一种产液化型淀粉酶的根毛霉菌及应用制造技术

本发明专利技术提供了一种产液化型淀粉酶的根毛霉菌及应用，涉及白酒酿造生产技术领域。所述产液化型淀粉酶的根毛霉菌（Rhizomucor sp.）TSM10.4，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.17200。本发明专利技术中的根毛霉菌能在30℃‑50℃范围内生长良好并产生液化型淀粉酶；可以将其制备成可用于固体发酵的固体发酵菌粉，并按比例应用于酿酒大曲的生产中，即可制得高液化型淀粉酶活力的强化酿酒大曲；将该强化酿酒大曲应用于白酒酿造中，可提高出酒率，并提升酒质，即提高了优级酒率。

Rhizopus sp. producing liquefying amylase and its application

【技术实现步骤摘要】
一种产液化型淀粉酶的根毛霉菌及应用
本专利技术涉及白酒酿造生产
，特别涉及一种产液化型淀粉酶的根毛霉菌及应用。
技术介绍
“曲为酒之骨”，大曲是白酒酿造生产中极其重要的元素，为白酒酿造生产提供生物酶、香味物质和香味前体物质，对白酒的产量和质量有重要的影响。液化型淀粉酶是大曲中的重要酶系，是影响白酒产量和质量的重要因素。白酒酿造中，液化型淀粉酶能首先将原料中的淀粉分解成糊精和少量麦芽糖等，进而分解成还原糖，才能产生乙醇及其它呈香、呈味物质。根毛霉菌广泛存在于白酒酿造过程中，任勰科等(2017)从茅台地区酱香型酒糟中分离到微小根毛霉；班世栋等(2015)从茅台地区酱香型大曲中分离到微小根毛霉；张向民等(2013)通过可培养方法发现根毛霉菌广泛存在于酒曲中，分离率达9.9％。目前已有研究显示根毛霉菌具有糖化酶、纤维素酶等活性，但未见有产生液化型淀粉酶的报道，也未见有根毛霉菌在白酒生产中应用的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种产液化型淀粉酶的根毛霉菌及应用，可提高白酒酿造的出酒率以及优级酒率。本专利技术提供的诸多技术方案中的优选技术方案所能产生的诸多技术效果详见下文阐述。为实现上述目的，本专利技术提供了以下技术方案：本专利技术提供的一种产液化型淀粉酶的根毛霉菌(Rhizomucorsp.)TSM10.4，于2019年4月1日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCCNo.17200。本专利技术提供的一种以上述的产液化型淀粉酶的根毛霉菌制备的固体发酵菌粉。本专利技术提供的固体发酵菌粉的制备方法，包括下述步骤：(1)以上述的产液化型淀粉酶的根毛霉菌为菌种，制成孢子悬液；(2)使用灭菌后的固体发酵培养基接种步骤(1)中制成的孢子悬液，接种时固体发酵培养基的温度为30℃-50℃；接种后在30℃-50℃的温度下进行培养；(3)将步骤(2)中的培养物在30℃-50℃的温度下进行干燥，再经过粉碎后即得固体发酵菌粉。进一步的，所述步骤(1)中，所述菌种需选择新鲜活化、生长旺盛、孢子丰富的菌种。进一步的，所述步骤(2)中，接种步骤(1)中制成的孢子悬液后，静置培养2.5天-3.5天；所述步骤(3)中，培养物的干燥后，水分控制在10％-12％。本专利技术提供的一种含有上述的固体发酵菌粉的强化酿酒大曲。进一步的，强化酿酒大曲中根毛霉活菌数为1×104CFU/g-1×107CFU/g。进一步的，加入上述的固体发酵菌粉的重量百分比为进一步的，加入上述的固体发酵菌粉的重量百分比为本专利技术提供的一种增加出酒率的方法，应用上述的强化酿酒大曲进行酿酒。基于上述技术方案，本专利技术实施例至少可以产生如下技术效果：本专利技术提供的液化型淀粉酶的根毛霉菌、固体发酵菌粉及制备方法、强化酿酒大曲和增加出酒率的方法，本专利技术中的根毛霉菌能在30℃-50℃范围内生长良好并产生液化型淀粉酶；可以将其制备成可用于固体发酵的固体发酵菌粉，并按比例应用于酿酒大曲的生产中，即可制得高液化型淀粉酶活力的强化酿酒大曲；将该强化酿酒大曲应用于白酒酿造中，可提高出酒率，并提升酒质，即提高了优级酒率。具体实施方式为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本专利技术所保护的范围。一、实施例中所应用的培养基为：1、初筛培养基：组分及各组分的重量百分比分别为：可溶性淀粉2％，酵母膏0.4％，磷酸二氢钠0.1％，磷酸氢二钠0.1％，琥红0.003％，卡那霉素0.002％，琼脂2.0％，其余成分为水。初筛培养基的pH为5.0。2、复筛培养基：组分及各组分的重量百分比分别为：可溶性淀粉2％，酵母膏0.4％，磷酸二氢钠0.1％，磷酸氢二钠0.1％，琼脂2.0％，其余成分为水。复筛培养基的pH为4.5。3、PDA培养基：土豆200克，加水1000毫升，煮沸20分钟，四层纱布过滤，滤液定容至1000毫升，加入葡萄糖20克，琼脂15克。PDA培养基的pH为6.0。4、固体发酵培养基：水与麸皮按重量比0.7-1：1的比例均匀混合。二、液化型淀粉酶活力测定与根毛霉活菌数测定的标准为：1、液化型淀粉酶活力的测定按照《QB/T4257—2011酿酒大曲通用分析方法》中液化力测定方法进行。2、根毛霉活菌数的测定按照GB4789(霉菌计数方法)进行计数。三、实施例：实施例一：1、菌株筛选：(1)初筛将大曲研磨成粉状，取25g加入到含有225mL无菌生理盐水中，37℃振荡30min(180r/min)，制得10-1菌悬液；静置30min后取上清液1mL加入到9mL无菌生理盐水中混合均匀，制得10-2菌悬液；依此类推，制得10-3、10-4、10-5、10-6菌悬液；分别取10-4、10-5、10-6各稀释度的菌悬液1mL于无菌培养皿中，加入熔化后冷却至50℃的初筛培养基混合均匀，凝固后置于37℃恒温培养箱中培养4天，取适量0.02mol/L碘溶液滴浸于长出的菌落周围，若呈无色透明圈，则该菌株为产生液化型淀粉酶的菌株，选取产生无色透明圈的菌株划线分离，直至获得纯菌株。(2)复筛取复筛培养基熔化后倒入无菌培养皿(直径9cm培养皿中倒入15-20mL培养基)，凝固后将初筛获得的纯菌株点接于培养皿中央，分别置于30℃、35℃、40℃、45℃、50℃恒温培养箱中培养48h，取适量0.02mol/L碘溶液滴浸于长出的菌落周围观察是否产生无色透圈，若呈无色透明圈，则该菌株为产生液化型淀粉酶的菌株，透明圈越大，酶活性越强，最终获得一株能在30℃-50℃范围内生长且液化型淀粉酶活力最强的菌株TSM10.4。2、菌株TSM10.4的鉴定菌株TSM10.4在PDA培养基平板上30℃培养4天后直径达8.6cm，菌丝初为白色，后变为深灰色，反面无色。无渗出液产生，无可溶性色素产生。菌丝无隔，分枝，具囊轴，无囊托，孢囊孢子球形。耐热，50℃生长良好。菌株TSM10.4的分子生物学特征为：ITSrDNA序列与GenBank数据库比对，和根毛霉菌(Rhizomucorsp.)的ITSrDNA序列同源性大于99％。综合上述形态特征及遗传性特征，可鉴定该株产液化型淀粉酶的菌株为根毛霉菌(Rhizomucorsp.)，将其命名为根毛霉菌TSM10.4，并于2019年4月1日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCCNo.17200。实施例二：固体发酵菌粉的制备，具体步骤为：(1)称取固体发酵培养基25g-30g于500mL三角本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种产液化型淀粉酶的根毛霉菌(Rhizomucor sp.)TSM10.4，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.17200。/n

【技术特征摘要】
1.一种产液化型淀粉酶的根毛霉菌(Rhizomucorsp.)TSM10.4，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCCNo.17200。


2.一种以权利要求1中所述的产液化型淀粉酶的根毛霉菌制备的固体发酵菌粉。


3.根据权利要求2所述的固体发酵菌粉的制备方法，其特征在于：包括下述步骤：
(1)以权利要求1中所述的产液化型淀粉酶的根毛霉菌为菌种，制成孢子悬液；
(2)使用灭菌后的固体发酵培养基接种步骤(1)中制成的孢子悬液，接种时固体发酵培养基的温度为30℃-50℃；接种后在30℃-50℃的温度下进行培养；
(3)将步骤(2)中的培养物在30℃-50℃的温度下进行干燥，再经过粉碎后即得固体发酵菌粉。


4.根据权利要求3所述的固体发酵菌粉的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中，所述菌种需选择新鲜活化、生长旺盛、孢子丰富的菌种...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨涛，李国友，陈晓珍，姚灿，
申请(专利权)人：中国科学院成都生物研究所，
类型：发明
国别省市：四川;51