与标准溶液中对应保留时间的偏差在±2.5％之内，且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液中对应的定性离子的相对丰度比偏差在对应的范围内。所以本实验确定分析化合物为响应的化合物。1)取配制的标准贮备液加90％的0.1％甲酸乙腈稀释至浓度范围为25ng/mL-1000ng/mL,取适量过0.22μm微孔滤膜，得标准工作液；2)将所得的标准溶液进行质谱分析，并根据标准溶液的浓度及峰面积建立标准工作曲线；3)所述液相色谱条件为：C18色谱柱，50mm×3.0mmid，粒径2.7μm；流动相：甲酸水和甲醇。梯度洗脱(其洗脱程序如表1)；流速0.4mL/min；柱温：35℃；进样体积：1μL；检测模式(条件如下表2)：多重反应检测；模式：正离子模式。表1液相色谱洗脱程序表2质谱条件4本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种同时定量测定饲料中喹乙醇、乙酰甲喹和卡巴氧的方法，其特征在于：包括以下步骤：/n根据GNB/T 14699.1的规定抽取具有代表性的饲料样品，用四分法浓缩取样，按照GB/T20195的方法制备样品，粉碎后过0.45μm孔径的分子筛，混匀，装入磨口瓶中备用；/n取步骤1）所获得的样品2g于塑料离心管中，加10mL体积份数的甲酸乙腈溶液振摇混匀，超声提取15min，8000r/min离心5min，所得残渣再加入5mL体积份数的甲酸乙腈溶液重复提取1次；合并提取液，过膜上机待测。/n

【技术特征摘要】
1.一种同时定量测定饲料中喹乙醇、乙酰甲喹和卡巴氧的方法，其特征在于：包括以下步骤：
根据GNB/T14699.1的规定抽取具有代表性的饲料样品，用四分法浓缩取样，按照GB/T20195的方法制备样品，粉碎后过0.45μm孔径的分子筛，混匀，装入磨口瓶中备用；
取步骤1）所获得的样品2g于塑料离心管中，加10mL体积份数的甲酸乙腈溶液振摇混匀，超声提取15min，8000r/min离心5min，所得残渣再加入5mL体积份数的甲酸乙腈溶液重复提取1次；合并提取液，过膜上机待测。


2.根据权利要求1所述的同时定量测定饲料中喹乙醇、乙酰甲喹和卡巴氧的方法，其特征在于：所述饲料样品为配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混饲料和精料补充料中的一种或多种。


3.根据权利要求1所述的同时定量测定饲料中喹乙醇、乙酰甲喹和卡巴氧的方法，其特征在于：所述甲酸乙腈溶液的体积分数为0.1%。


4.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：王成梅，张晓琳，初蕾，
申请(专利权)人：王成梅，
类型：发明
国别省市：山东;37