一种基于基因编辑技术的监测miRNA表达的报告基因探针及其构建方法技术

本发明专利技术公开了一种基于基因编辑技术的监测miRNA表达的报告基因探针及构建方法。所述的探针包括pcDNA3.1载体、基因片段A和B，载体pcDNA‑CRE，载体pcDNA‑FLP。所述的基因片段A、B按照A‑B顺序与线性化的pcDNA3.1载体重组，所述的片段A由Loxp/FRT、Fluc、和5xmiR targets序列组成，所述的片段B为Loxp/FRT。本发明专利技术的报告基因分子影像探针基于Loxp/FRT‑CRE/FLP基因编辑技术结合报告基因分子显像技术，可以实时监测活体miRNA的表达变化，为活体miRNA表达的动态变化提供了一种实时、无创的监测工具。

A reporter gene probe based on gene editing technology to monitor miRNA expression and its construction method

【技术实现步骤摘要】
一种基于基因编辑技术的监测miRNA表达的报告基因探针及其构建方法本专利技术属于基因工程
，涉及一种基于基因编辑技术的监测miRNA表达的报告基因探针及其构建方法，具体为基于Loxp/FRT-CRE/FLP基因编辑技术的监测miRNA表达变化报告基因影像探针设计及其构建方法。
技术介绍
条件性基因敲除主要是通过Cre/loxP或者Flp/FRT重组系统来实现的。这两个系统都是位点特异性重组酶系统，已发展成为在体内、外进行遗传操作的有力工具。这两个系统可以使靶基因的表达或缺失发生在试验动物发育的某一阶段或某一特定的组织器官。Cre/loxP系统来源于P1噬菌体，Cre/loxP系统是典型的双组分位点特异性重组系统。Cre重组酶(cyclizationrecombination)，它是一种由343个氨基酸组成的单体蛋白，可以引发loxP位点的DNA重组。任何序列的DNA，当其位于两个loxP位点之间的时候，在Cre重组酶的作用下要么被缺失(两个loxP位点的方向相同)，要么方向发生倒转(两loxP位点的方向相反)。FLP/FRT系统是典型的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于基因编辑技术的监测miRNA表达的报告基因探针，其特征在于，所述的探针包括pcDNA3.1载体、基因片段A和B，载体pcDNA-CRE，载体pcDNA-FLP，所述的基因片段A、B按照A-B顺序与线性化的pcDNA3.1载体重组，所述的片段A由Loxp/FRT、Fluc和5xmiR targets序列组成，所述的片段B为Loxp/FRT。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于基因编辑技术的监测miRNA表达的报告基因探针，其特征在于，所述的探针包括pcDNA3.1载体、基因片段A和B，载体pcDNA-CRE，载体pcDNA-FLP，所述的基因片段A、B按照A-B顺序与线性化的pcDNA3.1载体重组，所述的片段A由Loxp/FRT、Fluc和5xmiRtargets序列组成，所述的片段B为Loxp/FRT。


2.根据权利要求1所述的一种基于基因编辑技术的监测miRNA表达的报告基因探针，其特征在于，所述的片段A的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，所述的片段B的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。


3.根据权利要求1所述的一种基于基因编辑技术的监测miRNA表达的报告基因探针，其特征在于，所述的探针的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。


4.权利要求1所述的监测miRNA的报告基因探针的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)用NheI和XhoI酶切载体pcDNA3.1，使其线性化；
2)PCR扩增A、B片段；
3)通过基因重组技术将各个片段按A-...

【专利技术属性】
技术研发人员：王福，陈思，郑海锋，王希楠，
申请(专利权)人：西安电子科技大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61