用于检测rs4077515多态性位点的物质在评价或辅助评价ABPA中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种用于检测rs4077515多态性位点的物质在评价或辅助评价ABPA中的应用。通过对ABPA患者的CARD9

Application of substances used to detect rs4077515 polymorphism site in the evaluation or auxiliary evaluation of ABPA

【技术实现步骤摘要】
用于检测rs4077515多态性位点的物质在评价或辅助评价ABPA中的应用
本专利技术涉及分子遗传
，特别涉及用于检测rs4077515多态性位点的物质在评价或辅助评价ABPA中的应用。
技术介绍
变态反应性支气管肺曲霉菌病(AllergicBronchopulmonaryAspergillosis,ABPA)是肺曲霉菌病的一种，其致病菌为曲霉菌(Aspergillas，Asp)，尤以烟曲霉菌(Aspergillasfumigatus，Af)最为常见。ABPA的主要免疫应答为Th2介导的细胞免疫应答，Th2细胞能分泌白细胞IL-4、IL-5和IL-13,有助于IgE产生,促进嗜酸粒细胞分化成熟。ABPA典型的病理学特征包括①富含嗜酸性粒细胞的肉芽肿，主要累及支气管和细支气管；②支气管腔内黏液及纤维蛋白分泌增多，黏液栓形成，可见由嗜酸性粒细胞降解产生形成的夏科-雷登晶体，并导致中心性支气管扩张；③支气管及肺组织中有嗜酸性粒细胞、单核细胞的侵润，而周围血管炎较轻。从临床和免疫检查的角度，ABPA的主要特点嗜酸粒细胞增多，肺部大量浸润，血清总IgE水平显著升高以及烟曲霉菌特异的IgE和IgG阳性。本病最常见的临床症状为喘息，急性发作时可由发热、咳嗽、头痛、全身不适、咳白色或粘液泡沫痰，可由金棕色或墨绿色胶冻样痰栓，部分患者出现咳血。慢性期除有肺纤维化导致的呼吸困难、全身乏力和紫绀等症状，还可出现支气管扩张并感染等症状。然而，目前对于ABPA精确诊断还相当匮乏。同时，对于如何利用分子遗传手段对遗传风险因子进行预测，进而评价或辅助评价待测个体患变态反应性支气管肺曲霉菌病的危险性还未曾报道。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种用于检测rs4077515多态性位点的物质在评价或辅助评价ABPA中的应用，以利于APBA的早期防控。用于检测CARD9基因rs4077515多态性位点的物质在制备评价或辅助评价待测个体患变态反应性支气管肺曲霉菌病危险性的产品或检测系统中的应用。在其中一实施例中，所述CARD9基因rs4077515多态性位点的基因型表现为AA、AG或GG，当CARD9:g.136372044G>A等位基因位点上A所占的百分比大于65％时，待测个体患变态反应性支气管肺曲霉菌病的危险性相对升高。在其中一实施例中，所述rs4077515多态性位点为：以RNA反转录得到的cDNA为模板，采用引物扩增得到的扩增产物的编码CARD9蛋白第12位氨基酸的核苷酸，所述引物由序列表1所示的正向引物和序列表2所示的反向引物组成。在其中一实施例中，用于检测CARD9基因rs4077515多态性位点的物质为：用于直接测序法的物质、用于焦磷酸测序的物质、用于基因芯片测序的物质、用于二代测序的物质、用于SNaPShot技术测序的物质、用于TaqMan技术测序的物质、用于聚合酶链式反应与限制性片段长度多态性分析相结合的物质、用于聚合酶链式反应与直接测序法相结合的物质、用于聚合酶链式反应与焦磷酸测序法相结合的物质、用于杂交的方法的物质、用于引物延伸的方法的物质、用于构象方法的物质、或用于高分辨溶解曲线分析的物质。在其中一实施例中，所述用于检测CARD9基因rs4077515多态性位点的物质为用于焦磷酸测序的物质，包括：引物、反应底物、待测单链和酶；所述反应底物主要由5′-磷酰硫酸和荧光素组成，所述酶主要由DNA聚合酶、ATP硫酸化酶、荧光素酶和三磷酸腺苷双磷酸酶组成。在其中一实施例中，所述待测个体为哮喘病患者或肺囊性纤维化患者。在其中一实施例中，待测样品来自所述待测个体的血液、尿、唾液、胃液、头发或离体组织。一种用于评价或辅助评价待测个体患变态反应性支气管肺曲霉菌病的危险性的试剂盒，包括用于检测CARD9基因rs4077515多态性位点的物质。一种用于评价或辅助评价待测个体患变态反应性支气管肺曲霉菌病的危险性的检测系统，包括检测单元和数据分析单元；所述检测单元用于检测待测个体的CARD9基因rs4077515多态性位点，并获得检测结果；所述分析单元用于对检测单元的检测结果进行分析处理，评估待测个体患变态反应性支气管肺曲霉菌病的危险性。在其中一实施例中，所述检测结果为CARD9:g.136372044G>A等位基因位点上A所占的百分比。在其中一实施例中，所述分析单元进行评估时，按以下操作进行：判断检测单元的CARD9:g.136372044G>A等位基因位点上A所占的百分比是否大于或等于65％；对于CARD9:g.136372044G>A等位基因位点上A所占的百分比大于或等于65％的待测个体，评估其患变态反应性支气管肺曲霉菌病的概率。本专利技术有益效果如下：rs4077515是人类基因组上CARD9基因的一个单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)位点，该SNP导致Card9基因编码的蛋白质第12位氨基酸由丝氨酸(Serine)变异为天冬酰胺(Asparagine)，即p.Ser12Asn(S12N)。生物信息学分析发现S12N变异位于CARD9分子的CARD结构域，该结构域被认为介导其与Bcl-10和MALT1相互作用形成CBM复合体，该复合体对于激活经典NF-κB(p65)至关重要。本专利技术的申请人将基础试验与临床试验相结合，首次报道CARD9S12N变异在人群中高频存在，且其是烟曲霉菌引起的过敏性支气管肺曲霉病的易感因素。机制上，申请人通过大量的研究首次发现CARD9S12N变异通过影响CARD9与RelB的结合，进而抑制CARD9依赖的MALT1对RelB的切割，促进其核转位，激活非经典NF-κB(RelB)通路及下游靶基因IL-5的转录，促进嗜酸性粒细胞的活化和Th2型免疫反应，促进ABPA的发生。在此过程中，S12N作为一个功能获得性(gain-of-function)变异，激活非经典NF-κB(RelB)，而经典的NF-κB(p65)激活不受影响。另外，申请人还发现，烟曲霉菌感染巨噬细胞可刺激CARD9S12N蛋白通过蛋白酶体途径降解，而野生型CARD9蛋白不受影响。这些结果提示一些致病菌在致病过程中，可能通过调节CARD9蛋白的稳定性，下调机体保护性的经典NF-κB(p65)信号强度，来抵抗宿主的免疫清除。另外，通过对临床病人进一步研究发现，在ABPA患者中有超过50％的病人均为S12N的杂合突变；且对其PBMC研究发现与S12N纯合突变存在类似的表型。进一步研究发现，S12N杂合变异的病人存在等位基因不平衡表达——即ABPA患者优先表达携带S12N突变的等位基因。因此，基于CARD9S12N的不平衡表达只存在于ABPA患者中，可通过建立分子遗传的方法，对ABPA患者的CARD9S12N位点进行检测，通过分析其等位基因位点上A所占的百分比，进而对患者的遗传背景以及其发病机制进行精准的预测和治疗，进而可达到最优本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于检测CARD9基因rs4077515多态性位点的物质在制备评价或辅助评价待测个体患变态反应性支气管肺曲霉菌病危险性的产品或检测系统中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.用于检测CARD9基因rs4077515多态性位点的物质在制备评价或辅助评价待测个体患变态反应性支气管肺曲霉菌病危险性的产品或检测系统中的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述CARD9基因rs4077515多态性位点的基因型表现为AA、AG或GG，当CARD9:g.136372044G>A等位基因位点上A所占的百分比大于或等于65％时，待测个体患变态反应性支气管肺曲霉菌病的危险性相对升高。


3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述rs4077515多态性位点为：以RNA反转录得到的cDNA为模板，采用引物扩增得到的扩增产物的编码CARD9蛋白第12位氨基酸的核苷酸；所述引物由序列表1所示的正向引物和序列表2所示的反向引物组成。


4.根据权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于，用于检测CARD9基因rs4077515多态性位点的物质为：用于直接测序的物质、用于焦磷酸测序的物质、用于基因芯片测序的物质、用于二代测序的物质、用于SNaPShot技术测序的物质、用于TaqMan技术测序的物质、用于聚合酶链式反应与限制性片段长度多态性分析相结合的物质、用于聚合酶链式反应与直接测序法相结合的物质、用于聚合酶链式反应与焦磷酸测序法相结合的物质、用于杂交的方法的物质、用于引物延伸的方法的物质、用于构象分析方法的物质、或用于高分辨溶解曲线分析的物质。


5.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾鑫明，
申请(专利权)人：上海市第十人民医院，
类型：发明
国别省市：上海;31